Western Blot总是狂踩坑？这份实验优化试剂总结请收好！

蛋白质免疫印迹法（也称蛋白印迹、免疫印迹或Western Blot）使用抗体来识别与转印膜结合的特定蛋白质靶标，利用抗体-抗原相互作用的特异性，从复杂的蛋白质混合物（例如细胞或组织裂解液）中鉴定目的蛋白。目前广泛应用于分子生物学、生物化学和免疫遗传学实验中。

然而，Western Blot步骤多、耗时长，忽略每一个细节都可能影响最终的结果。因此我们总结了一份WB专用试剂清单，全方位助您在样品准备、凝胶电泳、转膜步骤过程中避雷，提升实验效率！

◆样品制备

RIPA（Radio Immunoprecipitation Assay）裂解缓冲液，是一种传统的可用于裂解细胞或组织的快速裂解液。通常使用RIPA buffer从组织或细胞中抽提可溶性蛋白，用于后续的WB、IP、co-IP等实验。

然而，不少细胞膜上的功能性蛋白，会形成不溶性的脂筏（Lipid Raft）结构，常规的RIPA buffer不能溶解。SDS 能溶解脂筏但具有很强的变性作用，会破坏蛋白的结构和功能。UltraRIPA buffer kit则能很好地解决这个两难，使用buffer A和buffer B的组合，实现迅速、高效地提取抗去垢剂的脂筏蛋白质，且不会使蛋白失活，后续可对脂筏中蛋白进行下游分析和活性测试。

◆凝胶电泳

WIDE-VIEW™ Prestained Protein Size Marker Ⅲ是预染蛋白SDS-PAGE用分子量标记，可直接使用无需稀释，可以跑出12条偶联染料的有色条带，并且不会发生弯曲，用于指示各条带的位置、判断蛋白质转膜效率。

Phos-tag™ Magenta是最受欢迎的Phos-tag™凝胶荧光染料，无需放射性物质、化学物质标签、抗体，即可在生理pH范围内对SDS-PAGE凝胶的磷酸化蛋白进行特异性染色。另还有多种颜色供选择。

含2-巯基乙醇的传统样品缓冲液（产品编号#196-11022）适用于Laemmli体系凝胶，是一种可广泛兼容各种应用的常规缓冲液。

然而当需要分离分子量范围宽广的蛋白时，只需将独特的大范围分离缓冲液AllView PAGE Buffer替代常规电泳buffer，即可在固定浓度凝胶上实现梯度胶电泳效果，不需要花时间配梯度胶或购买昂贵的商业化梯度胶。

◆蛋白质转印

为了进一步特异性检测靶蛋白，通常需要将蛋白从电泳凝胶上转印到NC膜或PVDF膜上，因此转膜是决定WB成败的最关键因素之一，转膜效率的提升对于优化实验也至关重要。高效转膜液AquaBlot™ 10×High Efficiency Transfer Buffer均通用于湿转和半干转，比传统的Towbin buffer（Tris-甘氨酸）及Towbin SDS buffer效率高。尤其适用于分析磷酸化水平的Phos-tag™凝胶的转印。

Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™，不受氨基酸种类和序列的影响，可直接灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白，无需PVDF膜的封闭处理，无需预先进行电泳分离。其中以BTL-111的灵敏度最高。

使用Phos-tag™ Biotin检测

Immuno-enhancer是免疫印迹抗原抗体反应促进剂。当抗体的反应性不理想时，Immuno-enhancer可以作为稀释液和抗体混合，促进抗原-抗体反应，提高WB检测灵敏度，获得高信噪比的成像效果。

还在排队等成像系统？

Enzo的WESTERNVIEW™ Detection Kit是专用于Western Blot检测的免疫印迹显色试剂。在抗体孵育后加入，无需显影、无需专用设备，即可肉眼观测到低背景、信号持久的清晰条带。无需成像设备和显影液也可使用！

使用抗体孵育后，再用WESTERNVIEW™ Detection Kit (Anti-Mouse)显影