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GenomONE ® 仙台病毒包膜细胞融合试剂
GenomONE ® - CF EX SeV-E (HVJ-E) Cell Fusion Reagents

GenomONE ® -CF EX3015960807313134.png

GenomONE ® 仙台病毒包膜细胞融合试剂



本产品目前无法提供。

FUJIFILM Wako可提供多种转染试剂及重编程试剂,点击下方文字即可查看产品详情:


转染试剂

无需预孵育!导入细胞质的蛋白转染试剂 :ProteoCarry

DNA & siRNA 转染试剂:ScreenFect™ A plus


重编程试剂

StemRNA第三代重编程试剂盒

SRV™ Vector 系列



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  GenomONE®-CF EX 含有仙台病毒包膜和专用缓冲液,可促使细胞融合。

适用于贴壁/悬浮状态的所有细胞,仅需 30 min,即可制备融合细胞和杂交瘤。



◆用途


 制备杂交瘤

● 应用于癌细胞与树状细胞融合的癌症免疫研究

● 应用于内脏来源细胞与干细胞融合的再生医疗研究

● 应用于去核未受精卵的核移植等的发育、繁殖和育种研究

● 替代电融合法、PEG 法




HVJ Envelope(HVJ-E):


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  HVJ 包膜(HVJ-E)是完全灭活和纯化仙台病毒(HVJ*),即只留下细胞膜融合能力的衣壳蛋白包膜。仙台病毒的HN蛋白可与细胞膜外的唾液酸受体结合,通过F蛋白的作用,引起细胞膜融合。在 HVJ-E 中,仙台病毒的基因组 RNA 已经完全失活,在人类和实验动物体内不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和设备,它可以安全地在普通的实验室使用。

*HVJ:日本仙台病毒


HVJ-E 细胞融合原理


在低温(0 - 8℃)条件下,每一个细胞与数百个以上的 HVJ - E 接触,HVJ - E 与细胞膜上的唾液酸受体结合,通过细胞表面吸附(步骤1),细胞通过 HVJ-E 相互连接(步骤2),形成细胞彼此聚集的状态。当该细胞/HVJ-E 的复合物加热到 37℃ 时,细胞膜干扰就会进一步扩大,细胞膜内膜结构也暂时改变。这种变化是短暂的,随后会立即返回到正常结构,但是在这个期间,细胞膜利用强疏水性结合力进行相互融合(步骤3)。


步骤一步骤二步骤三
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应用方法


悬浮法电融合法
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悬浮细胞融合案例


同种细胞融合
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异种细胞融合

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  荧光标记的红(* 1)细胞和绿色荧光标记(* 2)细胞(每1.0×105个)在融合缓冲液 50 μL 混合后,加入 HVJ-E 冰敷5分钟,随后 37℃ 下反应 15 分钟后,融合细胞(黄色)进行了观察。



黏着态和悬浮态细胞融合案例


在粘合状态BHK-21(红)和在浮动状态(绿色)的P19细胞的融合

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胶粘状态的HeLa S3(红)在浮动状态(绿色)的P19细胞的融合

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  荧光标记的(* 1)中的红,附着的细胞在 12 孔平板,绿色荧光标记(* 2)中,添加预先准备的 HVJ-E,来处理漂浮细胞1×105个的悬浮液(融合缓冲污染),并在室温下离心(1000转),每个板5分钟。随后孵育37℃15分钟后,更换增殖用的培养基继续细胞培养。观察3个小时后的融合细胞(黄色)。



和 PEG 法的比较

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  红色荧光标志(* 1)的 ratMSC(骨髓由来老鼠间叶系细胞)和绿色荧光标识的老鼠原代培养心肌细胞2×105个融合缓冲液 50 μL 中混合后,添加 HVJ – E,冰浴5分钟,然后 37℃ 孵育反应15分钟,观察融合细胞(黄色)。1-2日培养后,观察到粘着的融合细胞。在 PEG 法中融合紧接之后细胞毒性强烈,融合细胞的数量很少。



◆安全性说明


HVJ-E 失活的确认(确认无感染性病毒的存在)


1. 

细胞增值实验(荧光灶单元(FFU)法)

处理 LLC-MK2 细胞,一到两天后,病毒生长性的 HVJ 融合蛋白F抗体通过荧光抗体法测定,已证实未检测到病毒蛋白。<制造阶段实验>

2. 

受精卵生长试验(血凝单位测定)

处理受精卵,3天后的病毒增殖,包括在 HVJ 表面的 HN 蛋白的红血细胞聚合活性(HAU)测量作为指标,已经证实,没有看到病毒的生长。<制造阶段实验>

3. 

小鼠感染性研究

鼻腔给药小鼠和未处理小鼠(SIX周)在相同笼中饲养,通过测定血清中的抗 HVJ 抗体滴度进行了个体之间感染性的检测。其结果是,在非给药的情况下未观察到抗体滴度增加,表明未感染 HVJ-E。

4. 

动物个体的遗传基因导入实验

小鼠、大鼠等实验动物的各种药物实验(肺、气管、肝和静脉等)。已证实完全没有病毒感染或是可疑的事例




产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
388-18721  GenomONE ® - CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents
 GenomONE ® - CF EX 仙台病毒包膜(1只装)细胞融合试剂 
1 set
384-18723  GenomONE ® - CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents
 GenomONE ® - CF EX 仙台病毒包膜(1只装)细胞融合试剂 
4 sets
382-18724  GenomONE ® - CF EX SeV-E (HVJ-E) 1 vial Cell Fusion Reagents
 GenomONE ® - CF EX 仙台病毒包膜(1只装)细胞融合试剂 
16 sets

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