近年来，作为旨在理解复杂的神经网络的方法，应用组织透明化技术对大脑进行三维观察的技术备受关注。
CUBIC（Clear, Unobstructed Brain/Body Imaging Cocktails and Computational Analysis）是一种组织透明化技术，由东京大学研究生院 医学系研究科 上田泰己老师、顺天堂大学研究生院医学研究科·医学部 洲崎悦生老师共同开发。
CUBIC-L, R+（M）Trial Kit由对应第二代CUBIC的4种溶液组成，不仅能够实现小鼠组织（包含大脑）和全身的透明化，还能够使狨猴组织（包含大脑）和全身、甚至是人组织块透明化。通过使用该试剂盒进行样品的透明化，能够精确地收集细胞类型、细胞功能、细胞间连接等信息，可更好地进行解析。与第一代 CUBIC 相比，第二代 CUBIC 提高了透明度。
◆试剂盒组成
试剂名称 | 规格 | 试剂用途 |
CUBIC-L Solution | 125 mL×2 | 脱脂、脱色 |
CUBIC-L R+（M）Solution | 125 mL×1 | 调整折射率 |
Mounting Solution 1 | 40 mL×1 | 观察样品用 |
Mounting Solution 2 | 40 mL×1 | 观察样品用 |
◆操作概要
以下是小鼠全脑及组织的透明化步骤。根据样品的大小和种类不同，最合适的实验方案会有所差异。
工序 | 试剂 | 温度 | 时间 |
摘除内脏、灌注固定 | |||
抽血 | D-PBS | 4°C | <5min |
灌流 | 4% PFA | 4°C | <5min |
固定 | 4% PFA in PBS | 4°C | 12-24 h |
脱脂、脱色 | |||
清洗 | 0.01% NaN3 in PBS | RT | >2 h×2 |
前期置换 | 50% CUBIC-L Solution | 37℃ | >6 h |
脱脂、脱色 | 50% CUBIC-L Solution | 37℃ | 2-5 days |
清洗 | |||
清洗 | PBS | RT | >2 h×3 |
折射率调整 | |||
前期置换 | 50% CUBIC-R+（M）Solution | RT | >6 h |
折射率调整 | 50% CUBIC-R+（M）Solution | RT | 过夜 |
CUBIC-R+（M） Solution | RT | 24 h | |
观察 | |||
观察 | Mounting Solution | ||
◆数据
小鼠大脑的透明化实例
（1）荧光蛋白表达与细胞核染色的组合
使用本产品对CAG-EGFP Tg小鼠全脑进行透明化处理，并使用专用的染色试剂盒进行细胞核染色（RedDot2）。在光片显微镜下对染色后的样品进行观察。
（本数据由顺天堂大学研究生院医学研究科·医学部 洲崎悦生老师提供）
（2）细胞核染色与免疫染色的组合
使用本产品对B6N小鼠全脑进行透明化处理后，再使用专用的染色试剂盒进行细胞核染色（SYTOX-G）和免疫染色（NeuN-A594）。染色后在光片显微镜下对样品进行观察。
（本数据由顺天堂大学研究生院医学研究科·医学部 洲崎悦生老师提供）
细胞核染色以及免疫组织染色需要使用单独的试剂，详情请与我们联系。
◆产品列表
产品编号 | 产品名称 | 产品等级 | 产品规格 |
CUBIC-L, R+（M） Trial Kit CUBIC-L, R+（M）试剂盒小包装 | 组织透明化用 | 1 Kit |
◆相关产品
CUBIC Trial Kit
FUJIFILM Wako提供第一代CUBIC试剂「CUBIC Trial Kit」，相比第二代CUBIC试剂拥有以下优点：①透明化过程肉眼可见 ②样品处理过程简单，适合透明化的初学者使用。
（本数据由顺天堂大学研究生院医学研究科·医学部 洲崎悦生老师提供）
产品编号 | 产品名称 | 产品等级 | 产品规格 |
CUBIC Trial Kit CUBIC试剂盒小包装 | 组织透明化用 | 1 Kit |
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
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