Phos-tag™ SDS-PAGE容易受样品中EDTA、无机盐、表面活性剂等的影响，造成条带弯曲、变形。因此上样前样品需要进行预处理。
没进行预处理的示例
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图1 | 图2 |
◆材料准备
- 待处理蛋白样品*
- 1% DOC（脱氧胆酸钠）
- TCA（三氯乙酸），保存在4℃
- 预冷丙酮
*样品中含有的Triton X-100（聚乙二醇辛基苯基醚）、蔗糖等可能会引起沉淀
◆预处理图解
STEP1： 在每200 μL的蛋白样品中加入5 μL 1% DOC
STEP2： 涡旋混匀并在37℃下孵育10分钟
STEP3： 加入200 μL 20% TCA
STEP4： 涡旋混匀并置于冰上5分钟
STEP5： 4℃ 15000 rpm 离心10分钟
STEP6： 去上清
STEP7： 加入500 μL预冷丙酮
STEP8： 简单混匀
● 重复步骤5-8
Step 5：4℃ 15000 rpm离心10分钟
Step 6：去上清（丙酮）
Step 7：加入500μL预冷丙酮
Step 8：简单混匀
Step 9：4℃ 15000 rpm离心10分钟
STEP10：吸出丙酮，小心避开沉淀
STEP11：干燥10分钟
STEP12：加入SDS-PAGE样品缓冲液
STEP13：简单混匀
注意
· 若沉淀不能完全溶于缓冲液，加入1M Tris·Cl以提高pH
STEP14：超声处理
STEP15：100℃ 加热5-10分钟
预处理完整视频请点击此处查看
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