◆硅胶的活化
DCM（CH2CL2清洗硅胶）(进口的不需要清洗，国产的要清洗)
将硅胶装于玻璃柱中
↓
3倍于硅胶体积的甲醇清洗（大约800－1000mL的甲醇）
↓
同体积的DCM清洗（大约500ML的DCM）
↓
将硅胶置于铝箔纸上，通风厨过夜让溶剂挥发干净（或者N2吹干）
↓
马福炉中550℃烘烤至少12hrs,然后降温到180℃停留至少1hr
↓
取出在干燥器中降温后，转制烧瓶中加塞密闭，于干燥器中备用。
Note: 在玻璃柱中清洗时防止硅胶有断层出现
酸性硅胶的配制
30％酸性硅胶的配制
于烧瓶中称取100g活化硅胶
↓
于硅胶上逐滴滴入浓H2SO4共40g(硫酸密度为1.84g/mL)
计算公式为 x/(x+100)=30％， x=42.86g, 42.86/1.84=23.3mL
Note 边加边摇，以防结块，或置于摇床上至硅胶为均匀流动状态。
↓
置于干燥器中保存
若配制时用50g硅胶，那么H2SO4取11.65mL(大约为21.4g)
22%酸性硅胶：8mL浓H2SO4加50g活化硅胶
44%酸性硅胶：43mL浓H2SO4加100g活化硅胶
44%酸性硅胶：21.5mL浓H2SO4加50g活化硅胶
43×1.84/(100+43×1.84)= 44%
Note: 楼上的方法不能用于楼下，因为所用的硅胶不同，色谱行为就不同，即使柱形一样。因为楼上用的硅胶与楼下的不同，所以不能方法混用。楼上硅胶是国产，楼下的是进口的。
碱性硅胶的配制（1.2%）
100g活化硅胶
↓
滴入30g 1 N的NaOH(1N NaOH: 1.2gNaOH溶于30mL水)
注意：不要使硅胶沾到烧瓶的内磨口上，否则盖子关上后容易粘住打不开
↓
楼上用的是33%的碱性硅胶 （水＋NaOH）/(水＋NaOH+硅胶)＝33%
1g NaOH 加到25mL水里，即配制成了1mol/L的溶液，然后加入到50g活化硅胶中。
◆氧化铝
酸性氧化铝的活化
酸性氧化铝装于烧瓶中（体积不超过一半）
↓
用铝箔纸疏松的盖住瓶口
↓
在干燥烘箱中130℃过夜（至少12hrs）
↓
干燥器中加塞密闭
↓
干燥器中备用
碱性氧化铝
（最好在两周内使用，后者最好在5天内用完，否则易失活，可能需要重新活化）
碱性氧化铝盛于蒸发皿中
↓
马福炉中600℃烘至少24hrs
↓
降温到130℃停留至少3hrs
↓
干燥器中降温后转至烧瓶中，于干燥器中备用
弗罗里土：Florisil(硅酸镁)
150mm×5mmID小柱底部用玻璃棉轻轻塞住
↓
取1g 弗罗里土装于柱子中，并且轻轻拍动柱子让填料均匀沉降
↓
上层再装约1cm的无水Na2SO4
↓
50mL DCM清洗小柱
↓
卸去四氟阀，放于通风橱中过夜，让溶剂挥发干
↓
整个柱子置于干燥烘箱中，140℃至少24hrs
↓
如不使用则在140℃下存放
Note：使用时将柱取出降至室温，90分钟内使用，否则重新活化。
AgNO3 硅胶（10%）的配制
5.6g AgNO3溶于21mL超纯水中
↓
逐滴加入到50g活化硅胶中（或者11.2g AgNO3+35mL水+100g硅胶）
↓
用铝箔纸将装AgNO3硅胶的烧瓶全部包裹住，
烧瓶口用铝箔纸疏松地盖住，置于干燥烘箱中。
↓
烘箱中30℃烘5hrs(至少5hrs)
↓中间慢点升温
升温到60℃停留3hrs
↓
干燥器中降温后加塞密闭（保存在棕色干燥器中备用）
Note： 如果在制作过程中发现AgNO3硅胶颜色加深
或者局部变为灰黑色，应该弃去此次配制。变色原因：升温过快。
Note： 装AgNO3的小烧杯要尽快用超纯水洗净，
否则AgNO3会粘到烧杯上，不容易洗干净。
Na2SO4： 660℃下马福炉中烘至少6 hrs（优级纯）
注意：提取筒洗过后要在马福炉里420℃烘一段时间
纯化注意事项：
1. 所有纯化柱均采用干法装制；
2. 装好填料后轻拍柱子至填料表层平整；
3. 一旦加上洗脱液后，则不要再拍动柱子；
4. 一定量的hexane预淋洗进行稳定，并且除去部分污染杂质；
5. 预淋洗时流速控制在2滴/S;
6. 填料若出现断层则不能再使用；
7. 上柱样品后，用1mL正己烷清洗烧瓶；
8. 要等上一组分液面约1mm时再上样；
9. 若是做流出曲线，对体积要求就会严格一些，接流出物的量筒用铝箔包上，
防止溶剂挥发。
酸洗or酸性硅胶柱：1.5cm内径（15mmID）
结构式 －Si－O－
玻璃毛填充
↓
5g 44%酸性硅胶
↓
5g 22%酸性硅胶（这个是为了防止44%硅胶发生炭化）
↓
2g活化硅胶
↓
2 cm无水Na2SO4
↓
50mL---70mL的Hexane淋洗
↓
样品上样
↓
70mL---100mLHexane洗脱
↓
旋转蒸发至2---3mL
淋洗用的Hexane量由所加的硅胶量决定，若酸性硅胶（22%+44%）一共才10克，就不用100mLHexane洗脱，70mL足够，太多反而将杂质洗脱下来了。预淋洗用溶剂量也不一定要50mL—70mL,由硅胶量决定。
酸洗前一定要记住：一定要将溶剂置换为Hexane再酸洗。
硫酸硅胶柱净化容量不足，杂质易与dioxin 及PCBs竞争氧化铝及florisil的活性基位（Active sites），使dioxin 及PCBs在流洗过程中损失，降低了回收率。故acid silica要不能被穿透为止（由管柱的颜色外观可以判定是否被穿透）
Note：酸洗前，若样品溶剂为DCM，要将DCM置换成Hexane，CH2CL2不能与H2SO4混合，过酸性柱前将甲苯溶剂也要置换为Hexane,甲苯剩下的越少越好。
酸洗：（注意酸洗最多次数不要超过3次，否则影响回收率）
在溶液中加入15g酸性硅胶和搅拌磁子，在磁力搅拌器上搅拌30mins
↓
取上清液过无水Na2SO4小柱
↓
剩下的硫酸硅胶用10－20 ML的Hexane清洗两次（于磁力搅拌器上搅拌各10分钟）
↓
每次清洗后过无水Na2SO4小柱，一并收集
↓
合并后收集浓缩
酸性硅胶柱可以吸附许多离子或者非离子性官能基化合物，包括生物碱，糖脂，配糖物（醣），
染料，碱金属离子，脂质，甘油，类固醇，可塑剂，多环芳香族化合物及酚类衍生物等。
酸碱硅胶柱纯化（复合硅胶柱）30cm×15mmID
底部有200目玻璃砂芯和四氟磨口阀
1g活化硅胶 ↓ 4g碱性硅胶 ↓ 1g活化硅胶 ↓ 8g酸性硅胶 ↓ 2g活化硅胶 ↓ 1cm无水Na2SO4 ↓ 100mLHexane预淋洗 ↓ 75mLHexane洗脱 | 1g活化硅胶 ↓ 4g碱性硅胶 ↓ 1g活化硅胶 ↓ 8g酸性硅胶 ↓ 1g活化硅胶 ↓ 2gAgNO3硅胶 ↓ 2cm无水Na2SO4 ↓ 100mLHexane预淋洗 ↓ 上样后用150mL (DCM/Hexane=5/95)洗脱 |
楼下的方法 ： 先用100mLHexane预淋洗， 上样后用150mL洗脱。 DCM/Hexane＝5/95 |
楼上的方法 ： 先用70mL---90mLHexane预淋洗， 上样后，用100mLHexane洗脱。 |
注意：AgNO3硅胶不要加得太多，它对PCBs有吸附作用，AgNO3硅胶尽量称得准确些，它对流出曲线影响较大些（AgNO3有一定的极性）
分析PBDE时，要用铝箔纸将层析柱包上，防光（PBDE与AgNO3都要防光）
分析PBDE时是一样的柱子，一样的填料，洗脱是先100mLHexane预淋洗，上样后先用70mLHexane洗，弃去，再用70mL 1：1（DCM/Hexane）洗，这时洗下的就是含有PBDE的成分。
氧化铝纯化柱： 30cm×15mmID玻璃柱
旋蒸时留1mL左右，因为弗罗里土纯化柱太细，要减小上样的高度，洗脱时注意控制流速，不能太快，塞子不要垂直，倾斜既可
弗罗里土纯化柱： 柱型 150mm×5mmID
玻璃棉
↓
1g弗罗里土
↓
1cm无水Na2SO4
↓
50mL DCM清洗
↓
溶剂挥发（要卸下塞子）
↓
140℃下至少烘24hrs
↓
冷却后90min内使用（装上塞子）
↓
50mLHexane预淋洗
↓
35mL收集PCBs（30mL-35mL洗脱）DCM:Hexane(5:95,V:V)
↓
DCM（二氯甲烷）40mL-45mL收集dioxins
◆生物组织脂肪含量测定和去除
提取脂肪前烧瓶称重
↓
提取液转移至此烧瓶旋转浓缩近干后移至N2流下将多余溶剂吹走，直至天平称重无变化（百分位天平）
↓
称量提取后烧瓶重
↓
两次重量差即为脂肪
脂肪含量＝【（提取后烧瓶重－提取前烧瓶重）/提取样】×（1－组织水分百分含量）
↓
称脂后加50mLHexane溶解提取物
↓
15g酸性硅胶，搅拌磁子
↓
搅拌30mins
↓
过无水Na2SO4小柱
↓
5mLHexane清洗两次
↓
合并收集后浓缩
楼上氧化铝0.8 cmID,细柱，半湿法装柱
若是1.0cmID,则Al2O3用10g
柱中加30mLHexane
↓
8g Al2O3
↓
1cm Na2SO4
↓
预淋洗（30mL-40mLHexane洗脱）
↓
上样
↓
DCM/Hexane＝5：95 100mL洗脱PCBs
DCM/Hexane＝1:1 50mL洗脱dioxins
◆凝胶渗透色谱 GPC
填料： Bio-Beads SX3
GPC 柱型 30cm×25mmID(柱子下面有砂芯)
填料 30g于烧杯中
↓
加入DCM:Hexane（1：1，V：V）全部盖住
↓
铝箔纸盖住烧杯置于通风橱过夜，至少12hrs,填料充分溶胀
↓
搅动填料，并用吸管逐步将填料转移到柱中，中间打开四氟阀放去多余的溶剂
↓
全部转移后，上部留有10cm溶剂
↓
上端加塞，底部关阀
↓
整个柱子倒置后打开阀门
↓
振荡柱体，使填料逐渐整体均匀倒置
↓
关闭阀门，将柱子缓慢扶正，并且打开上面的磨口塞，可以看到填料均匀沉降直至完全
↓
应该无断层，无气泡，无沉降分界层
↓
500mL DCM：Hexane（1:1 ,V:V）淋洗，（注意要将溶剂混合均匀）
滴速 2－3滴/S
不用时关阀加塞密闭，上层留有5CM以上的溶剂，GPC使用溶剂均为DCM：
Hexane（1：1，V:V）若长时间没用，纯化前用100mL溶剂预淋洗
◆GPC洗脱
DCM：Hexane(1:1,V:V)
↓
100mL 预淋洗（量筒接）量筒1
↓
上样后，先用50 mL DCM：Hexane(1:1,V:V)去掉大分子（量筒接）量筒2
↓
另外量筒接70mL(DCM/Hexane=1/1)为PCB 量筒3
↓
另外量筒接50mL,量筒4
↓
量筒4与量筒250mL合并保存，以防重复实验时回收再分析
注意：
1．若GPC柱中物料层有气泡，则上面用塞子堵上，稍微晃一下柱子可以去除。若溶剂干了会造成断层。
2．GPC柱用前由于重心作用，上层发胀，所以需要释放一段洗脱溶剂，将发胀部分压下去，再上样。
◆N2吹
纯化后样品旋转蒸发
↓
转移入KD管后N2吹
↓
剩下0.2-0.3mL左右
↓
进样小瓶瓶芯中加15uL的壬烷
↓
Kd管中样品转移至瓶芯
↓
N2吹（温度不要太高30℃－60℃，太高有损失）
↓
洗KD管用DCM or Hexane至少洗2次，合并到进样小瓶瓶芯中
N2吹至瓶芯拐弯处上1mm－2mm处
↓
加入回收标保证进样小瓶中最后溶液约为20µL左右
↓
涡轮
注意 ：进样小瓶与瓶芯大小要搭配
加标前标准溶液需要提前从冰箱中拿出来平衡大约10几分钟
配制标准溶液： 举例
PBB标样转移到棕色小瓶A
↓
小瓶A用DCM清洗3次（涡轮）
↓
贴标签纸（标签纸不要贴太大，用透明胶贴一下）
↓
称空瓶重量W0
↓
将装标样的安培小瓶B按划线掰开
↓
DCM清洗一下滴管，晾干，用滴管将标样安培瓶里的标准溶液吸出转移入小瓶A
↓
称量装标后的小瓶与标的重量W1
↓
那么W1-W0即为取的标的重量
C18柱结构式： －Si－C18H37
目的：清除极性物质，ex: 蛋白，脂质
铜粉去S前铜粉的准备
铜粉置于烧瓶中
↓
6MHCL倒入清洗，不锈钢药勺搅拌
↓
倒掉HCL，超纯水清洗数次，洗净HCL为止
↓
倒入丙酮清洗数次，将水洗净
↓
将铜粉晾干备用（晾干的方法可以用N2吹干）
分析PBDE时所用的方法
1.5 g AgNO3装到柱子里（30cm×15mmID玻璃柱）
↓
50mL or 30 mL Hexane预淋洗
↓
100mL Hex洗PCB+dioxin
↓
50mL 10%DCM+90% Hexane洗PBDE
欲了解更多相关产品请点击文字：
| 免责声明 |
|
1. 本公司密切关注本网站发布的内容，但不保证发布内容的准确性、完整性、可靠性和最新性等。 2. 本公司不保证使用本网站期间不会出现故障或计算机病毒污染的风险。 3. 无论何种原因，使用本网站时给用户或第三方造成的任何不利或损害，本公司概不负责。此外，对于用户与其他用户或第三方之间因本网站发生的任何交易、通讯 3. 或纠纷，本公司概不负责。 4. 本网站可提供的所有产品和服务均不得用于人体或动物的临床诊断或治疗，仅可用于科研等非医疗目的。如任何用户将本网站提供的产品和服务用于临床诊断或治 4. 疗，以及其他特定的用途或行为，本公司概不保证其安全性和有效性，并且不负任何相关的法律责任。 |
