试剂怎么用——WB用膜

Wako




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即使是为同一目的所用的试剂种类繁多,同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。

因此,经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。

为了解决这样的问题,小光老师将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。



◆WB用膜


● 硝酸纤维素膜

硝酸纤维素膜是由纤维素羟基经硝酸酯化而形成的,主要通过疏水相互作用进行蛋白的非特异性吸附。因其易于处理并且可以长期储存的特点,一直被作为印迹膜使用。它具有亲水性,因此无需用甲醇进行预处理。但强度较弱,蛋白的结合能力为~100 μg/cm2,比其他膜小,转录时间过长可能会使已转录的蛋白再次游离。


● 尼龙膜

尼龙膜使用了经尼龙或胺化学改性的尼龙。比硝酸纤维素膜具有更好的蛋白结合能力,尤其是经化学改性的尼龙膜带有正电荷,与带负电荷的蛋白发生强烈的静电相互作用。但由于容易发生蛋白以外的非特异性吸附,必须进行充分的封闭处理。


● PVDF膜

PVDF膜是以聚偏二氟乙烯(PVDF) 为支撑的膜,可通过疏水相互作用吸附蛋白。虽然预处理时需要使用甲醇,但其具有较大的蛋白结合能力、优异的强度和化学相容性,因此经常被用作印迹膜。



膜种类及性质


产品名称
产品编号

蛋白结合能力

优点

缺点

硝酸纤维素膜

ClearTrans® Nitrocellulose Membrane, 0.45μm
037-25653

~100 μg/cm2

操作简单。便宜。

蛋白结合容量小。
    强度低。

尼龙膜

ClearTransR Nylon Membrane, 0.45μm
039-22673

~210 μg/cm2
改性尼龙约为500 μg/cm2

蛋白结合容量大。

容易发生目标蛋白以外的非特异性吸附。
无法进行染色。

PVDF膜

ClearTrans® SP PVDF Membrane, Hydrophobic, 0.2μm
033-22453

300~400 μg/cm2

蛋白结合容量大。
强度高。

需要甲醇处理。


【要点】 膜孔径


用于Western blotting的膜孔径有0.45 μm和0.2 μm。通常使用的是0.45 μm,但转录15 kDa或更小分子量的蛋白质时,0.2 μm具有更高的结合效率并且可以抑制吸附后的游离。



◆参考文献



1)口野嘉幸,平井久丸,櫻林郁之介 編:「遺伝子・タンパク質 実験操作 ブロッティング法」(ソフトサイエンス社)(1987).

2)大藤道衛 編:「電気泳動なるほどQ&A」(羊土社)(2005).

3)森山達哉 編:「バイオ実験で失敗しない! 検出と定量のコツ」(羊土社)(2005).



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