Q：如何分析我的数据？什么叫4参数法（4-PL curve-fitting）？

A：为了获得更准确的结果，我们推荐使用4参数法（4 parameter logistic(4-PL) curve fitting software）。使用4-PL的数据发现在一定范围内有更好的线性方程。在免疫检测中，剂量对应的曲线很少是直线的。寻找更适合于你数据的曲线模式（curve fit），你会得到更准确的样品值。如果没有这个软件，你需要手动将这些数据在数据纸上标出。大多数酶标仪都带有该软件。

Q：为什么我的OD值跟操作手册上的有差别？

A：实际测得的OD值和操作手册上的会有出入。受温度影响，OD值会有波动。为了避免这个问题，不要将板放在寒冷的实验室或者放在室温进行孵育。如果与底物在25~37℃孵育，信号相对会改进。

Q：为什么在培养基中测到的标准品数据不一样？

A：培养基的血清经常会引起问题。为了避免这个问题，在制备标准品梯度液时，在室温将非条件性培养基和标准品充分混合。血清的密度比水大，如果混合不充分，会沉淀在管底。

Q：推荐的样品最小稀释比是多少？是否可以稀释更少些？

A：在检测中，样品稀释是为了排除样品基质的干扰（matrix interference）。一般，数据来自每个基质的样品，使用线性，加样&回收和平行。对于特定的样品是必须要进行稀释的。需要各自摸索条件，确认样品的最佳稀释比例。我们不建议不做任何测试就进行检测。如果样品的含量较低，建议抽提样品。

Q：如何判断我的样品是需要稀释还是抽提？

A：如果你的样品经过推荐的最小稀释比稀释后检测值在试剂盒的检测范围内，那就稀释样品后直接进行检测。如果你的样品低于检测最小值，抽提和浓缩是必须的。有些试剂盒需要进行抽提，这个在操作手册有说明。

Q：试剂盒可以检测什么物种？

A：如果在所有物种中分子都是保守的（比如：类十二烷酸，类固醇），那这些试剂盒可以检测任意物种。试剂盒名字里面包含了了某个物种（比如，人），那就是检测某个物种的。如果操作手册里面没有提到适合于哪个物种，那么经常是任何物种都可以检测的。也可以在相关网站查到信息。

Q：过期后多久我还可以使用ELISA试剂盒？

A：ELISA试剂盒一旦过期，不能保证实验结果。然而，ELISA试剂盒不是一过保质期就失效，而是要隔一段时间。虽然过了保质期试剂盒的质量不能保证，但是可以从标准曲线的好坏判断试剂盒的质量。如果标准品降解的话，试剂盒就不能使用了。这个还是要使用者自己判断。请记住过期的试剂盒不能更换。

Q：是否可以用分光光度计读数？

A：不行。除非操作手册上有提到这么做。大多数酶联免疫检测和ELISA试剂盒需要用微孔板读数仪（适当波长）进行读数样品。体积过小，也不能读数。

Q：试剂盒的回收率怎么算？
A：回收=（混合液浓度-测样品浓度）/标准品浓度。
      1、配置好标准曲线的浓度作为标准曲线，然后分别取样品溶液200uL，加入200uL浓度不等的标准溶液，混匀，最后将标准溶液、样品溶液及混匀的溶液各100uL分别加入96孔板中，elisa实验测OD值，回收=（混合液浓度-测样品浓度）/标准品浓度。（备注：样品需要前处理来制的）
      2、在样品前处理时加入不同浓度的标准品溶液，此时与样品处理同时进行，然后配置标准溶液作为标准曲线，将标准液、样品及样品加标液同时加入96孔板中，测OD，回收=（混合液浓度-测样品浓度）/标准品浓度）。如果你的标准溶液在检测前也是需要进行提取或者处理的，那么就先加标再处理，如果你的标准溶液不需要在进行处理，那么就先处理样品再加标。总之要保持标准曲线和样品得到了相同（同等程度）的处理就OK了。

Q：如何克服样品基质的干扰？
A：最简单的方法用试剂盒内的assay buffer稀释你的样品。为了决定需要的最小稀释比例，用一个样品分成2份（spiked和unspiked 样品）。1份，添加已知的标准品数量。用assay buffer系列稀释spiked和unspiked 样品（eg：1:2,1:4,1:8,1;16，或者你需要的），然后检测这些样品。每个稀释比例都确定（determine）浓度和回收率（% recovery）。当回收率在spiked analyte amount的80%~120%时，是最小稀释比例。样品的稀释比例最佳的是在检测的标准曲线范围内。否则，按照试剂盒的说明（kit insert）进行操作。

Q：如何用EXCEL 制作竞争性ELISA 的标准曲线？（如ADI-901-163、ADI-900-153A等）
A：Average Net OD = Average OD- Average NSB OD
      Percent Bound = Net OD /Net Bo OD x 100
      Excel程序，y轴为percent bound，x轴是标准品的浓度。
      开始-插入-散点图-添加趋势线-对数，显示R值和公式即可。对数方程式。
      公式是 y = a*ln(x) + b，x = inv ln [(y - b) / (a)]或者 x = e^[(y - b) / (a)].

Q：ELISA 试剂盒的包被板是否可拆卸？
A：Enzo提供的所有ELISA试剂盒内的包被板均可拆卸，一般规格为12×8。