强干扰样品中的内毒素检测方法

　　注射类药物产品的内毒素污染可导致严重后果，包括发烧、败血症和败血性休克。因此，内毒素检测已成为注射类处方药、医疗器械生产和质量控制的必要检测。

　　鲎试剂（LAL) 检测是内毒素评估的最佳成熟检测方式¹⁾。其主要采用鲎的变形细胞提取物与待检测内毒素污染样品进行孵育，如果分析样品中存在内毒素，则会形成凝块。最传统的LAL检测方法是定性的凝胶法。随后，开发了定量LAL检测方法，包括显色法和浊度法。

　　LAL检测的准确性和可靠性已得到证实。然而，被测产品、检测剂成分、环境甚至容器相关的各种因素可能会导致测试难以进行或出现误导性结果，其中包括样品干扰或内毒素掩蔽剂^2-4)。可能干扰LAL检测的因素包括化学抑制剂（如乙二胺四乙酸，EDTA）；变性剂（如浓酸、碱、无机盐或有机溶剂）；碱化乙醇分子；超出最佳范围的pH值；内毒素掩蔽剂（赋形剂、表面活性剂、螯合剂或 N-二甲基氧化胺等物质）；或内毒素被容器表面吸收¹⁾。对于医疗器械，抗凝涂层、重金属含量或微粒的存在可能会干扰测试结果²⁾。对于使用显色法检测的样品，与 鲎试剂接触时，检测混合物中的特定颜色也会干扰测试结果¹⁾。对于用浊度法检测的样品，样品中的浑浊或悬浮也可能导致干扰¹⁾。

　　以下整理了内毒素检测中不同的抗干扰方法，以降低样品干扰或内毒素掩蔽的因素给实验结果带来的影响：

◆适当稀释样品

　　如果在LAL检测过程中没有干扰或增强效应，可以对未稀释的样品进行检测。如果样品存在干扰LAL检测的成分，则应稀释样品以减少干扰或增强。建议确定最大稀释倍数，保证减少干扰效应但仍可进行内毒素测定²⁾。

◆消化、使用缓冲液、过滤或离心

　　这些都是降低医疗设备检测干扰的潜在处理方法²⁾。具体选用哪种操作应取决于对实验干扰因素的评估和对检测条件的验证。

◆保持最佳pH范围

　　LAL检测的最佳 pH 范围在6.0–8.0范围内，检测条件应保持在此范围内以确保结果一致。

◆保证样品的均匀性

　　悬浮样品可能会导致干扰问题。因此，应尽量保证样品的均匀性。在这种情况下，不建议混合来自制造过程不同阶段的样品，因为难以确保不同阶段产品可以混合均匀²⁾。

◆调整混合样本的最大有效稀释倍数（MVD）

　　某些情况下，小体积单位的成品药可能会合并成复合样品，再进行LAL检测。在这种情况下，应通过将单个样品计算的的MVD除以合并样本的总数，按比例将MVD调整为较低值²⁾。

◆使用在LAL 检测经过充分验证的试剂和样品容器

　　由于鲎试剂和样品容器的成分也可能对检测结果产生负面影响⁴⁾，因此建议使用经充分验证的鲎检测和样品容器。

◆相关产品

内毒素特异性鲎试剂PYROSTAR™ ES-F 系列（凝胶法/动态浊度法）

内毒素特异性鲎试剂Limulus Color KY（动态显色法）

◆参考文献

1) Wheeler, A. Comparing endotoxin detection methods. Pharmaceutical Technology 2017;41:58–62.

2) FDA. Guidance for industry: pyrogen and endotoxins testing: questions and answers. June 2012.

3) Reich J, Lang P, Grallert H, Motschmann H. Masking of endotoxin in surfactant samples: Effects on Limulus-based detection systems. 

    Biologicals. 2016;44(5):417-22. doi: 10.1016/j.biologicals.2016.04.012.

4) Bech Ørving R, Carpenter B, Roth S, Reich J, Kallipolitis B, Sonne-Hansen J. Bacterial Endotoxin Testing-Fast Endotoxin Masking Kinetics

    in the Presence of Lauryldimethylamine Oxide. Microorganisms. 2020;8(11):1728. doi: 10.3390/microorganisms8111728.