◆前言
小胶质细胞是脑实质中的主要常驻免疫细胞,发挥多种作用,如释放细胞因子并杀死外来细胞和死亡细胞。有报道称巨噬细胞也会驻留在中枢神经系统(CNS)的特定区域,这些巨噬细胞被称为中枢神经系统相关巨噬细胞(CAM),存在于脑膜和血管周围空间中,其特性与小胶质细胞非常相似。要了解真正的小胶质细胞动力学以及它们与中枢神经系统疾病的因果关系,准确区分小胶质细胞和巨噬细胞至关重要。
◆P2RY12是什么?
P2RY12(也称为 P2Y12)是一种腺苷 5'-二磷酸 (ADP) 受体,也是嘌呤能 G 蛋白偶联受体 P2Y 家族的成员。P2RY12在外周组织的血小板中表达,也在中枢神经系统的稳态小胶质细胞(Homeostatic Microglia)中特异性表达,因其几乎不在巨噬细胞中表达,是区分存在于脑血管周围的巨噬细胞和小胶质细胞的有效标志物1)!
此外,ADP可用作细胞损伤的信号,小胶质细胞中的P2RY12被认为在接收神经细胞损伤方面发挥作用。
◆富士胶片和光纯药的Anti P2RY12抗体
FUJIFILM Wako的Anti P2RY12 抗体为豚鼠来源多克隆抗体,可用于免疫组织染色的多重染色。
产品信息
编号 | 名称 | 规格 | 反应性 | 应用 |
抗P2RY12,豚鼠源 | 100 μL | 小鼠 | IHC(F) |
产品特点
● 特异性高
● 清晰地检测细微的突起结构
● 豚鼠来源,轻松完成多重染色抗体搭配
性能数据
▼ 与抗Iba1抗体比较
使用抗P2RY12抗体和抗Iba1抗体对小鼠大脑(冰冻切片)进行免疫组织染色。
<数据提供> 京都工艺纤维大学 应用生物学系 宫田老师 |
■ 使用抗体
P2RY12
一抗:抗 P2RY12,豚鼠(产品编号:011-28873,本产品)1︰1,000
二抗:Alexa Fluor® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L)(产品编号:568-77901)
Iba1
一抗:抗iba1,兔源(免疫细胞化学用)(产品编号:019-19741)1︰1,000
二抗:Alexa Fluor® 594-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (产品编号:566-80511)
【结果】
已确认P2RY12信号和Iba1信号的共定位。
▼ 鉴别小胶质细胞和巨噬细胞
使用抗P2RY12抗体(小胶质细胞标志物)、抗 Iba1抗体(小胶质细胞/巨噬细胞标志物)和抗层粘连蛋白抗体(脑血管基底膜标志物)对小鼠大脑皮层和延髓末端的冰冻切片进行三重染色,确认细胞定位。
<数据提供> 京都工艺纤维大学 应用生物学系 宫田老师 |
■ 使用抗体
P2RY12
一抗:抗P2RY12,豚鼠(产品编号:011-28873,本产品)1︰1,000
二抗:Alexa Fluor® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L)产品编号:568-77901)
Iba1
一抗:抗iba1,兔源(免疫细胞化学用)(产品编号:019-19741)1︰1,000
二抗:Alexa Fluor® 594-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (产品编号:566-80511)
层粘连蛋白
一抗:抗层粘连蛋白抗体(大鼠,宫田老师实验室制备)1︰200
二抗: DyLight™ 405 结合AffiniPure 山羊抗大鼠 IgG (H+L)(生产商编码:112-475-003)
【结果】
Iba1阳性细胞中,脑实质内的细胞呈P2RY12阳性,可能是小胶质细胞(三角箭头)。 而Iba1阳性/P2RY12阴性的细胞存在于脑血管基底膜周围,这些细胞可能是巨噬细胞(箭头)。
▼ 与抗Iba1抗体和抗TMEM119抗体比较
使用抗P2RY12抗体、抗Iba1抗体和抗TMEM119抗体对小鼠大脑和脊髓(冰冻切片)进行免疫组织染色。
■ 使用抗体
P2RY12
一抗:抗P2RY12,豚鼠(产品编号:011-28873,本产品)1︰1,000
二抗:Alexa Fluor® 647 AffiniPure Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)(产品编号:566-78421)
Iba1
一抗:抗iba1,山羊源(产品编号:011-27991)1︰1,000
二抗:Alexa Fluor 488 AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) (产品编号:561-78351)
TMEM119
一抗:其他公司 抗TMEM119抗体 (兔源) 1︰100
二抗:Alexa Fluor® 594-AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (产品编号: 561-78471)
【结果】
与抗TMEM119抗体相比,使用FUJIFILM Wako的抗P2RY12抗体染色能更清晰地检测细微的突起结构。
▼与其他公司产品比较
使用本产品和其他公司的抗P2RY12抗体对小鼠大脑和脊髓(冰冻切片)进行免疫组织染色。
■ 使用抗体
本产品
一抗:抗 P2RY12,豚鼠(产品编号:011-28873,本产品)1︰1,000(抗体浓度:0.5 μg/mL)
二抗:Alexa Fluor® 488 AffiniPure Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)(产品编号:562-78401)
其他公司产品
一抗:其他公司 抗P2RY12(兔源)1︰200(抗体浓度:0.5 μg/mL)
二抗:Alexa Fluor® 488 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (产品编号:567-78451)
【结果】
传统产品中可观察到神经细胞的非特异性信号(三角箭头),而本产品中几乎检测不到非特异性信号。
参考文献
1.Butovsky, O. et al.: Neurosci., 17(1), 131(2014).
Identification of a unique TGF-β–dependent molecular and functional signature in microglia
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