抗P2RY12，豚鼠
Anti P2RY12, Guinea Pig
P2RY12（也称为 P2Y12）是一种腺苷 5'-二磷酸 (ADP) 受体，也是嘌呤能 G 蛋白偶联受体 P2Y 家族的成员。它在外周组织的血小板中表达，也在中枢神经系统的稳态小胶质细胞（Homeostatic Microglia)中特异性表达。由于P2RY12几乎不在巨噬细胞中表达，所以它是用于区分存在脑血管周围的巨噬细胞和小胶质细胞的有效标志物1）。此外，ADP可用作细胞损伤的信号，小胶质细胞中的P2RY12被认为在接收神经细胞损伤方面发挥作用。
本产品为豚鼠来源多克隆抗体，可用于免疫组织染色的多重染色。
外观：液体
浓度：蛋白浓度 0.45～0.65 mg/mL
◆抗体信息
抗体种类 | 多克隆抗体 |
抗原 | P2RY12的合成肽 (C端同源序列) |
免疫动物 | 豚鼠 |
组成 | PBS、0.05% 叠氮化钠 |
标记 | 未标记 |
交叉性 | 小鼠※ |
应用 | 免疫组织染色（冰冻切片） 1︰500-2,000 |
※ 大鼠的染色实例请查看下方“数据”部分。
◆Protocol（示例）
1. 灌注固定：使用柠檬酸钠/PBS灌注除血后，4% PFA灌注
2. 后固定： 4% PFA (～24 h)
3. 蔗糖替换：30%蔗糖/PBS（4℃，过夜~约2天）
4. 制备冰冻切片：去除蔗糖后，制备冰冻包埋块，并用低温恒温器制备30 μm厚的切片
5. 封闭：5% 正常山羊血清，0.3% Triton X-100/PBS（4℃，过夜）
6. 一抗：抗 P2RY12，豚鼠（1︰1,000），1% 正常山羊血清，0.3% TritonX-100/PBS（4℃，过夜~2 天）
7. 清洗：0.3% TritonX-100/PBS (5 min×3次)
8. 二抗：Alexa Fluor® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L) (1:500) （产品编号： 568-77901), 1% 正常山羊血清，
0.3% TritonX-100/PBS (室温，2 h)
9. 清洗：0.3% TritonX-100/PBS (5 min×3次)
10. 封装：封片剂封装，4℃下避光存储
◆数据
性能数据
▼ 与抗Iba1抗体比较
使用抗P2RY12抗体和抗Iba1抗体对小鼠大脑（冰冻切片）进行免疫组织染色。
| <数据提供> 京都工艺纤维大学 应用生物学系 宫田老师 |
■ 使用抗体
P2RY12
一抗：抗 P2RY12，豚鼠（产品编号：011-28873，本产品）1︰1,000
二抗：Alexa Fluor® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L)（产品编号：568-77901）
Iba1
一抗：抗iba1，兔源（免疫细胞化学用）（产品编号：019-19741）1︰1,000
二抗：Alexa Fluor® 594-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (产品编号：566-80511)
【结果】
已确认P2RY12信号和Iba1信号的共定位。
▼ 鉴别小胶质细胞和巨噬细胞
使用抗P2RY12抗体（小胶质细胞标志物）、抗 Iba1抗体（小胶质细胞/巨噬细胞标志物）和抗层粘连蛋白抗体（脑血管基底膜标志物）对小鼠大脑皮层和延髓末端的冰冻切片进行三重染色，确认细胞定位。
| <数据提供> 京都工艺纤维大学 应用生物学系 宫田老师 |
■ 使用抗体
P2RY12
一抗：抗P2RY12，豚鼠（产品编号：011-28873，本产品）1︰1,000
二抗：Alexa Fluor® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L)产品编号：568-77901）
Iba1
一抗：抗iba1，兔源（免疫细胞化学用）（产品编号：019-19741）1︰1,000
二抗：Alexa Fluor® 594-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (产品编号：566-80511)
层粘连蛋白
一抗：抗层粘连蛋白抗体（大鼠，宫田老师实验室制备）1︰200
二抗： DyLight™ 405 结合AffiniPure 山羊抗大鼠 IgG (H+L)（生产商编码：112-475-003）
【结果】
Iba1阳性细胞中，脑实质内的细胞呈P2RY12阳性，可能是小胶质细胞（三角箭头）。 而Iba1阳性/P2RY12阴性的细胞存在于脑血管基底膜周围，这些细胞可能是巨噬细胞（箭头）。
▼ 与抗Iba1抗体和抗TMEM119抗体比较
使用抗P2RY12抗体、抗Iba1抗体和抗TMEM119抗体对小鼠大脑和脊髓（冰冻切片）进行免疫组织染色。
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■ 使用抗体
P2RY12
一抗：抗P2RY12，豚鼠（产品编号：011-28873，本产品）1︰1,000
二抗：Alexa Fluor® 647 AffiniPure Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)（产品编号：566-78421）
Iba1
一抗：抗iba1，山羊源（产品编号：011-27991）1︰1,000
二抗：Alexa Fluor 488 AffiniPure Donkey Anti-Goat IgG (H+L) (产品编号：561-78351)
TMEM119
一抗：其他公司 抗TMEM119抗体 (兔源) 1︰100
二抗：Alexa Fluor® 594-AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (产品编号： 561-78471)
【结果】
与抗TMEM119抗体相比，使用FUJIFILM Wako的抗P2RY12抗体染色能更清晰地检测细微的突起结构。
▼与其他公司产品比较
使用本产品和其他公司的抗P2RY12抗体对小鼠大脑和脊髓（冰冻切片）进行免疫组织染色。
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■ 使用抗体
本产品
一抗：抗 P2RY12，豚鼠（产品编号：011-28873，本产品）1︰1,000（抗体浓度：0.5 μg/mL）
二抗：Alexa Fluor® 488 AffiniPure Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L)（产品编号：562-78401）
其他公司产品
一抗：其他公司 抗P2RY12（兔源）1︰200（抗体浓度：0.5 μg/mL）
二抗：Alexa Fluor® 488 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) (产品编号：567-78451)
【结果】
传统产品中可观察到神经细胞的非特异性信号（三角箭头），而本产品中几乎检测不到非特异性信号。
◆应用数据
▼ 免疫组织染色
小鼠
| 物种：小鼠（C57BL/6J） 部位：海马体（CA2） 样品：冰冻切片 稀释倍率：1︰200 备注：蓝色为DAPI <数据提供> F大学I老师 |
| 物种：小鼠 部位：前额皮质 样品：冰冻切片 稀释倍率：1︰900 备注：蓝色为DAPI <数据提供> 东北大学 精神神经学领域 俞老师 |
| 物种：小鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释倍率：1︰10,000 备注：蓝色为DAPI <数据提供> 九州大学 大学院医学研究院 神经解剖学领域 山田老师 |
| 物种：小鼠 部位：海马体 样品：冰冻切片 稀释倍率：1︰500 <数据提供> 御茶水女子大学人类生命科学研究所 桥本老师 |
| 物种：小鼠 部位：海马体 样品：冰冻切片 稀释倍率：1︰1,000 备注：活化处理 （柠檬酸钠缓冲液） <数据提供> 御茶水女子大学人类生命科学研究所 桥本老师 |
 | 物种：小鼠 部位：正中隆起 样品：冰冻切片 稀释倍率：1︰1,000 <数据提供> 旭川医科大学 解剖学讲座 机能形态学领域 古部老师 |  | 物种：小鼠 部位：脊髓 样品：冰冻切片 稀释倍率：1︰2,000 <数据提供> 九州大学 大学院药学研究院 药理学领域 津田老师 河野老师 |
| 物种：小鼠 部位：视网膜 样品：石蜡切片（FFPE） 稀释倍率：1︰400 备注：活化处理（TE 缓冲液，pH 9.0， 高压锅加压 3 min） <数据提供> 川崎医科大学病态代谢学教室 石塚老师 |
大鼠
三角箭头部分推测为血管周围的巨噬细胞。 | 物种：大鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释倍率：1︰500 备注：活化处理（pH6.0 醋酸缓冲液， 75℃，20 min），蓝色为DAPI <数据提供> 京都府立医科大学 生体构造科学部门 小泉老师 |
以上实验数据由研究人员友情提供，无法保证实验结果。关于以上数据的相关问题我们也无法回答，敬请谅解。
◆用户反馈
以下是研究人员提供的评估问卷结果。
评价（原文翻译）
以下为所有同意公开评论的研究人员名单。
综合评价 | 所属单位 | 姓名 | 评价 |
满意 | 旭川医科大学 解剖学讲座 机能形态 学领域 | 古部瑛莉子老师 | 小胶质细胞的细小突起也能很好地染色，非常好。而且还能染色细胞体。 |
满意 | 川崎医科大学 | 石塚佑太老师 | 小鼠视网膜石蜡包埋切片用抗 Iba1 抗体（WAKO #019-19741 兔源抗 体）共染，两者均观察到小胶质细胞特异性染色。 |
满意 | 九州大学 神经解剖学领域 | 山田纯老师 | 滴度很高，可确认与Iba1和TMEM共存。 |
满意 | 京都府立医科大学 | 小泉崇老师 | 使用样品是大鼠大脑。 |
满意 | F大学 | I老师 | 印象中可特异性染色。 |
满意 | O大学 | H老师 | 可用于大脑切片的免疫染色。特异性非常高，使用常规的染色protocol也 能获得漂亮的染色图像。过去使用的P2RY12 抗体都是rabbit host或goat host，虽然rabbit host的特异性很高，但难以与其他抗体结合进行多重染 色，而goat host的有特异性，但其着色和荧光很弱，难以拍摄显微照片， 希望其他host中有更好的P2RY12抗体。 本次使用的guinea pig host是非常易于使用的产品，不仅可与其他抗体结 合进行多重染色，而且特异性高，可产生清晰的显色和荧光。 |
比较满意 | 九州大学 药理学领域 | 河野敬太 老师 | 可用于组织染色，但染色性能略逊于之前使用过的其他公司的产品（高浓 度显示非特异性）。 |
稍微不满意 | 東京大学大学院 机能病态学教室 | 高岛翔 老师 | 在阿尔茨海默病小鼠模型的冰冻大脑切片上使用了间接荧光抗体法，但未 获得与 IBA1 抗体染色图像一致的染色结果。 |
◆FAQ
关于抗体
Q：抗原是什么？
A：P2RY12的合成肽（C端序列同源）。 具体序列未公开。
关于protocol
Q：使用什么二抗比较好？
A：FUJIFILM Wako拥有以下二抗的实绩。
Alexa Fluor® 488 AffiniPure Goat Anti-Guinea Pig IgG (H+L)（Jackson ImmunoResearch公司，产品编号： 568-77901）
Alexa Fluor® 488 AffiniPure Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L) （Jackson ImmunoResearch公司，产品编号： 562-78401）
Alexa Fluor® 647 AffiniPure Donkey Anti-Guinea Pig IgG (H+L) （Jackson ImmunoResearch公司，产品编号： 566-78421）
关于应用
Q：可用于哪些动物？
A：已确认可用于小鼠。虽然FUJIFILM Wako尚未有实绩，但也有大鼠的染色实例，详情请参阅“数据”部分，此外，关于其他动物的应用实例尚未确认。
Q：可对哪些组织进行染色？
A：FUJIFILM Wako对以下组织/部位进行了染色。
大脑皮层、海马体、下丘脑、小脑、嗅球、脊髓
此外，也有以下组织/部位的染色实例，详情请参阅“数据”部分。
前额叶皮质（大脑）、延髓末端、正中隆起（下丘脑）、视网膜
Q：除稳态小胶质细胞外，还能对其他的小胶质细胞进行染色吗？
A：P2RY12是稳态小胶质细胞的标志物，已知在疾病相关小胶质细胞（DAM: Disease-Associated Microglia）和阿尔茨海默病模型小鼠中的表达量降低2-3）。在这些小胶质细胞中，由于表达量降低，可能无法染色。
关于故障排除
Q：免疫组织染色的背景过高。
A：背景过高时，可尝试在制备冰冻切片后进行甘氨酸处理（在 25 mM甘氨酸/PBS中浸泡约20 min）。 这可以使样品中的醛基失活，从而抑制背景。
1. Butovsky, O. et al.: Neurosci., 17(1), 131(2014).
Identification of a unique TGF-β–dependent molecular and functional signature in microglia
2. Keren-Shaul, H. et al.: Cell, 169(7), 1276(2017).
A unique microglia type associated with restricting development of Alzheimer’s disease
3. Maeda, J. et al.: Brain Commun., 3(1), fcab011(2021).
Distinct microglial response against Alzheimer's amyloid and tau pathologies characterized by P2Y12 receptor
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 015-28871 | Anti P2RY12, Guinea Pig 抗 P2RY12抗体，豚鼠 |
10 μL | 免疫化学用 | |
| 011-28873 | Anti P2RY12, Guinea Pig 抗 P2RY12抗体，豚鼠 |
100 μL | 免疫化学用 |
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