ELISA — A to Z — 

目 录

序论⸺关于免疫分析 

A. 何谓检测 ------------------------------------------------------------------------------------------------ 4

B. 评估检测方法 -------------------------------------------------------------------------------------------- 5

C. 何谓免疫分析法？ ---------------------------------------------------------------------------------------- 6

D. 免疫分析的有效性？ ------------------------------------------------------------------------------------- 14

Ⅰ. ELISA入门 ------------------------------------------------------------------------------------------- 17

ELISA如何使用抗体？ 

Shibayagi使用的酶和显色底物 

最后步骤⸺检测吸光度 

Ⅱ. ELISA的实操 

A. Shibayagi试剂盒操作指南 ------------------------------------------------------------------------------- 20

    1. 孔板、标准溶液、样品溶液、试剂溶液恢复至室温后再进行添加、分注 

    2. 试剂溶液的制备法 

    3. 抗体固相化孔板的结构和使用方法 

    4. 孔板的清洗方法 

    5. 标准溶液与样品的移液和添加方法 

    6. 试剂溶液的添加方法 

    7. 搅拌操作 

    8. 酶标仪和吸光度检测 

    9. 为什么不能每个孔加入一种样品？ 

    10. 试剂盒使用的注意事项 

B. 移液器的种类与注意事项 ------------------------------------------------------------------------------- 29

C. 移液器的精确度与检测精确度的关系⸺ELISA的优势 ----------------------------------------------------- 32

D. 废液等试剂的处理方法 --------------------------------------------------------------------------------- 33

Ⅲ. 更多关于ELISA的信息 

A. 关于误差 --------------------------------------------------------------------------------------------- 34

    1.偶然误差/随机误差

    2. 系统误差 

    3. 严重错误

B. 分析方法验证项目的要求  ------------------------------------------------------------------------------ 35

C. ELISA中的标准曲线与检测值的计算  -------------------------------------------------------------------- 36

    1. ELISA的指标 

    2. 如何在ELISA中计算检测值 

    3. 标准曲线的验证 

    4. ELISA的吸光度偏差如何反映在检测值中 

    5. 模拟结合量与标准曲线 

D. 精确度（precision）相关的参数与计算 ----------------------------------------------------------------- 51

    1. 重复性（repeatability）和室内再现性（intermediate precision）的计算 

    2. 室间再现性（reproducibility） 

E. 评估准确度（accuracy、trueness）的实用实验方法 ----------------------------------------------------- 54

    1. 稀释线性测试（研究血液成分是否有影响）（dilution linearity test） 

    2. 加标回收测试（recovery test，spike recovery test） 

    3. 与其他检测系统的相关性测试 

F. 检测样品的稳定性 ------------------------------------------------------------------------------------- 56 

G. 检测系统的稳健性（robustness）---------------------------------------------------------------------- 58 

H. 精确度管理⸺通过控制图对每次检测进行评估 ----------------------------------------------------------- 58

 I. 改善ELISA的性能 -------------------------------------------------------------------------------------- 60

    1. 关于样品重复次数（Replicate）和检测平均值的可靠性 

    2. 边缘效应（Edge effect）和解决方案 

    3. 样品中血清 成分的影响和解决方案 

    4. 关于血液样品的pH 

    5. 移液器和移液时的注意事项 

    6. 关于样品与试剂盒的适应性测试 

    7. 通过改善清洗方法，降低空白的非特异性吸附导致的吸光度增加 

    8. ELISA操作的注意事项总结 

    9. 通过能力测试提升操作技巧 

Ⅳ. 附录 

附录1：血液样品的采集方法 ----------------------------------------------------------------------------- 65

附录2：关于肽溶液与试剂溶液的制备 --------------------------------------------------------------------- 65