FUJIFILM Wako以Q＆A的形式为客户提供常见问题的标准答案。

◆内毒素检测相关问题

Q1.　如何溶解内毒素标准品？

Q2.　依据日本药典进行检测时，应使用哪种内毒素标准品？

Q3.　如何区分凝胶法、浊度法、显色法？

Q4.　检测时必须使用检测专用耗材吗？

Q5.　如何确定胃肠道外给药的内毒素标准值？

Q6.　如何计算MVD（最大有效稀释率）？

Q7.　如何对不溶于水的样品进行内毒素检测？

Q8.　样品保存方法？

Q9.　如何调整样品的pH值？

Q10.　检测用试管可重复使用吗？

◆检测仪器相关问题

Q11.　各款内毒素检测仪器有什么区别？

Q12.　终点法与动力学法有何区别？

Q13.　Toxinometer的检测原理是什么？

Q14.　使用Toxinometer时可随意更改阈值、等待时间和计数吗？

Q15.　Toxinometer ET-6000的检测波长是多少？

Q16.　使用简易型内毒素检测系统Endosafe-PTS Leader需要注意的地方是？

◆检测试剂相关问题

Q17.　什么是内毒素特异性试剂？

Q18.　单次检测和多次检测有什么区别？

Q19.　虽然单次检测和多次检测的样本量不同，但有必要考虑浓度的差异吗？

Q20.　鲎试剂的保存温度是？

◆内毒素检测相关问题

Q1.　如何溶解内毒素标准品？

日本药典内毒素标准品（JP-RSE）：加入内毒素检测用水使内毒素限值达到10,000EU/mL，再剧烈搅拌5分钟。

美国药典内毒素标准品（USP-RSE）：加入5mL内毒素检测用水（2000EU/mL），再剧烈搅拌30分钟。

内毒素工作标准品（CSE）：加入内毒素检测用水使内毒素限值达到1000EU/mL，再剧烈搅拌2分钟。

Q2.　依据日本药典进行检测时，应使用哪种内毒素标准品？

必须使用药典规定的内毒素标准品。（JP-RSE、USP-ESE、EP-RSE）

Q3.　如何区分凝胶法、浊度法、显色法？

进行半定量分析时采用凝胶法，进行定量分析时采用显色法和浊度法。

显色法和浊度法基本上没有太大的区别。但它们在检测仪器、试剂的检测范围以及检测成本上存在差异。选择前需慎重考虑。

如果对凝胶法、显色法和浊度法的检测结果存在疑问或争议，请以凝胶法的结果为最终判定。

Q4.　检测时必须使用检测专用耗材吗？

不必使用检测专用耗材。但必须使用不含内毒素或β-葡聚糖的器具。玻璃器具可以通过30分钟以上，超过250℃的干热灭菌来灭活内毒素。洗脱出的微量金属离子（Fe、Al、Ga、Cr等）会影响内毒素检测，因此要避免使用金属器具。除了获得生产商的保证外，还要确认一次性塑料器①不受内毒素污染；②不吸附内毒素；③洗脱物不含影响检测结果。

Q5.　如何确定胃肠道外给药的内毒素限值？

药典各项中没有规定内毒素限值的样品设定如下。

内毒素限值(EU/mL)= K值(EU/kg)/人最大给药量(mL/kg)＊1

＊1：频繁或连续注射时，人最大给药量为1小时内注射的最大剂量。

-参考-

日本、美国、欧洲药典规定的K值（致热内毒素量）

Q6.　如何计算MVD（最大有效稀释率）？

计算公式如下。

λ：※凝胶法中表示标记凝胶灵敏度，光学法中表示标准曲线的最小浓度

FUJIFILM Wako的Toxinometer/MPR内毒素检测系统配套软件"ToximasterQC"带有MVD自动计算功能。

Q7.　如何对不溶于水的样品进行内毒素检测？

不溶于水的样品如果能溶于1％乙醇或1％DMSO，进行检测时不会对鲎试剂造成影响。

不溶于上述溶剂的样品可使用鲎试剂PS Single（产品编号：299-54501），检测时不受共存物质的影响。

（应用实例）可溶于乙醇、硅油、大豆油、橄榄油、硬脂酸、蛋黄卵磷脂、油佐剂疫苗、白蛋白制剂、凝血因子制剂（第8因子）、干扰素制剂、抗凝血酶III制剂、免疫球蛋白制剂等溶剂的样品都能进行检测。

Q8.　样品保存方法？

保存时请注意以下几点。

●   样品中不能有活菌繁殖

●   内毒素值不会根据保存期而发生变化

●   确保保存容器无内毒素污染，无内毒素吸附，不含影响检测结果的洗脱物。

Q9.　如何调节样品的pH值？

如果样品溶液的pH值不在6.0～8.0范围内，就需要作出调节。

（内毒素检测的最佳pH值约为7.3，但由于鲎试剂中含有缓冲组分，因此允许在pH6.0～8.0内进行检测）

能进行稀释的样品可通过稀释调节pH值。不能稀释的样品，可在样品溶液中加入稀NaOH或HCl溶液来调节pH值。

还可以利用缓冲液来稀释样品溶液。建议使用按需配制的NaOH、HCl调节pH值。

Q10.　检测用试管可重复使用吗？

检测用试管不可重复使用。

稀释或样品保存用试管可在进行250℃超过30分钟的干热灭菌后重复使用。

◆检测仪器相关问题

Q11.　各款内毒素检测仪有什么区别？

检测仪器的选择请参照下表。

* MPR 仪器不可以提供。

Q12.　终点法与动力学法有何区别？

●   终点法：反应一段时间后，利用反应后的浊度或吸光度的大小与内毒素浓度的反应关系的方法

●   动力学法：利用达到一定浊度或吸光度的时间和内毒素浓度的反应关系的方法，又或者利用浊度或吸光度的实时变化率与内毒素浓度之间的反应关系的方法

Q13.　Toxinometer的检测原理是什么？

内毒素检测仪-Toxinometer^® ET-6000

Q14.　使用Toxinometer时可更改阈值、等待时间和计数吗？

可以。但在这种情况下不能保证试剂的性能。

Q15.　Toxinometer ET-6000的检测波长是多少？

中心波长为430nm。

Q16.　使用简易型内毒素检测系统Endosafe-PTS Reader需要注意的地方是？

请将使用过的Cartridge恢复至室温后再使用。

Endosafe-PTS主机最好每年进行一次温度校正。

◆检测试剂相关问题

Q17.　什么是内毒素特异性试剂？

一般来说，鲎试剂除了与内毒素，还会与真菌细胞壁组成成分的（1→3）-β-D-葡聚糖发生反应。只与内毒素产生反应的试剂就是内毒素特异性试剂。

Q18.　单次检测和多次检测有什么区别？

●   单次检测：预先将单次分量的鲎试剂添加到反应试管中

●   多次检测：用内毒素检测用水溶解鲎试剂，再将一定量的鲎试剂添加到反应试管或孔板中使用

Q19.　单次检测和多次检测的样本量不同，但需要考虑浓度的差异吗？

试剂是根据添加的样品量来制备的，因此上述问题不存在。

但由于上样量不同，当样品中含有反应干扰因子时，它对检测的抑制和促进会受到不同方式的影响。

Q20.　鲎试剂的保存温度是？

所有鲎试剂都应冷藏保存。

溶解后的鲎试剂要在每种试剂要求的条件下保存。（例如：ES-Ⅱ系列请在冷冻当日使用。）

非当日使用的话要在每种鲎试剂要求的保存温度※下冷冻保存，并在2周内使用。请勿重复冻融一次以上。

※ES-Ⅱ系列：－10℃～－30℃

　ES-F系列、ES-F/Plate：－10℃～－20℃

　Color KY系列：－80℃以下

　J/F系列：-20℃～-30℃

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