炎症小体是一种高分子量复合物，它可以激活炎性胱天蛋白酶并激活IL-1家族细胞因子，在炎症反应中起到重要调控作用。目前已发现部分NLR家族内的炎症小体，包括NLRP1(NALP1)、NLRP3(NALP3)、IPAF(NLRC4)。其中，研究发现NLRP3的激活及其分子调控信号通路与多种疾病密切相关，是临床药物研发的热点。

一般常使用免疫印迹（WB）对NLRP3的表达量进行研究。下列NLRP3炎症小体WB小贴士供您参考，希望能对您的研究有所帮助：

1. 细胞或组织：

- 经文献验证，原代细胞、组织或细胞系表达的NLRP3处于可检测水平。使用LPS、PMA或其他引发剂（激活NF-κB信号）可提高NLRP3的表达水平。

- NLRP3在许多不同的细胞或组织中有表达，但在某些情况下（某些细胞亚克隆的意外突变等），NLRP3的水平会发生变化，导致WB无信号或信号减

- 弱。

2. SDS-PAGE 凝胶：

- SDS-PAGE的浓度应小于8%。

- 所有缓冲液（running, stacking, transfer buffer)）都应现配现用。

- 每条泳道至少上样20-30 µg。

- NLRP3是一种不容易转膜的蛋白，因此转膜时需更加小心。

- 转膜应在20 V、4°C的湿转槽中过夜进行。

- 转膜时间不建议设定为1小时，也不建议进行干转或半干转。

3. 一抗：

- 使用现配的抗NLRP3（Cryo-2）抗体，稀释度为1/1'000。若蛋白的表达较弱，可调整稀释度，如调整至1/500。

4. 二抗：

- 使用现配的与 HRP（1/5'000）偶联的抗小鼠IgG（AG-29B-0004E）抗体（若使用了其他品牌的小鼠二抗 IgG-HRP，请参考制造商提供的推荐稀释

- 度）。

5. 阳性对照：

- 对于阳性对照细胞系（可通过使用ATP、PMA或LPS以提高NLRP3水平），推荐使用人单核细胞样细胞，如THP1或U937和小鼠巨噬细胞Raw264.7或小鼠单核巨噬细胞J774A.1。

◆备注

- AdipoGen抗NLRP3抗体（Cryo-2）是少数使用KO提取物验证的NLRP3抗体之一。市场上的许多抗体未经验证且已被证明不具有特异性。

- AdipoGen抗NLRP3抗体（Cryo-2）可检测N端 Pyrin结构域。

◆相关产品：NLRP3抗体

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