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ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品
StemSure^® Serum Replacement

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参考文献

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

StemSure^® Serum Replacement

　　本产品是ES细胞和iPS细胞培养中使用的血清代替品。血清含有分化诱导因子，会导致干细胞分化。使用本产品代替血清，可在ES和iPS细胞培养的同时，保持他们的未分化状态，达到稳定培养。
　　本产品不含剧毒物质，将其作为普通物质处理。
　　使用本产品配制培养基培养的小鼠ES细胞，可用于制备嵌合体小鼠，并确认其种系传递。

191-18375

◆特点•优势

●　可用于嵌合体小鼠制备，并确认其种系传递。

●　作为血清替代品，用于小鼠ES细胞・人IPS细胞培养。

●　不含剧毒物质。

◆案例•应用

1、嵌合体小鼠的制备与种系传递Update！！

　　将组装 HaloTag^® cDNA 的目标载体导入小鼠ES细胞，用含有 StemSure^® Serum Replacement（SSR）的培养基培养。确认载体导入小鼠ES细胞后，将其注入至 ICR 小鼠的胚盘胞，并移植至 ICR 小鼠的子宫。得到的嵌合体小鼠与 C57BL/6J 小鼠交配，获得F1小鼠。

(1) 　嵌合体小鼠

　　收集嵌合体小鼠的血液，用 TRITC（四甲基若丹明异硫氰酸盐）对 HaloTag^® 蛋白质染色。发现小鼠ES细胞源的 HaloTag^® 的血液被染色，可确认为嵌合化。

(2)　F1小鼠

　　F1小鼠的血液发现 HaloTag^® 存在，可确认用 SSR 培养基培养的ES细胞嵌合小鼠能够正常存活。

汉化-图片2.jpg

2、人iPS细胞201B7的培养

(1)　克隆形态与ALP染色

　　已确认可用 StemSure^® Serum Replacement（SSR）培养人iPS细胞 201B7 株。ALP 染色呈阳性。

上传图片4.jpg

　　<培养基组成>
　　D-MEM/Ham's F-12 + 20% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine +1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 5 ng/mL bFGF

(2)　未分化标记的发现

　　使用 StemSure^®Serum Replacement（SSR）培养的人iPS细胞201B7株，确认各种未分化标记（Sox2, Oct3/4, SSEA-3, SSEA-4, Tra-1-81）呈阳性。

3、小鼠ES细胞D3的培养

(1)　细胞形态与ALP染色

　　使用 StemSure^®Serum Replacement（SSR）培养小鼠ES细胞D3，能观察到小鼠ES细胞群特有的光泽，ALP染色呈阳性。

上传图片6.jpg

(2)　细胞增殖曲线

　　用不同培养基培养小鼠ES细胞D3进行14继代培养，比较细胞增殖。

　　如下图所示StemSure^® 系列与Ａ公司有同等的性能。

　　< StemSure^® 系列培养基组成>
　　StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

　　（使用胶原包被的12孔板）

(3)　细胞群倍加数*

　　使用不同培养基对小鼠ES细胞D3进行继代培养，检查培养天数与细胞群倍加数的关系。

　　下图显示 StemSure^® 系列与Ａ公司产品的细胞群倍加数相同。

　　*细胞群倍加数 cell population doubling level，缩写PDL，指从培养开始至现在细胞群的倍增次数。

<培养基组成>

　　StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/l L-Glutamine + 1×MEM Non-essentialAmino Acids + 0.1 mmol/l StemSure^® 2-Mercaptoethanol + 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/ml StemSure^® LIF

　　（使用胶原包被的12孔板）

(4)　未分化标记的检测

　　使用 StemSure^® 系列对小鼠ES细胞D3进行５代继代培养，各种未分化标记（Nanog, Oct3/4, Sox2, SSEA-1）呈阳性。

　　<培养基组成>
　　StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

4、畸形瘤的形成

　　用 StemSure^® 系列对小鼠ES细胞D3进行继代培养。对免疫不全小鼠的皮下注射培养后细胞。在形成皮下畸形瘤，其内部检测出神经组织（外胚叶源）、软骨组织（中胚叶源）、管腔结构纤毛上皮（内胚叶源）。

　　<培养基组成 >
　　StemSure^® D-MEM + 15% SSR + 2 mmol/L L-Glutamine + 1×MEM Non-essential Amino Acids + 0.1 mmol/L StemSure^® 2-Mercaptoethanol+ 1×Penicillin-Streptomycin + 1,000 units/mL StemSure^® LIF

ES细胞・iPS细胞培养用血清代替品

★StemSure^® 系列★

　　StemSure^® 系列可培养ES细胞和iPS細胞。使用小鼠ES细胞D3检测每批产品的品质。

　　●　StemSure^®D-MEM・巯基乙醇，硫代甘油

　　●　StemSure^® 明胶溶液

　　●　StemSure^® LIF, 小鼠, 重组. 溶液,

　　●　StemSure^® 冻存溶液

产品编号	产品名称	等级	规格	价格	保存温度・法规情报
197-16275	StemSure^®D-MEM (High Glucose) with Phenol Red and Sodium Pyruvate	细胞培养用	500 mL	询价
198-15781	StemSure^®10mmol/l 2-Mercaptoethanol Solution (×100)	细胞培养用	100 mL	询价
195-15791	StemSure^®50mmol/L Monothioglycerol Solution (×100) 与2ME同等使用的还原剂。不属于毒物。	细胞培养用	100 mL	询价
190-15805	StemSure^®0.1w/v% Gelatin Solution	细胞培养用	500 mL	询价
199-16051 195-16053	StemSure^®LIF, Mouse, recombinant, Solution	细胞培养用	10⁶units 10⁶units×10	询价
195-16031	StemSure^®Freezing Medium	细胞培养用	100 mL	询价

已有案例引用的培养基配方

iPSC培养基组成如下：含15％StemSure Serum Replacement（197-16775; Wako Pure Chemical Industries） DMEM / F12，1％抗生素 - 抗真菌混合溶液，1％非必需氨基酸（139-15651; Wako Pure Chemical Industries ），2mM谷氨酸（16948-004; Nacalai Tesque）和0.1mMβ-巯基乙醇（21438-82; Nacalai Tesque）。文献全文请点击参考文献页面。

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产品列表

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
191-18375	Stemsure^® Serum Replacement Stemsure^®血清替代品	500 mL	细胞培养用

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