ScreenFect A+
DNA & siRNA 转染试剂
通过点击化学开发的新型脂质体！！
ScreenFect ™A plus（也称作ScreenFect ™A+）是通过点击化学（Click Chemistry）筛选※1出的新型阳离子脂质体组成的转染试剂，适用于各种真核生物来源的细胞，也可直接添加至含有抗生素或者血清的培养基中。
使用 ScreenFect ™A plus转染试剂可将DNA和siRNA导入通用实验细胞系（HeLa、HepG2、MDCK等）、干细胞（小鼠ES细胞等）、血细胞（巨噬细胞、THP-1、RAW264.7等）、小胶质细胞、原代细胞（原代培养）和昆虫细胞中。其细胞毒性低，因此转染后无需更换培养基。另外，试剂成分中不含有任何有毒有害物质。
※1 Biomaterials. 2012 Nov; 33(32):8160-6. 2012
特点
● DNA和ScreenFect ™A plus试剂混合比例可选范围更广
● 使用一步法缩短分析时间至1天
● 可高效转染难以导入的细胞
● 成本低
ScreenFect ™A plus 转染性能
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※ MCF-7：人乳腺癌来源细胞（上皮细胞样形态）（贴壁系）
※ 导入方法：A公司新产品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法
改善难以导入的细胞的转染效率！ |
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※ MDCK：狗肾小管上皮细胞来源（贴壁系）
※ 导入方法：A公司新产品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法
改善难以导入的细胞的转染效率！ |
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※ K562：人慢性髓性细胞白血病细胞来源（悬浮系）
※ 导入方法：A公司新产品 → 2步法，ScreenFect ™A plus → 1步法
改善难以导入的细胞的转染效率！ |
◆应用数据
1. 向LNCaP细胞（贴壁系）中导入YFP融合基因的实验
进行向LNCaP细胞（贴壁系）中导入YFP融合基因的实验，在荧光显微镜下比较导入基因的表达效率。
使用ScreenFect ™A plus和增强剂SFA P-reagent，可以观察到与其他公司产品相同或更高的表达效率。
※ 数据刊登于BioWindow No.144 (2016年6月号)
LNCap (人前列腺癌) 中的性能比较
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〔接种细胞数〕3×105 cells/well 〔质粒DNA量〕1 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 3 〔孔板〕24孔板 | 〔接种细胞数〕1.5×105 cells/well 〔质粒DNA量〕1 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 3 〔孔板〕24孔板 |
2. 向HeLa细胞（贴壁系）中导入EGFP_mRNA的实验
进行向HeLa细胞（贴壁系）中导入EGFP_mRNA的实验，在荧光显微镜下比较EGFP的表达效率。
使用ScreenFect ™A plus和增强剂SFA P试剂（产品编号：191-18331、197-18333），可以观察到与其他公司产品相同或更高的表达效率。
※ 数据刊登于BioWindow No.144 (2016年6月号)
HeLa细胞中的mRNA转染性能比较
〔接种细胞数〕0.7 x 105 cells/well
〔mRNA量〕0.1 µg/assay
〔转染试剂混合比例〕mRNA量 (µg) : ScreenFect ™ A plus 试剂(µL) = 1 : 4
〔检测时间〕转染后48 h
〔曝光时间〕2 s
3. 向hiPSC（201B7株）中导入GFP融合基因的实验
进行将hiPSC（201B7株) 通过反向转染（1-STEP)导入GFP融合基因的实验，在荧光显微镜以及流式细胞仪下比较导入基因的表达效率。
使用反向转染法转染hiPS细胞的效果优异，在StemSure® hPSC培养基Δ和mTeSR™ 1两个培养基中，ScreenFect ™A plus表现出与其他公司产品相同或更高的导入效率。
※ 数据刊登于BioWindow No.144 (2016年6月号)
hiPSC（201B7株)中的性能比较
1-step 使用StemSure® hPSC培养基Δ | |
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ScreenFect™A plus的转染条件 〔细胞数〕5×105 cells/well 〔质粒DNA量〕4 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 0.5 〔孔板〕12孔板 〔备注〕SFA plus reagent以及pDNA使用了Opti-MEM® 进行稀释。 | 其他公司产品的转染条件 〔细胞数〕5×105 cells/well 〔质粒DNA量〕2 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 2 〔孔板〕12孔板 |
1-step 使用mTeSR™1培养基 | |
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ScreenFect™A plus和其他公司产品的转染条件 〔细胞数〕5×105 cells/well 〔质粒DNA量〕1 µg/assay 〔转染试剂混合比例〕 pDNA量 (µg) : ScreenFect ™A plus reagent (µL) = 1 : 2 〔孔板〕12孔板 〔备注〕SFA plus reagent以及pDNA使用了Opti-MEM® 进行稀释。 | |
4. 向HeLa细胞（贴壁系）中导入PIK3CB siRNA的实验
使用反向转染（1-STEP）法以及正向转染（2-STEP）法进行向HeLa细胞中导入PIK3CB siRNA的实验，通过实时定量PCR测量PIK3CB mRNA的表达水平。
在定量结果的基础上与其他公司产品比较敲降效率，结果显示ScreenFect ™A plus表现出与其他公司产品相同或更高的敲降效率。
※ 数据刊登于BioWindow No.149 (2017年3月号)
HeLa细胞中的性能比较
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〔接种细胞数〕1×105 cells/well 〔siRNA〕5 pmol/assay 〔转染试剂混合比例〕ScreenFect ™A plus reagent = 0.5～1.5 µL 其他公司产品 = 1.5 μL 〔孔板〕24孔板 〔检测时间〕48 h后进行确认 | 〔接种细胞数〕0.5×105 cells/well 〔siRNA〕5 pmol/assay 〔转染试剂混合比例〕ScreenFect ™A plus reagent = 0.5～1.5 µL 其他公司产品 = 1.5 μL 〔孔板〕24孔板 〔检测时间〕48 h后进行确认 |
◆使用方法、拥有使用实绩的细胞
1-Step与2-Step 操作比较
产品 | ScreenFect™A plus | A公司新产品(+reagent) | A公司的新产品 |
各条件 | 1-Step | 2-Step | |
实验方案天数 | 2 Days | 3 Days | |
DNA量 | 少 | 多 | |
是否需要调整细胞数 | 可随时调整 | 取决于预培养条件 | |
是否需要胰蛋白酶处理 | 转染时 | 预培养时 | |
基于HTS细胞检测的可操作性 | +++++ | + | |
是否需要更换培养基 | 取决于细胞 | ||
ScreenFect ™A plus一步法概要
1步法 → 从转染到本分析的时间可缩短24 h！
ScreenFect ™A plus 转染条件
DNA转染
DNA 转染 (/well) | |||||
孔板类型 | 表面积 | 培养基体积 | SF-DNA 复合物的总体积 | DNA /稀释buffer | 转染试剂 /稀释buffer |
96 wells | 0.3 cm2 | 100 µL | 10 µL | 50 ng/5 μL | 0.15 or 0.2 μL/5 μL |
24 wells | 2 cm2 | 500 µL | 50 µL | 250 ng/25 μL | 0.75 or 1.0 μL/25 μL |
12 wells | 4 cm2 | 1,000 µL | 100 µL | 500 ng/50 μL | 1.5 or 2.0 μL/50 μL |
6 wells | 10 cm2 | 2,000 µL | 250 µL | 1,250 ng/125 μL | 3.75 or 5.0 μL/125 μL |
注：进行大规模转染时，请在转染前准备多个微管，之后再进行转染。
例：10 cm培养皿转染相当于 → 5~6个样品（6孔板）
▼ ScreenFect ™A plus 推荐实验方案
产品随附的说明书中提供了简易的实验方案，请确认“相关资料”中的文件。
ScreenFect™A plus推荐使用1步转染法。在试剂方面，为保证充分的转染效率，推荐质粒DNA与转染试剂的混合比例为1 : 3~1 : 4。另外，如希望进一步抑制转染时的细胞毒性，请使用60~80%汇合度的细胞。
siRNA转染
siRNA 转染 (/well) | |||||
孔板类型 | 表面积 | 培养基体积 | SF-siRNA 复合物的总体积 | siRNA /稀释buffer | 转染试剂 /稀释buffer |
96 wells | 0.3 cm2 | 100 µL | 10 µL | 1 pmol/5 µL | 0.1～0.3 µL/5 µL |
24 wells | 2 cm2 | 500 µL | 50 µL | 5 pmol/25 µL | 0.5～1.5 µL/25 µL |
12 wells | 4 cm2 | 1,000 µL | 100 µL | 10 pmol/50 µL | 1.0～3 µL/50 µL |
6 wells | 10 cm2 | 2,000 µL | 250 µL | 25 pmol/125 µL | 2.5～7.5 µL/125 µL |
注：虽然ScreenFect ™A plus也可以用于siRNA转染，但更推荐使用ScreenFect ™ siRNA 进行siRNA转染。
拥有ScreenFect ™A & A plus 应用实例的细胞
更多详细资料请联系富士胶片和光。
No. | 细胞名称 | No. | 细胞名称 | No. | 细胞名称 | No. | 细胞名称 |
1 | 143BTK | 22 | GP2-293 | 43 | LLC-MK2 | 64 | OLHNI-2 |
2 | 786-O | 23 | H9C2 | 44 | LO2 | 65 | Mouse overy cell |
3 | A2058 | 24 | HCT116 | 45 | LoVo | 66 | PC12 |
4 | A375 | 25 | HEK293 | 46 | MC3T3 | 67 | Plat-E |
5 | A549 | 26 | HEK293 TN | 47 | MC3T3-E1 | 68 | PLC8024 |
6 | B16 | 27 | HEK293A | 48 | MCF-10 | 69 | Primary Fibroblast |
7 | B16F10 | 28 | HEK293F | 49 | MCF-10A | 70 | RAW264.7 |
8 | Ba/F3-CH1 | 29 | HEK293FT | 50 | MCF-7 | 71 | SH-SY5Y |
9 | BEAS-2B | 30 | HEK293T | 51 | MDCK | 72 | SK-Hep1 |
10 | BEL-7402 | 31 | HeLa | 52 | MEF | 73 | SKOV3 |
11 | BT549 | 32 | HeLa S3 | 53 | mES | 74 | T98G |
12 | C2C12 | 33 | HEp-2 | 54 | mHSC | 75 | TE-13 |
13 | Cell line from killifish 来自鳉鱼的细胞系 | 34 | HepG2 | 55 | Microglia 小胶质细胞 | 76 | THP-1 |
14 | CHO-K1 | 35 | hiPSC | 56 | MLEC | 77 | U-251 MG |
15 | COS-7 | 36 | HK2 | 57 | MS-1 | 78 | U2OS |
16 | DB lymphoma DB淋巴瘤 | 37 | HKC | 58 | Myeloid dendritic cell (MDC) 骨髓树突状细胞 | 79 | U937 |
17 | DC 2.4 | 38 | HL7704 | 59 | NB1RGB | 80 | Vero |
18 | Du145 | 39 | HuH-7 | 60 | NCI-H1703 | 81 | Drosophira ovary somatic cell |
19 | EL4 | 40 | HUVEC | 61 | NE3 | 82 | HT1080 |
20 | Endothelium cell 内皮细胞 | 41 | Ins-1 | 62 | NIH 3T3 | 83 | RH7777 |
21 | EPC(carp) | 42 | L428 | 63 | NK92 | 84 | HaCaT |
富士胶片和光将实时更新ScreenFect™数据库中的使用实例，如对上述内容有疑问，欢迎随时联系进行咨询。
一步法和两步法实验流程的比较
产品名称 | ScreenFect ™ A plus | Ａ厂家新产品 （+试剂） | Ａ厂家产品 |
推荐的实验流程 | 一步法 | 两步法 | |
实验用时 | ２天 | ３天 | |
所需DNA量 | 低 | 高 | |
细胞数目调整 | 灵活 | 不灵活 | |
胰酶消化 | 需要 | 需要 | |
适于高通量筛选 | +++++ | + | |
培养基的更换 | 取决于细胞系 | ||
一步法比两步法节省24小时！
高性价比的高性能基因导入试剂
ScreenFect ™ 通信
基因导入人 iPS 细胞实验数据
介绍使用 ScreenFect ™A plus 将基因导入人iPS细胞的实验结果和操作步骤。本文记载了作为 iPS 细胞支架使用的 Matrigel 孔板包被方法、配制含有 Y-27632 的细胞悬浮液的操作步骤以及最优的试剂比例，供您参考。
◆导入人iPS细胞（201B7株）的转染操作实例
在这里，我们将介绍一些使用 StemSure® hPSC 培养基Δ（产品编号：197-17571）的操作实例。该操作步骤的完整版和使用 mTeSR1 培养基的操作步骤，请查看 FUJIFILM Wako 公司的官网。http://db.screenfect.jp/ja/documents/list/protocol
<转染试剂的配制>
将 2.0 μL 的 ScreenFect ™ A plus reagent、4.0 μg 的质粒 DNA 加入到 160 μL 的 Opti-MEM 中制成 DNA-lipid complex。
< Matrigel 包被孔板>
1. ４°C下溶解 Matrigel hESC-Qualified Matrix 。为防止发生凝固，请避免在室温下溶解。
2. 用 25 mL 冷却的 D-MEM/Ham's F-12 稀释 300μL 的 Matrigel。
3. 稀释后的 Matrigel 溶液按照 1 mL/well 加入到 12 孔板中。
4. 在室温下孵育１小时以上。
<细胞悬液的配制>
1. 将 StemSure® hPSC 培养基Δ在 2-8℃ 下放置数小时或过夜缓慢融解。不要在 37° C下解冻，并在一周内使用。
2. 将 bFGF（产品编号：064-05381,068-05384）按照终浓度 35-100ng/mL 添加到融解后的 StemSure® hPSC 培养基△中，配制成完全培养基（以下称为 sshPSC 培养基）。
3. 使用前将 sshPSC 培养基恢复至室温。不要使用温水浴。
4. 将 Y-27632 按照终浓度 10 μmol/L 添加到 sshPSC 培养基中（以下称为 ROCKi+培养基）。
5. 去除 hiPS 细胞培养孔板中的培养基，用 PBS（-）清洗细胞一次。
*请在细胞汇片达到80％且处于对数增殖期时进行细胞转染。
6. 除去 PBS（-），添加 Stempro Accutase。
7. 在 37°C，5％CO2 培养箱中静置５分钟。
8. 用 1 mL 微量移液枪添加 ROCKi+培养基，将细胞从培养板上分离并吹散成单细胞。
9. 转移至 15 mL离心管中。
10. 室温下 1000 rpm（约170×g）离心３分钟。
11. 去除上清，用ROCKi+培养基重悬细胞。
12. 计算活细胞的数量。
13. 用 ROCKi+培养基将细胞浓度调整至 5×105 cells/mL。
<转染>
添加 1 mL 配制好的 DNA-lipid complex 到细胞悬液中，使用移液器充分混匀，并接种在 12 孔板中。
※要点
接种 24 小时后请更换培养基。此时的培养基不需要含有 Y-27632。
◆实验数据
通过反向转染（1-STEP）将 GFP 融合基因导入 hiPS 细胞（201B7株），并通过荧光显微镜比较基因的导入效率。
<StemSure® hPSC 培养基Δ的使用>
细胞数：5×105 cells/well
质粒 DNA 量：4 μg/assay
转染试剂混合比例：DNA 量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 0.5
容器：12 孔板
备注：用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。
<mTeSR1 培养基的使用>
细胞数：5 x 105 cells/well
质粒 DNA 量：1 μg/assay
转染试剂混合比例：DNA数量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 2
容器：12 孔板
备注：用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。
◆使用上的注意
● 建议在单细胞状态下进行人iPS细胞的基因导入。
● 建议基因导入时的细胞数约为 5×105 cells/well。
● 当质粒 DNA 量多时，导入基因的表达量高会引起细胞死亡。
Q1. 基因导入效率低怎么办？
A1. 通过优化DNA量和试剂用量可提高效率。点击右方链接查看优化Protocol（日语版，英语版）。此外，使用ScreenFect™和SFA P-reagent（产
A1. 品编号：191-18331）也可提高基因导入效率。
Q2. 如何提高表达效率？
A2. 使用ScreenFect™和SFA P-reagent（产品编号：191-18331）可提高表达水平。
Q3. 转染试剂对细胞毒性强怎么办？
A3. 使用ScreenFect™和SFA P-reagent（产品编号：191-18331）可降低细胞毒性。
Q4. 从哪些条件实验开始比较好？
A4. 点击右方链接可参考各ScreenFect™产品的快速Protocol（日语版，英语版）。
Q5. 转染过程是否需要更换培养基？
A5. 更换培养基不是必须的，但在添加转染试剂前更换新鲜的培养基可提高基因导入效率，改善细胞状态。
Q6. 培养基中能否含有血清和抗生素？
A6. 根据细胞类型、DNA导入量等因素，可能需要更换培养基，以适时控制培养基含或不含血清/抗生素。请根据实验用途进行讨论。
Q7. 1-Step、2-Step是什么？
A7. 1-Step是一种反向转染方法，即转染前通过在细胞分离状态下添加试剂来导入基因。
A7. 2-Step是一种正向转染法，即提前一天进行细胞的预培养，然后在细胞上添加转染试剂后导入基因。
Q8. 能否同时导入多个基因？
A8. 可以。请准备多种耐药性基因，推荐使用pEBMulti 和 pCAG。
Q9. ScreenFect ™A和ScreenFect ™A plus分别适用于哪种情况？
A9. 通常情况下推荐使用基因导入效率高的ScreenFect ™A plus。但如果其对细胞毒性强或与ScreenFect™A plus相比无性能差异时，推荐使用细胞
A1. 毒性低且价格实惠的ScreenFect ™A。
Q10. 需要转染siRNA时，推荐使用哪种ScreenFect ™？
A10. 可使用ScreenFect ™ siRNA。视情况，ScreenFect ™A plus也能有效转染siRNA。使用ScreenFect ™siRNA无法达到预期结果时，可考虑
A11. 两种试剂一同使用。
Q11. 需要转染mRNA时，推荐使用哪种ScreenFect ™？
A11. 可使用ScreenFect ™mRNA。与SFA P-reagent一同使用时，可有效转染mRNA，提高表达水平。
A11. 此外，ScreenFect ™A plus和SFA P-reagent共同使用的最适场景因细胞而异，部分情况下两者共同使用能达到最佳效果。单独使用
A11. ScreenFect ™mRNA无法达到预期结果时，可考虑上述两种试剂一同使用。
Q12. SFA P-reagent是什么？
A12. 将质粒DNA或mRNA导入各种细胞时，SFA P-reagent和ScreenFect ™一同使用可提高细胞导入率和转染分子的表达水平。此外，已确认添加
A11. SFA P-reagent还能显著降低转染试剂的细胞毒性。
Q13. 有在哪些细胞中的应用实例？
A13. 已在通用细胞系（HeLa、HepG2、MDCK、MCF-7、K562 等）、干细胞、造血细胞（巨噬细胞、THP-1、RAW264.7 等）、小胶质细胞、
A11. 原代细胞、昆虫培养细胞、鱼类培养细胞及其他细胞中实现基因导入。
Q14. 是否可提供试用装？
A14. 欢迎向我们联系并填写表格申请试用装。
Q15. ScreenFect ™是什么试剂？
A15. ScreenFect ™是一种由新型阳离子脂质体构成的转染试剂。
Q16. 冷冻存储会对产品性能有影响吗？
A16. 请勿使用冷冻后的产品。
Q17. 如何调整所用的质粒DNA？
A17. 推荐使用阴离子交换柱或氯化铯密度梯度离心法纯化的质粒DNA。
Q18. 血清会影响基因导入吗？
A18. 血清不会影响本产品的性能，但建议转染时避免使用EDTA 和硫酸葡聚糖等阴离子抑制剂。此外，转染时避免使用抗生素也可提高转染效率。
[1] | Diefenbacher, Markus E., et al. "The LIM Domain Protein nTRIP6 Recruits the Mediator Complex to AP-1-Regulated Promoters." PLoS ONE 9.5 (2014): e97549. |
[2] | Freise, Christian, and Uwe Querfeld. "Inhibition of vascular calcification by block of intermediate conductance calcium-activated potassium channels with TRAM-34." Pharmacological Research (2014). |
[3] | Hagiwara, Akane, et al. "Luteinizing Hormone-Induced Expression of Ptger4b, a Prostaglandin E2 Receptor Indispensable for Ovulation of the Medaka Oryzias latipes, Is Regulated by a Genomic Mechanism Involving Nuclear Progestin Receptor." |
[4] | Peng, Yanyan, Ruidan Xu, and Xiaofeng Zheng. "HSCARG Negatively Regulates the Cellular Antiviral RIG-I Like Receptor Signaling Pathway by Inhibiting TRAF3 Ubiquitination via Recruiting OTUB1." PLoS pathogens 10.4 (2014): e1004041. (3) |
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 293-73201 | ScreenFect™ A | 0.2 mL | - | - |
| 299-73203 | ScreenFect™ A | 1 mL | - | - |
| 297-73204 | ScreenFect™ A | 1 mL×5 | - | - |
| 293-75901 | ScreenFect™ mRNA | 0.2 mL | - | - |
| 299-75903 | ScreenFect™ mRNA | 1 mL | - | - |
| 299-75001 | ScreenFect™ siRNA | 0.2 mL | - | - |
| 295-75003 | ScreenFect™ siRNA | 1 mL | - | - |
| 290-80203 | ScreenFect™ UP-293 | 1 L用 | - | - |
| 294-80201 | ScreenFect™ UP-293 | 100 mL用 | - | - |
| 191-18331 | SFA P-reagent | 100 μL | - | - |
| 197-18333 | SFA P-reagent | 500 μL | - | - |
| 194-18181 | ScreenFect™ Dilution Buffer | 50 mL | - | - |
| 免责声明 |
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