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DNA & siRNA 转染试剂
ScreenFect™ A plus

产品特性
相关资料
Q&A
参考文献

ScreenFect A+

DNA & siRNA 转染试剂！

◆原理

　　ScreenFect ™A+是通过点击化学（Click Chemistry）方法筛选出的阳离子脂质体转染试剂。适用于各种真核细胞，也可直接添加到含有抗生素或者血清的培养基中。使用 ScreenFect ™A+转染试剂可将 DNA 和 siRNA 转入常见实验室培养的细胞株（HeLa、HepG2、MDCK 等）、干细胞（小鼠ES细胞等），血液细胞（巨噬细胞、THP-1、RAW264 等），小胶质细胞和原代细胞。由于低细胞毒性，不含有任何有毒有害成分，转染后无需更换培养基。

※1 Biomaterials. 2012 Nov; 33(32):8160-6. 2012

◆优点、特色

●　DNA 用量少。

●　高效一步转染法。

●　转染效率高＆细胞毒性低。

●　使用成本低

◆案例、应用

【ScreenFect ™ A+ 转染性能（流式细胞仪检测）】

用于不同细胞的高效脂质体转染试剂!!

用于不同细胞的高效脂质体转染法!!

适用于难转染的悬浮细胞!!

一步法和两步法实验流程的比较

产品名称	ScreenFect ™ A plus	Ａ厂家新产品（+试剂）	Ａ厂家产品
推荐的实验流程	一步法	两步法
实验用时	２天	３天
所需DNA量	低	高
细胞数目调整	灵活（细胞准备仅在转染之前）	不灵活（取决于细胞预培养条件）
胰酶消化	需要（仅在转染之前）	需要（在细胞预培养之前）
适于高通量筛选	+++++	+
培养基的更换	取决于细胞系

一步法比两步法节省24小时！

ScreenA+.pdf

高性价比的高性能基因导入试剂

ScreenFect ™ 通信

基因导入人 iPS 细胞实验数据

　　介绍使用 ScreenFect ™A plus 将基因导入人iPS细胞的实验结果和操作步骤。本文记载了作为 iPS 细胞支架使用的 Matrigel 孔板包被方法、配制含有 Y-27632 的细胞悬浮液的操作步骤以及最优的试剂比例，供您参考。

◆导入人iPS细胞（201B7株）的转染操作实例

　　在这里，我们将介绍一些使用 StemSure^® hPSC 培养基Δ（产品编号：197-17571）的操作实例。该操作步骤的完整版和使用 mTeSR1 培养基的操作步骤，请查看 FUJIFILM Wako 公司的官网。http://db.screenfect.jp/ja/documents/list/protocol

<转染试剂的配制>

将 2.0 μL 的 ScreenFect ™ A plus reagent、4.0 μg 的质粒 DNA 加入到 160 μL 的 Opti-MEM 中制成 DNA-lipid complex。

< Matrigel 包被孔板>

1. ４°C下溶解 Matrigel hESC-Qualified Matrix 。为防止发生凝固，请避免在室温下溶解。

2. 用 25 mL 冷却的 D-MEM/Ham's F-12 稀释 300μL 的 Matrigel。

3. 稀释后的 Matrigel 溶液按照 1 mL/well 加入到 12 孔板中。

4. 在室温下孵育１小时以上。

<细胞悬液的配制>

1. 将 StemSure^® hPSC 培养基Δ在 2-8℃ 下放置数小时或过夜缓慢融解。不要在 37° C下解冻，并在一周内使用。

2. 将 bFGF（产品编号：064-05381,068-05384）按照终浓度 35-100ng/mL 添加到融解后的 StemSure^® hPSC 培养基△中，配制成完全培养基（以下称为 sshPSC 培养基）。

3. 使用前将 sshPSC 培养基恢复至室温。不要使用温水浴。

4. 将 Y-27632 按照终浓度 10 μmol/L 添加到 sshPSC 培养基中（以下称为 ROCKi+培养基）。

5. 去除 hiPS 细胞培养孔板中的培养基，用 PBS（-）清洗细胞一次。

*请在细胞汇片达到80％且处于对数增殖期时进行细胞转染。

6. 除去 PBS（-），添加 Stempro Accutase。

7. 在 37°C，5％CO₂培养箱中静置５分钟。

8. 用 1 mL 微量移液枪添加 ROCKi+培养基，将细胞从培养板上分离并吹散成单细胞。

9. 转移至 15 mL离心管中。

10. 室温下 1000 rpm（约170×g）离心３分钟。

11. 去除上清，用ROCKi+培养基重悬细胞。

12. 计算活细胞的数量。

13. 用 ROCKi+培养基将细胞浓度调整至 5×10⁵cells/mL。

<转染>

添加 1 mL 配制好的 DNA-lipid complex 到细胞悬液中，使用移液器充分混匀，并接种在 12 孔板中。

※要点

接种 24 小时后请更换培养基。此时的培养基不需要含有 Y-27632。

◆实验数据

　　通过反向转染（1-STEP）将 GFP 融合基因导入 hiPS 细胞（201B7株），并通过荧光显微镜比较基因的导入效率。

<StemSure^® hPSC 培养基Δ的使用>

细胞数：5×10⁵ cells/well

质粒 DNA 量：4 μg/assay

转染试剂混合比例：DNA 量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 0.5

容器：12 孔板

备注：用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。

<mTeSR1 培养基的使用>

细胞数：5 x 10⁵cells/well

质粒 DNA 量：1 μg/assay

转染试剂混合比例：DNA数量（μg）：ScreenFect ™ A plus reagent (μL)=1 : 2

容器：12 孔板

备注：用 Opti-MEM 稀释 ScreenFect ™ A plus reagent 和 DNA。

◆使用上的注意

●　建议在单细胞状态下进行人iPS细胞的基因导入。

●　建议基因导入时的细胞数约为 5×10⁵cells/well。

●　当质粒 DNA 量多时，导入基因的表达量高会引起细胞死亡。

◆产品列表

产品编号	产品名称	规格	包装
293-77101	ScreenFect ™ A plus	基因研究用	0.2 mL
299-77103			1 mL
297-77104			1 mL×5

Q1. 基因导入效率低怎么办？

A1. 通过优化DNA量和试剂用量可提高效率。点击右方链接查看优化Protocol（日语版，英语版）。此外，使用ScreenFect™和SFA P-reagent（产

A1. 品编号：191-18331）也可提高基因导入效率。

Q2. 如何提高表达效率？

A2. 使用ScreenFect™和SFA P-reagent（产品编号：191-18331）可提高表达水平。

Q3. 转染试剂对细胞毒性强怎么办？

A3. 使用ScreenFect™和SFA P-reagent（产品编号：191-18331）可降低细胞毒性。

Q4. 从哪些条件实验开始比较好？

A4. 点击右方链接可参考各ScreenFect™产品的快速Protocol（日语版，英语版）。

Q5. 转染过程是否需要更换培养基？

A5. 更换培养基不是必须的，但在添加转染试剂前更换新鲜的培养基可提高基因导入效率，改善细胞状态。

Q6. 培养基中能否含有血清和抗生素？

A6. 根据细胞类型、DNA导入量等因素，可能需要更换培养基，以适时控制培养基含或不含血清/抗生素。请根据实验用途进行讨论。

Q7. 1-Step、2-Step是什么？

A7. 1-Step是一种反向转染方法，即转染前通过在细胞分离状态下添加试剂来导入基因。

A7. 2-Step是一种正向转染法，即提前一天进行细胞的预培养，然后在细胞上添加转染试剂后导入基因。

Q8. 能否同时导入多个基因？

A8. 可以。请准备多种耐药性基因，推荐使用pEBMulti 和 pCAG。

Q9. ScreenFect ™A和ScreenFect ™A plus分别适用于哪种情况？

A9. 通常情况下推荐使用基因导入效率高的ScreenFect ™A plus。但如果其对细胞毒性强或与ScreenFect™A plus相比无性能差异时，推荐使用细胞

A1. 毒性低且价格实惠的ScreenFect ™A。

Q10. 需要转染siRNA时，推荐使用哪种ScreenFect ™？

A10. 可使用ScreenFect ™ siRNA。视情况，ScreenFect ™A plus也能有效转染siRNA。使用ScreenFect ™siRNA无法达到预期结果时，可考虑

A11. 两种试剂一同使用。

Q11. 需要转染mRNA时，推荐使用哪种ScreenFect ™？

A11. 可使用ScreenFect ™mRNA。与SFA P-reagent一同使用时，可有效转染mRNA，提高表达水平。

A11. 此外，ScreenFect ™A plus和SFA P-reagent共同使用的最适场景因细胞而异，部分情况下两者共同使用能达到最佳效果。单独使用

A11. ScreenFect ™mRNA无法达到预期结果时，可考虑上述两种试剂一同使用。

Q12. SFA P-reagent是什么？

A12. 将质粒DNA或mRNA导入各种细胞时，SFA P-reagent和ScreenFect ™一同使用可提高细胞导入率和转染分子的表达水平。此外，已确认添加

A11. SFA P-reagent还能显著降低转染试剂的细胞毒性。

Q13. 有在哪些细胞中的应用实例？

A13. 已在通用细胞系（HeLa、HepG2、MDCK、MCF-7、K562 等）、干细胞、造血细胞（巨噬细胞、THP-1、RAW264.7 等）、小胶质细胞、

A11. 原代细胞、昆虫培养细胞、鱼类培养细胞及其他细胞中实现基因导入。

A11. 更多详情请点击右方链接查看（日语版，英语版）。

Q14. 是否可提供试用装？

A14. 欢迎向我们联系并填写表格申请试用装。

Q15. ScreenFect ™是什么试剂？

A15. ScreenFect ™是一种由新型阳离子脂质体构成的转染试剂。

Q16. 冷冻存储会对产品性能有影响吗？

A16. 请勿使用冷冻后的产品。

Q17. 如何调整所用的质粒DNA？

A17. 推荐使用阴离子交换柱或氯化铯密度梯度离心法纯化的质粒DNA。

Q18. 血清会影响基因导入吗？

A18. 血清不会影响本产品的性能，但建议转染时避免使用EDTA 和硫酸葡聚糖等阴离子抑制剂。此外，转染时避免使用抗生素也可提高转染效率。

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产品列表

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
293-77101	ScreenFect™ A plus	0.2 mL	-	-
299-77103	ScreenFect™ A plus	1 mL	-	-
297-77104	ScreenFect™ A plus	5 x 1 mL	-	-

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