用于组织透明化样品的成像室

透明室

透明室是在使用显微镜观察组织透明化样品时使用的观察容器。透明室由10套硅橡胶板、盖玻片和载玻片组成，它能让您轻松地观察组织透明化后的样品。其中有五种厚度的硅橡胶可供作垫片，分别为0.3 mm、0.5 mm、1.0 mm、2.0 mm和3.0 mm，可根据您的样品选择所需尺寸。

硅橡胶板的两侧贴有保护膜，可在使用时剥离，从而使载玻片与盖玻片紧密接触。

◆透明化工序（使用SeeDB时）

1. 在4°C下用4％多聚甲醛/ PBS固定小鼠大脑，过夜。

2. 用PBS清洗3次样品（各10 min）。

3. 将样品放入装有20 mL SeeDB:20 w/v% Fructose Solution的50 mL锥形管中。在室温下，用旋转器旋转试管4~8 h（月4 rpm）。易损的样品

3. 和切片可使用跷跷板振荡摇床。（约17 rpm）。

4. 将样品转移至装有SeeDB：40 w/v% Fructose Solution的50 mL锥形管中，室温下旋转4~8 h。

5. 将样品转移至装有SeeDB：60 w/v% Fructose Solution的50 mL锥形管中，室温下旋转4~8 h。

6. 将样品转移至装有SeeDB：80 w/v% Fructose Solution的50 mL锥形管中，室温下旋转12 h。

7. 将样品转移至装有SeeDB：100 w/v% Fructose Solution的50 mL锥形管中，室温下旋转12 h。

8. 将样品转移至装有SeeDB的50 mL锥形管中，室温下旋转24 h。

图1. 使用SeeDB的生物体样品的透明化

从左至右分别为使用SeeDB透明化处理的小鼠胎儿（胎儿12天），新生小鼠（生后3天）的全脑，成年小鼠大脑切片（8周龄，厚度2 mm）的案例。

◆安装方法

1. 使用与样品尺寸相匹配的透明室

2. 使用SeeDB时，请使用SeeDB液安装样品。

*若样品较小，观察时会移动的话可使用琼脂糖凝胶等固定样品。

◆观察

1. 使用激光共聚焦显微镜或双光子激发显微镜观察SeeDB处理的大脑样品。

*使用SeeDB透明化处理的样品的折射率较高，为1.49。因此虽然适用于甘油浸没透镜，油浸透镜以及透明化用透镜，但是水浸透镜的使用深度只达约2 mm。浸泡液请使用

*各厂商推荐的浸泡液。请不要使用SeeDB液作为浸泡液。使用空气物镜（折射率1.0）或水浸物镜（折射率1.33）获得图像时，深度的数值需进行校正。

*（校正公式请参阅参考文献）。

◆观察实例

图2. 使用双光子激发显微镜获得的Thy1-YFP-H 小鼠（10周龄）大脑荧光图像

图3. 使用共焦距显微镜获得的Thy1-YFP-H 小鼠（10周龄）大脑荧光图像

参考文献

1）Ke, M. T., Fujimoto, S. and Imai, T. : Nat Neurosci ,6 (8),1154 (2013).

2）Ke, M. T., Fujimoto, S. and Imai, T.: Bio-protocol 4(3), e1042 (2014).

3）Ke, M. T., and Imai, T. : Curr Protoc Neurosci ,66,2.22.1-2.22.19 (2014).