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高分子β-淀粉样蛋白寡聚体ELISA试剂盒Wako Ver.2
High Molecular Amyloid β Oligomer ELISA Kit Wako Ver.2

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高分子β-淀粉样蛋白寡聚体ELISA试剂盒Wako Ver.2

High Molecular Amyloid β Oligomer ELISA Kit Wako Ver.2



免疫化学用 for Immunochemistry

制造商:FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation

保存条件:冷藏(冰冻运输)

分子量:0



◆试剂盒内容


96次用


抗体固相化孔板——1个

标准溶液(10 nM)——100 μL

缓冲液——60 mL

生物素偶联抗体(BAN50)溶液——100 μL

过氧化物酶偶联链霉亲和素溶液——100 μL

显色剂1——6 mL

显色剂2——6 mL

洗涤液(10×)——100 mL

标准品制备溶液——12 mL

血浆血清用样品制备溶液——50 mL

封板贴——4张

 


◆特点


 可检测血浆、血清、脑脊液样品

● 可特异性地对9-mer以上的高分子Aβ寡聚体进行定量



◆试剂盒功能


标准曲线范围※1

0.41~100 pM(人脑脊液)

0.16~40 pM(人血清及EDTA抗凝血浆)

反应Aβ寡聚体

≧9mer的Aβ寡聚体

检测对象样品

血清、EDTA抗凝血浆、脑脊液、in vitro Aβ寡聚体

所需样品量

人脑脊液:25 μL(4倍稀释)

人血清、血浆(EDTA):50 μL(2倍稀释)

检测时间

4.5 h

检测方法※2

发光法


※1 基于16-mer多抗原肽(MAP)标准品的换算值。

※2 检测时需要准备酶标仪。


图片.png



检测原理


本系列采取双抗体夹心法ELISA,使用抗Aβ抗体(BAN50)作为捕获抗体和检测抗体,与1~8-mer几乎不发生反应,与9-mer以上的Aβ寡聚体则发生特异性反应。使用带有16个抗Aβ抗体(BAN50的抗体识别序列的16-mer MAP肽作为标准品。


0817230865185236.jpg

1.jpg



◆高分子Aβ寡聚体的特异性数据


将Aβ1-42肽冷藏并孵育过夜后,通过超滤分离为不足30 kDa(8聚体以下)和30 kDa以上(9聚体以上),并使用Aβ抗体(BAN50)对各组进行Western Blot和ELISA(本方法)检测。


2.jpg


■ Western Blot(抗Aβ抗体(BAN50))

■ Aβ寡聚体ELISA

2615299998951358.jpg

2615299964383435.jpg


8聚体以下(<30 kDa)的Fraction B几乎检测不到信号;9聚体以上(≥30 kDa)的Fraction A则检测到强烈的信号。


 

检测案例


检测案例1:加标回收和稀释度线性测试


人血浆样品

未添加

+0.5 pM标准溶液

+1 pM标准溶液

+5 pM标准溶液

+30 pM标准溶液

检测值

检测值

Recovery

检测值

Recovery

检测值

Recovery

检测值

Recovery

1.85 pM

2.36 pM

102%

2.85 pM

100%

7.11 pM

105%

31.2 pM

97.80%

人血清样品

未添加

+0.5 pM标准溶液

+1 pM标准溶液

+5 pM标准溶液

+30 pM标准溶液

检测值

检测值

Recovery

检测值

Recovery

检测值

Recovery

检测值

Recovery

1.58 pM

2.07 pM

98%

2.59 pM

101%

6.64 pM

101%

31.9 pM

101%


人脑脊液①

未添加

+3 pM标准溶液

+6 pM标准溶液

+15 pM标准溶液

检测值

检测值

Recovery

检测值

Recovery

检测值

Recovery

5.16 pM

8.01 pM

95%

10.6 pM

91%

18.1 pM

86%

人脑脊液②

未添加

+10 pM标准溶液

+15 pM标准溶液

+35 pM标准溶液

检测值

检测值

Recovery

检测值

Recovery

检测值

Recovery

29.1 pM

38.8 pM

97%

44.0 pM

99.30%

59.9 pM

88%


201582180961.jpg



检测案例2:检测临床样品(脑脊液)


用本ELISA法检测非认知症患者(Control)、轻度认知障碍患者(MCI)阿尔茨海默病(AD)患者的脑脊液。



年龄

性别

MMSE※3

脑脊液Aβ寡聚体(pM)

Control
n=5

69

M

30

2.37

60

F

30

1.65

59

M

30

2.82

46

M

28

2.24

60

F

29

1.34

MCI
n=5

69

F

24

3.6

76

M

23

2.62

82

M

26

2.33

69

F

23

2.67

73

F

25

2.34

AD
n=8

79

F

10

3.56

88

M

24

3.13

62

M

16

4.13

78

M

13

3.95

63

M

14

3.88

74

F

16

3.25

76

M

19

3.69

84

M

16

4.34


※3:MMSE score:认知功能诊断问诊检查的分数

※3:MMSE score:30-28分:正常

※3:MMSE score:27-24分:怀疑有轻度认知障碍

※3:MMSE score:23分以下:怀疑严重认知症



201582181503.png

201582181535.png


非认知症患者(Control)、轻度认知障碍患者(MCI)阿尔茨海默病患者(AD)间的检测值差异明显。

结果表明,高分子Aβ寡聚体的检测值与MMSE Score相关。



◆对比表


产品名称

High Molecular Amyloid β Oligomer ELISA Kit Wako Ver.2

High Molecular Amyloid β Oligomer ELISA Kit Wako

产品编号

290-82001

298-80101

标准曲线范围※1

0.41~100 pM(人脑脊液)
    0.16~40 pM(人血清及EDTA抗凝血浆)

0.410~100 pM(人脑脊液)

反应Aβ寡聚体

≧9 mer的Aβ寡聚体

≧9 mer的Aβ寡聚体

检测对象样本

人血清、EDTA抗凝血浆、

脑脊液in vitro Aβ寡聚体

人脑脊液

in vitro Aβ寡聚体

必要样本体积

人脑脊液:25 μL(4倍稀释)
    人血清及EDTA抗凝血浆:50 μL(2倍稀释)

人脑脊液:25 μL(4倍稀释)

检测时间

4.5 h

4.5 h

检测方法※2

发光法

发光法


※1 基于16-mer多抗原肽(MAP)标准品的换算值。

※2 检测时需要准备酶标仪。

FAQ



关于检测样品


Q:可以用血浆、血清检测吗?

A:可以。

 


需要的器材、装置


Q:使用本产品检测时需要那些器材、装置?

A:● 纯化水(蒸馏水)

A:●  标准溶液/样品稀释用试管

A:● 清洗液稀释用玻璃容器(量筒/烧杯)

A:● 吸头更换型移液器(可准确移液10 μL或准确移液100~500 μL的一次性吸头)

A:● 连续分配移液器,可连续分配50 μL、100 μL的移液器

A:● 吸水纸(擦除清洗后微孔板上的残留液体)

A:● 混合器(Vortex型)

A:● 微孔板振荡器(约600~800 rpm)

A:● 96孔板清洗机(有更佳)或洗瓶

A:● 96孔板酶标仪(荧光检测用)

A:● 数据处理软件

 


试剂盒使用的抗体


Q:本产品的抗体可单独购买吗?

A:可以。请参考以下产品编号。

A:但是,虽然试剂盒中的捕获抗体为下述产品编号的产品,但检测用抗体使用的是下述产品的生物素标记抗体。

A:生物素标记抗体不对外销售。

    

      产品编号:013-26873

      产品名称:抗人β-淀粉样蛋白,单克隆抗体(BAN50)

 


试剂盒形式


Q:试剂盒可拆分使用吗?

A:可以。微孔板可拆卸成八联管使用,并提供了足够量的标准品。但拆分使用时,每次都需要制备标准曲线,因此

A:会减少可检测样品的数量。

■ 1次用完的情况下:

■ 可检测40个样品(80孔)

■ ※标准品占用其余的16个孔


■ 分两次用的情况下:

■ 可检测32个样品(64孔)

■ ※标准品占用其余的32个孔



产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
290-82001 High Molecular Amyloid β Oligomer ELISA Kit Wako Ver.2
 高分子β-淀粉样蛋白寡聚体ELISA试剂盒Wako Ver.2
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