β-Amyloid(Aβ) ELISA 试剂盒
β-淀粉样蛋白（Aβ）是阿尔茨海默病病理特征神经炎性斑的主要成分。淀粉样蛋白级联假说认为，Aβ的积累会引起神经原纤维缠结和神经变性，从而导致认知功能障碍。据报告，Aβ在阿尔茨海默病发病前20多年就开始逐渐积累，早期检测Aβ的积累有望预防和治疗阿尔茨海默病。此外，自从有报告指出可溶性β-淀粉样蛋白的寡聚体（Aβ寡聚体）具有神经毒性以来，“Aβ寡聚体假说”也备受关注，该假说认为Aβ寡聚体可能参与阿尔茨海默病中的神经细胞死亡。
FUJIFILM Wako的Aβ ELISA试剂盒使用武田药品工业开发的高特异性单克隆抗体。不仅可检测组织提取液、细胞培养上清和脑脊液，还可以检测传统试剂盒难以检测的血浆中Aβ40和Aβ42，现已在多篇论文中发表。另外，目前还开发了可特异性检测人血清，血浆及脑脊髓液中9聚体及以上的Aβ寡聚体的ELISA试剂盒。
◆何谓β-淀粉样蛋白（Aβ）？
β-淀粉样蛋白（Aβ）是含约40个氨基酸的多肽，也是阿尔茨海默病病理特征⸺神经炎性斑的主要成分。淀粉样蛋白级联假说认为，Aβ的积累会引起神经原纤维缠结和神经变性，从而导致认知功能障碍。据报告，Aβ在阿尔茨海默病发病前20多年就开始逐渐积累1），早期检测Aβ的积累有望预防和治疗阿尔茨海默病。
Aβ根据氨基酸的长度可分为几种分子，Aβ40和Aβ42主要由神经细胞分泌。其中Aβ42具有高聚集性和毒性，与疾病的发生和发展密切相关。此外，与健康者相比，阿尔茨海默病患者脑脊液（CSF）中的Aβ42减少2），Aβ42或Aβ42/Aβ40比值可用作阿尔茨海默病的早期生物标志物。血浆Aβ42/Aβ40比值也与脑内Aβ积累相关3），因此作为比CSF采样更容易的生物标志物而被寄予厚望，但其准确度仍存在局限，需进一步研究。
自从有报告指出可溶性β-淀粉样蛋白寡聚体（Aβ寡聚体）具有神经毒性以来，学术界提出了“Aβ寡聚体假说”，该假说认为Aβ寡聚体可能参与阿尔茨海默病中的神经元死亡4）。尽管发挥细胞毒性的寡聚体分子量等特征目前尚存争议，但其作为阿尔茨海默病治疗靶点的前景可期。此外，与Aβ42一样，CSF中的Aβ寡聚体也有望成为阿尔茨海默病诊断及病情评估的有效生物标志物5）。
◆Aβ ELISA试剂盒
FUJIFILM Wako的Aβ ELISA试剂盒使用武田药品工业开发的高特异性单克隆抗体。不仅可检测组织提取液、细胞培养上清和CSF，还可以检测传统试剂盒难以检测的血浆Aβ40和Aβ42，现已在多篇论文中发表。
产品系列
| 产品编号 | 产品名称 | 抗体克隆编号 | 人 | 小鼠/大鼠 | 检测对象样品 | 检测范围 （pmol/L） | |||||||
| 捕获 | 检测 | Aβ (1-40) | Aβ (1-42) | Aβ (x-40) | Aβ (x-42) | Aβ (1-40) | Aβ (1-42) | Aβ (x-40) | Aβ (x-42) | ||||
| 298-64601 | 人β-淀粉样蛋白（1-40） ELISA试剂盒Wako-Ⅱ | BAN50 | BA27 (F(ab')2) | 〇 | × | × | × | × | × | × | × | 脑脊液/脑组织提取液/ 血清/血浆/细胞培养上清液 | 1.0-100 |
| 294-64701 | 人/大鼠β-淀粉样蛋白（40） ELISA试剂盒Wako-Ⅱ | BNT77 | BA27 (F(ab')2) | 〇 | × | 〇 | × | 〇 | × | 〇 | × | 脑脊液/脑组织提取液/ 血清/血浆/细胞培养上清液 | 1.0-100 |
| 298-62401 | 人β-淀粉样蛋白（1-42） ELISA试剂盒Wako | BAN50 | BC05 (Fab') | × | 〇 | × | × | × | × | × | × | 脑脊液/脑组织提取液/ 血清※/血浆/细胞培养上清液 | 1.0-100 |
| 296-64401 | 人β-淀粉样蛋白（1-42） ELISA试剂盒Wako，高灵敏度 | BAN50 | BC05 (Fab') | × | 〇 | × | × | × | × | × | × | 脑脊液/脑组织提取液/ 血清※/血浆/细胞培养上清液 | 0.1-20 |
| 290-62601 | 人/大鼠β-淀粉样蛋白（42） ELISA试剂盒Wako | BNT77 | BC05 (Fab') | × | 〇 | × | 〇 | × | 〇 | × | 〇 | 脑脊液/脑组织提取液/ 血清※/血浆/细胞培养上清液 | 1.0-100 |
| 292-64501 | 人/大鼠β-淀粉样蛋白（42） ELISA试剂盒Wako，高灵敏度 | BNT77 | BC05 (Fab') | × | 〇 | × | 〇 | × | 〇 | × | 〇 | 脑脊液/脑组织提取液/ 血清※/血浆/细胞培养上清液 | 0.1-20 |
※ 虽然可以检测，但与血浆相比检测数值会随时间降低
数据
检测人和小鼠血浆
使用EDTA-2K真空采血管采血，5,000 xg、4℃离心15分钟分离血浆，使用前于-80℃保存。检测时，使用试剂盒附带的标准品稀释液将样品稀释4倍后，检测Aβ水平。 <使用试剂盒> Aβ(x-40)：人/大鼠β-淀粉样蛋白（40）ELISA试剂盒Wako-Ⅱ Aβ(x-42)：人/大鼠β-淀粉样蛋白（42）ELISA试剂盒Wako，高灵敏度 Aβ(1-40)：人β-淀粉样蛋白（1-40）ELISA试剂盒Wako-Ⅱ Aβ(1-42)：人β-淀粉样蛋白（1-42）ELISA试剂盒Wako，高灵敏度 |
数据提供：东京大学大学院医学系研究科神经病理学领域岩坪老师、桥本老师 |
◆高分子β-淀粉样蛋白寡聚体ELISA试剂盒Ver.2
FUJIFILM Wako的高分子β-淀粉样蛋白寡聚体ELISA试剂盒Wako Ver.2，可检测人血清、血浆和脑脊液中的Aβ寡聚体。使用对Aβ具有高亲和力的抗体（克隆编号：BAN50），可特异性检测9聚体及以上的Aβ寡聚体5-6）。
试剂盒性能
检测对象 | Aβ寡聚体 (≧9mer) |
标准曲线范围 | 0.41-100 pM (人脑脊液) |
检测对象样品 | 人脑脊液/血清/血浆(EDTA) |
所需样品量 | 人脑脊液：25 μL (4倍稀释) |
检测时间 | 约4小时30分钟 |
检测方法 | 发光法（需使用具备发光检测功能的酶标仪） |
检测原理
使用抗Aβ抗体（BAN50）作为捕获抗体和检测抗体的夹心法ELISA试剂 盒，可与9聚体及以上的Aβ寡聚体发生特异性反应，而与1-8聚体几乎不发生反应5-6）。标准品使用16聚体MAP肽，它具有16个抗Aβ抗体（BAN50）的抗体识别序列6）。
数据
对高分子Aβ寡聚体的特异性
将Aβ1-42肽（单体）冷藏孵育过夜，通过超滤分离为30 kDa以上（9聚体以上，Fraction A）和不足30 kDa（8聚体以下，Fraction B）两组，并使用抗Aβ抗体（BAN50）对各组分进行Western Blotting和ELISA检测。 【结果】 Aβ寡聚体经Western blotting按分子量分离。并且在ELISA 中，8聚体以下的Fraction B几乎检测不到信号，而9聚体及以上的Fraction A则检测到强烈的信号。 |
|
临床样品检测
检测非痴呆症患者（对照组）、轻度认知障碍患者（MCI）和阿尔茨海默病患者（AD）脑脊液中的高分子Aβ寡聚体，并分析与MMSE Score的相关性。
MMSE Score |
【结果】
对照组、MCI、AD组间的高分子Aβ寡聚体的检测值存在显著差异。检测值与MMSE Score呈负相关。
常见问题
Q1：标准品溶液的OD值过低，导致无法绘制校准曲线。这是如何发生的？
A1：有可能是实际洗板时间过长。尝试在２-３分钟内完成洗板操作。请在室温下使用清洗液。如果无法使用洗板机，首先轻轻地倒出孔内的溶
液（注意避免孔间交叉污染），使用洗瓶等向孔内加入清洗液，随后再次去除清洗液。重复该操作５次。在此种情况下，清洗的总时间也
不要超过２-３分钟。
Q2：标准溶液中的Aβ肽是否会聚集？
A2：标准溶液中的多肽不会聚集。可在冰箱内稳定保存。
Q3：测量值不一致。可能的原因？
A3：在清洗过程中，不同孔之间浸泡的时间（例如加入清洗液的用时）不同可能会导致结果不一致。使用移液器清洗的手动操作特别容易造成时间
偏差。为了确保每孔的浸泡时间尽可能接近，可以尝试这种方式进行清洗操作，如第一次清洗时，从孔板的右侧开始，第二次清洗时从左侧开
始。
Q4：保存方法
A4：人体样品，如脑组织和脑脊液请冷冻保存在冰箱中，但某些样品在此条件下保存后会发生测量值降低的情况。如果Aβ的浓度过低，则应当避
免反复冻融样品。对于细胞培养上清，加入 0.2% 牛血清白蛋白和 0.075% CHAPS（浓度为两者的终浓度）可以降低对容器壁的吸附从而减
少损失，再放入冰箱冷冻保存。
Q5：可以测量血清样品吗？
A5：可行。但不建议这样做，因为血清的测量值通常低于同时采血的血浆的测量值。血清样品冷藏保存时也容易导致更大程度的数值变化。
Q6：对于血浆样品使用何种抗凝剂？
A6：我们推荐 EDTA2K。EDTA2Na 和肝素也可使用。
Q7：除了所示浓度之外，可以将标准品稀释成其他浓度吗？
A7：没有问题。可以根据实验体系，制备一系列适合您的稀释浓度。
Q8：是否可以使用除对数以外的其他类型校准曲线？
A8：没有问题。
Q9：建议样品进行复孔（n=2）测定，标准品是否也有必要进行复孔测定？
A9：建议标准品也进行复孔（ｎ=２）测定，但如果检测样品较多，请根据实验需求进行安排，如ｎ=１。
Q10：开封后的试剂应当如何保存？
A10：将微孔板放回铝箔袋内并放入干燥剂，可以冷藏在冰箱内稳定保存。
参考文献
1. Bateman, R. J. et al.: N. Engl. J. Med., 367(9) , 795(2012).
Clinical and biomarker changes in dominantly inherited Alzheimer's disease
2. Shaw, L. M. et al.: Ann. Neurol, 65(4) , 403(2009).
Cerebrospinal fluid biomarker signature in Alzheimer's disease neuroimaging initiative subjects
3. Brand, A. L. et al.: Alzheimers Res. Ther., 14(1) , 195(2022).
The performance of plasma amyloid beta measurements in identifying amyloid plaques in Alzheimer's disease: a literature review
4. Selkoe, D. J.: Science, 298 (5594) , 789(2002).
Alzheimer's disease is a synaptic failure
5. Fukumoto, H. et al.: FASEB J., 24 (8) , 2716 (2010).
High-molecular-weight beta-amyloid oligomers are elevated in cerebrospinal fluid of Alzheimer patients
6. Kasai, T. et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun., 422 (3) , 375 (2012).
Utilization of a multiple antigenic peptide as a calibration standard in the BAN50 single antibody sandwich ELISA for Aβ oligomers
使用文献
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 298-64601 | Human β Amyloid(1-40)ELISA Kit Wako Ⅱ 人淀粉样蛋白抗体（1-40）ELISA试剂盒II |
96次用 | 免疫化学用 | |
| 294-64701 | Human/Rat Beta Amyloid(40) ELISA Kit Ⅱ 人/大鼠淀粉样蛋白抗体（40）ELISA试剂盒II |
96次用 | 免疫化学用 | |
| 298-62401 | Human β Amyloid(1-42) ELISA Kit Wako 人淀粉样蛋白抗体（1-42）ELISA试剂盒 |
96次用 | 免疫化学用 | |
| 296-64401 | Human β Amyloid(1-42) ELISA Kit Wako, High Sensitive 人淀粉样蛋白抗体（1-42）高灵敏度ELISA试剂盒 |
96次用 | 免疫化学用 | |
| 290-62601 | Human/Rat Beta Amyloid(42)ELISA Kit Wako 人/鼠大淀粉样蛋白抗体（42）ELISA试剂盒 |
96次用 | 免疫化学用 | |
| 292-64501 | Human/Rat Beta Amyloid(42) ELISA Kit Wako, High Sensitive 人/大鼠淀粉样蛋白抗体（42）高灵敏度ELISA试剂盒 |
96次用 | 免疫化学用 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 290-82001 | High Molecular Amyloid β Oligomer ELISA Kit Wako Ver.2 高分子β-淀粉样蛋白寡聚体ELISA试剂盒Wako Ver.2 |
96次用 | 免疫化学用 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 017-26871 | Anti Human Amyloid β, Monoclonal Antibody（BAN50） 抗人β-淀粉样蛋白，单克隆抗体（BAN50） |
10 μL | 免疫化学用 | |
| 013-26873 | Anti Human Amyloid β, Monoclonal Antibody（BAN50） 抗人β-淀粉样蛋白，单克隆抗体（BAN50） |
50 μL | 免疫化学用 | |
| 010-26883 | Anti Amyloid β, Monoclonal Antibody(BNT77) β-淀粉样蛋白，单抗(BNT77) |
50 μL | 免疫化学用 | |
| 014-26901 | Anti Amyloid β42(43), Monoclonal Antibody(BC05) 抗β-淀粉样蛋白42（43），单克隆抗体（BC05） |
10 μL | 免疫化学用 | |
| 010-26903 | Anti Amyloid β42(43), Monoclonal Antibody(BC05) 抗β-淀粉样蛋白42（43），单克隆抗体（BC05） |
50 μL | 免疫化学用 | |
| 018-26921 | Anti Amyloid β40, Monoclonal Antibody(BA27) 抗β-淀粉样蛋白40，单克隆抗体（BA27） |
10 μL | 免疫化学用 | |
| 014-26923 | Anti Amyloid β40, Monoclonal Antibody(BA27) 抗β-淀粉样蛋白40，单克隆抗体（BA27） |
50 μL | 免疫化学用 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 334-43591 | Amyloid beta-Protein (Human, 1-16) 淀粉样β蛋白（人，1-16） |
0.5 mg | ||
| 330-44811 | Amyloid β-Protein (Human, 1-28) 淀粉样β-蛋白（人，1-28） |
0.5 mg | ||
| 331-44841 | Amyloid β-Protein (Human, 1-38) 淀粉样β-蛋白（人，1-38） |
0.5 mg | ||
| 330-43071 | Amyloid beta-Protein (Human, 1-40) 淀粉样β-蛋白（人，1-40） |
0.5 mg | ||
| 336-43791 | Amyloid beta-Protein (Human, 1-40) [HCl Form] 淀粉样β-蛋白（人，1-40）[HCl形式] |
0.5 mg | ||
| 336-45131 | Amyloid β-Protein (Human, 1-40) (Scrambled) | 0.1 mg | ||
| 338-43491 | Amyloid beta-Protein (Human, 1-42) 淀粉样β蛋白（人，1-42） |
0.5 mg | ||
| 333-45141 | Amyloid β-Protein (Human, 1-42) (Scrambled) | 0.1 mg | ||
| 335-00781 | Amyloid β-Protein (1-42, O-acyl isopeptide) | 2 mg | ||
| 333-43701 | Amyloid beta-Protein (Human, 1-43) 淀粉样β-蛋白（人，1-43） |
0.5 mg | ||
| 333-44921 | Amyloid β-Protein (Human, 11-40) | 0.5 mg | ||
| 334-43091 | Amyloid beta-Protein (Human, 25-35) 淀粉样β蛋白（人，25-35） |
0.5 mg | ||
| 332-44131 | Amyloid beta-Protein(40-1) 淀粉样β蛋白（40-1） |
0.1 mg | ||
| 337-44201 | Amyloid beta-Protein(42-1) | 0.1 mg | ||
| 336-43671 | [Pyr3]-Amyloid beta-Protein (Human, 3-42) [Pyr3]-淀粉样β蛋白（人，3-42） |
0.5 mg | ||
| 330-44931 | [Pyr11]-Amyloid β-Protein (Human,11-40) [ pyr11 ] -淀粉样蛋白（人，β1-40） |
0.5 mg |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 296-80401 | Tau ELISA Kit Wako Tau ELISA试剂盒 |
96次用 | 免疫化学用 | |
| 296-80401 | Phosphorylated Tau T181 ELISA Kit Wako 磷酸化Tau T181 ELISA试剂盒 |
96次用 | 免疫化学用 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 017-26893 | Anti Human/Mouse/Rat Tau, Rat Monoclonal Antibody(RTM38) 抗人/小鼠/大鼠Tau，大鼠单克隆抗体（RTM38） |
50 μL | 免疫化学用 | |
| 015-26953 | Anti Human Tau, Rat Monoclonal Antibody(RTM49) 抗人Tau，大鼠单克隆抗体（RTM49） |
50 μL | 免疫化学用 | |
| 012-26963 | Anti Mouse Tau, Rat Monoclonal Antibody(RTM47) 抗鼠Tau，大鼠单克隆抗体（RTM47） |
50 μL | 免疫化学用 | |
| 016-26601 | Anti Phosphorylated Tau T181, Rat Monoclonal Antibody (2E2-A6) 抗磷酸化Tau T181，大鼠单克隆抗体（2E2-A6） |
50 μL | 免疫化学用 | |
| 013-26611 | Anti Phosphorylated Tau S199,Rat Monoclonal Antibody(5B8-1E2) 抗磷酸化Tau S199，大鼠单克隆抗体（5B8-1E2） |
50 μL | 免疫化学用 | |
| 010-27123 | Anti Phosphorylated Tau S262, Rat Monoclonal Antibody(TIP1-35) 抗磷酸化Tau S262，大鼠单克隆抗体（TIP1-35） |
50 μL | 免疫化学用 | |
| 012-27683 | Anti Phosphorylated Tau S422, Monoclonal Antibody(AP422) 抗磷酸化Tau S422，大鼠单克隆抗体（AP422） |
50 μL | 免疫化学用 | |
| 016-26581 | Anti 3R-Tau, Rat Monoclonal Antibody(2A1-1F4) 抗3R-Tau，大鼠单克隆抗体（2A1-1F4） |
50 μL | 免疫化学用 | |
| 019-26593 | Anti 4R-Tau, Monoclonal Antibody(3E8-1A6) 抗4R-Tau，单克隆抗体（3E8-1A6） |
50 μL | 免疫化学用 | |
| 013-26591 | Anti 4R-Tau, Monoclonal Antibody(3E8-1A6) 抗4R-Tau，单克隆抗体（3E8-1A6） |
50 μL | 免疫化学用 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 198-18101 | Silver Protein 蛋白银 |
3 g | 3 g 病理研究用 |
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