Bst DNA Polymerase
链置换酶
◆产品说明
本产品具有5’→ 3’DNA聚合酶活性与链置换活性，是一款自动从模板双链DNA的氢键解离，然后后合成新DNA链的酶。由于其特性，耐热性链置换DNA聚合酶无需DNA的双链解离，即可在恒定温度下合成DNA，且合成不受DNA二级结构的抑制。
特点
● 具有5’→ 3’DNA聚合酶活性与链置换活性
● 可在恒定温度下合成DNA
● 适用于合成GC含量高的DNA链
● 合成不受DNA二级结构抑制
应用
● 利用链置换活性的应用（等温基因扩增法等）
Bst DNA Polymerase
理想反应温度 | 60°C～65°C |
失活时间*1 | 80°C、5 min |
*1 将酶原液直接热变性时的失活温度
来源 | Geobacillus stearothermophilus |
活性 | 8 units/μL |
单位定义 | 1 unit指以小牛胸腺DNA为引物/模板，在65°C，30 min的条件下将10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物的 酶量。 |
储存液成分 | 10 mmol/L Tris-HCl（pH 7.5）, 1 mmol/L DTT, 0.1% Tween 20, 0.1 mmol/L EDTA, 50% Glycerol |
酶反应条件 | 随酶附带10×的酶反应专用缓冲液（0.5 mL×1）。如反应总体积为50 μL，添加5 μL的酶反应专用缓冲液 |
◆产品组成
Bst DNA Polymerase（1,600 units）
产品组分 | 容量 | 保存 |
Bst DNA Polymerase（8 units/μL） | 200 μL × 1 | -20°C |
10 × Bst Reaction Buffer（80 mmol/L Mg2+） | 500 μL × 1 | -20°C |
◆应用实例
实验案例1 LAMP法中的运用
LAMP法 反应条件
| 3.0% Agarose 21 TAE凝胶电泳 EtBr染色
M：Gene Ladder Wide 1 1：A 公司Bst DNA Polymerase 2：本公司Bst DNA Polymerase |
Candidatus Liberibacter asiaticus DNA | 1 × 106 copies |
FIP* | 40 pmol |
BIP* | 40 pmol |
F3 Primer* | 5 pmol |
B3 Primer* | 5 pmol |
Loop Primer F* | 20 pmol |
Loop Primer B* | 20 pmol |
dNTPs Mixture | 1.4 mM each |
10 × Bst Reaction Buffer | 2.5 μL |
Bst DNA Polymerase | 8 units |
Total | 25 μL |
反应
65°C | 60 min |
*引物序列
FIP: 5'-GCATGCCGAGGATCAATGCCTTGCTTAAAGAGCGTGCTACG-3'
BIP: 5'-TATGCCTAATGGCACGGGGGTAAGCTTCATCCGCCTTCGA-3'
F3 Primer: 5'-TGGGTTAAGTGATGCTGTGG-3'
B3 Primer: 5'-CAACAATATCAGCCCCTGCT-3'
Loop Primer F: 5'-TCTCAACTGTTTCATCAAACCTAGC-3'
Loop Primer B: 5'- CGTGGCGGTTTTTGCTACA-3'
实验案例2 RCA法评估Bst DNA Polymerase的耐热性与理想反应温度
RCA法 反应溶液组成
M13mp18 single strand DNA | 40 ng |
Universal primer | 50 mM |
dNTPs Mixture | 1.4 mM each |
Tris-HCl (pH 8.8 at 25°C) | 20 mM |
KCl | 10 mM |
(NH4)2SO4 | 10 mM |
MgSO4 | 8 mM |
Tween 20 | 0.10% |
Betaine | 0.8 M |
Bst DNA Polymerase | 4 units |
Total | 20 μL |
反应条件
各个温度下 | 30 min |
结果
条带
M： Gene Ladder Wide 1 (产品编号313-06961)
D： 模板 DNA (M13mp8 single strand, 产品编号319-00841)
引物序列（Universal Primer）
5'-GTTTTCCCAGTCACGACGTTGTA-3'
电泳条件
0.7% Agarose S / TAE凝胶电泳
EtBr染色
使用不含SDS的Loading Buffer
备注
本实验为比较两种Bst DNA Polymerase，使用相同的反应液组成进行反应。在RCA法中使用各种酶配套的专用缓冲液时，须进行预实验探究反应体系。
◆相关信息
备注
● 本产品为实验研究用试剂。不可作为医药品使用。
● 检测Candidatus Liberibacter asiaticus的LAMP引物组合是国立研究开发法人 农业、食品产业技术综合研究机构 九州冲绳农业研究中心灵活运用先进技术，在农林水产研究高度化事业“抑制顽固性疾病柑橘绿化病传播的技术开发”中开发的产品。
License
● LAMP（Loop-mediated Isothermal Amplification）法由荣研化学株式会社持有专利权。
◆产品列表
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
Bst DNA Polymerase | 1600 units |
◆相关产品
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
Csa DNA Polymerase | 1600 units | |
96-7 DNA Polymerase | 1600 units | |
dNTPs Mixture（25 mM each） | 400 μL |
※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。
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