SARS-CoV-2 N501Y Mutation Detection Kit
SARS-CoV-2 N501Y 突变检测试剂盒
◆试剂盒组成
供20次反应用 | |
RT Enzyme Mix (20×) RT 酶混合物（20x） | 20 µL x 1支 |
One-Step Reaction Mix (2×) 一步反应混合物（2×） | 200 μL x 2支 |
501N Wild type Primer/Probe (Probe:FAM) 501N 野生型引物＆探针混合物（探针：FAM） | 10 µL x 1支 |
N501Y Mutant Type Primer/Probe (Probe:FAM) N501Y 突变型引物＆探针混合物（探针：FAM） | 10 µL x 1支 |
供200次反应用 | |
RT Enzyme Mix (20×) RT 酶混合物（20x） | 200 µL x 1支 |
One-Step Reaction Mix (2×) 一步反应混合物（2×） | 1 mL x 2支 |
501N Wild type Primer/Probe (Probe:FAM) 501N 野生型引物＆探针混合物（探针：FAM） | 100 µL x 1支 |
N501Y Mutant Type Primer/Probe (Probe:FAM) N501Y 突变型引物＆探针混合物（探针：FAM） | 100 µL x 1支 |
◆背景
新冠病毒突变株在世界范围内不断扩散，感染人数也在不断增多。如Alpha (B.1.1.7)、Beta (B.1.351) 和 Gamma (P.1) 突变株都有着N501位点的突变，与常规毒株相比，具有更强的感染性。
※ Alpha (B.1.1.7)：英国最先检测出的突变株
Beta (B.1.351)：南非最先检测出的突变株
Gamma (P.1)：巴西最先检测出的突变株
通过FUJIFILM Wako研发的Primer技术，可以高灵敏度检测难以检测的基因点突变。本试剂盒可以快速、简便地检测N501Y突变。
◆特点
● 判定容易
使用突变株与常规株（无突变）的Primer/Probe （引物/探针）套装，通过比较Ct值进行判定
● 使用一步法RT-qPCR，快速检测突变
约70 min即可完成
● 使用FUJIFILM Wako研发的Primer/Probe（引物/探针）套装，高灵敏度检测突变
● 所有突变株可在相同反应条件下进行检测
由于N501Y、E484K、L452R、E484Q的PCR反应条件相同，因此可在同一块96孔板中进行检测。
◆检测原理
采用TaqMan® 探针的One Step RT-qPCR法进行检测。
利用FUJIFILM Wako开发的Primer引物技术，高灵敏度检测点突变。
▼使用前 病毒RNA量较多时，在突变株中使用常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Primer/Probe”，也可以观察到扩增信号。 务必使用常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Primer/Probe”和突变株检测用的“N501Y Mutant Type Primer/Probe”两种试剂进行检测。 比较两种试剂的Ct值，若突变株检测用“N501Y Mutant Type Primer/Probe”的Ct值小，则可判断病毒为N501Y突变株。 |
◆突变株的检测应用数据
本试剂盒已检测出以下4种新冠病毒（SARS-CoV-2）株。
● Alpha (B.1.1.7)突变株（QHN001、N501Y突变，由国立感染症研究所提供）
● Beta (B.1.351)突变株（TY8-612、N501Y突变、E484K突变，由国立感染症研究所提供）
● Gamma (P.1)突变株（TY7-501、N501Y突变、E484K突变，由国立感染症研究所提供）
● VR-1986HK（N501Y无突变、E484K无突变 ATCC)
拷贝数：5000、500、50copies/Well 3种
循环数：45
① Alpha (B.1.1.7)突变株：QHN001（N501Y突变）
5,000 copies | 500 copies | 50 copies | |
Alpha型 （含N501Y突变） |
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对于含有N501Y突变的alpha (B.1.1.7)突变株，利用突变株检测用“N501Y Mutant type Primer/Probe”，可以确认到扩增信号。另外，在常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Prime＆Probe”中未观察到扩增，由此判断为N501Y突变株。
②Beta (B.1.351)突变株：TY8-612（N501Y突变、E484K突变）
5,000 copies | 500 copies | 50 copies | |
Beta型：TY8-612 （N501Y 突变，E484K 突变） |
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常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Prime/Probe”，在5,000 copies的条件下可观察到轻微的扩增信号，但突变株的可以在更低Ct值下检测到，由此判断为N501Y突变株。在复制500 copies和50 copies的条件下，未检测到常规株（非突变）的扩增信号。
③Gamma (P.1)突变株：TY7-501（N501Y突变、E484K突变）
5,000 copies | 500 copies | 50 copies | |
Gamma型 （N501Y 突变，E484K 突变） |
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对于含有N501Y突变的巴西株突变株，利用突变株检测用的“N501Y Mutant type Primer/Probe”，可以确认到扩增信号。
常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Prime＆Probe”，在复制5,000 copies的条件下可观察到扩增信号，但突变株的可以在更低Ct值下检测到，由此判断为N501Y突变株。在500 copies和500copies的条件下，未能检测到常规株（非突变）的扩增信号。
④VR-1986HK（N501Y无突变、E484K无突变）
5,000 copies | 500 copies | 50 copies | |
无突变 |
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对于不含N501Y突变和E484K突变的VR-1986HK，利用常规株（非突变）检测用的“501N Wild type Primer/Probe”，可以确认到扩增信号。在突变株检测用的“N501Y Mutant type Prime/Probe”中未观察到扩增，由此判断为常规株的突变株。
◆PCR反应条件
◆常规株以及突变株的基因型
◆产品列表
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
SARS-CoV-2 N501Y Mutation Detection Kit | 20次反应用 | |
供200次反应用 |
◆相关产品
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
SARS-CoV-2 E484K Mutation Detection Kit | 供200次反应用 | |
285-33801 | SARS-CoV-2 RT-qPCR Detection Kit Ver.2 | 供200次反应用 |
SARS-CoV-2 Lysis buffer Ver.2 | 供200次反应用 | |
FAQ
Q：能否判定新冠病毒阳性/阴性？
A：本试剂盒检测阳性样品中是否存在基因突变，无法判定阳性/阴性。
Q：能否检测用直接PCR法简单提取的RNA样品？
A：本试剂盒无法检测简单提取的RNA。请使用RNA提取/纯化试剂盒等生成的RNA。
离心柱：ISOSPIN Viral RNA（产品编号： 310-08931, 日本基因）
自动核酸提取仪：QuickGene-Auto 12S/24S（倉敷紡績，还需要QuickGene AutoS RNA Virus Kit）
Q：试剂盒包装“200 Reactions”是什么意思？
A：【200 Reactions】是指实时PCR可以分开200孔进行。1个样品需要2个孔，即100个样品。
① 含有常规株的Primer＆Probe的孔
② 含有突变株的Primer＆Probe的孔
Q：试剂盒中是否包含病毒的阳性对照RNA？
A：本试剂盒不含阳性对照。若有需要，请向FUJIFILM Wako客服咨询。
Q：当野生株和突变株的扩增曲线均起峰时，应如何判断？
A：如果病毒量高，无论是突变株样品，还是野生株，都有可能在其Primer＆Probe中观察到扩增信号。然而，在此情况下，突变株的扩增信号上升
得更快（Ct值小）。请务必通过突变株和常规株用的两种Primer＆Probe进行检测，以确定 Ct 值的差异。
Q：是否存在E484K单独突变？
A：不含N501Y突变、但含E484K突变的E484K单独突变株，已被确认为R.1株。但目前的信息较少，日本国立传染病研究所认为它是需要关注的突
变株（VOI），而不是高关注突变株（VOC）。
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