高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒
Mature BDNF ELISA Kit Wako, High Sensitive
脑源性神经营养因子（BDNF: Brain-derived neurotrophic factor）是大脑中丰富的神经营养因子之一，参与神经发生、神经保护和突触形成等。此外，它还有望作为抑郁症等精神疾病的生物标志物。
BDNF的前体proBDNF经加工，成为Mature BDNF（mBDNF）。据报告，proBDNF和mBDNF拥有不同的生理活性，因此，区分和检测每种BDNF非常重要。
高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒Wako可高灵敏度检测样品中的mBDNF。采用发光检测系统，灵敏度是显色检测系统mBDNF ELISA试剂盒（产品编号：296-83201）的约35倍。因此，可以检测传统试剂盒难以检测的小鼠血清、血浆和人唾液中的mBDNF。此外，与proBDNF的交叉性也比现有产品低，可特异性检测mBDNF。
| 通知 |
本试剂盒为“高灵敏度Mature BDNF ELISA试剂盒（产品编号：298-83901，以下称旧款试剂盒）”的改良试剂盒。旧款产品已于2023年6月 30日终止销售。 相比旧款试剂盒，本产品可更高灵敏度地检测mBDNF，并且两款试剂盒的检测值具有相关性。推荐使用过旧款试剂盒的客户继续使用本试剂 盒。 |
◆特点
● 高灵敏度检测mBDNF
标准曲线的下限值为0.116 pg/mL，可检测传统试剂盒难以检测的小鼠血清、血浆和人唾液中的mBDNF。
● 与proBDNF几乎无交叉，可特异性检测mBDNF
与人proBDNF的交叉率为1.30%，与小鼠proBDNF的交叉率为0.328%。
表1 比较FUJIFILM Wako试剂盒和传统试剂盒
本试剂盒 | FUJIFILM Wako | A公司试剂盒 | B公司试剂盒 | C公司试剂盒 | |
标准曲线下限值 | 0.116 pg/mL | 4.1 pg/mL | 62.5 pg/mL | 15.6 pg/mL | 15.0 pg/mL |
与人proBDNF的交叉率 | 1.30 % | 约10 ％ | 约10 % | 约15 % | 约50 % |
◆试剂盒组成
96次用 | |
抗体包被酶标板 | 1 plate |
Mature BDNF标准品 （冻干品） | 1支 |
缓冲液 | 60 mL |
生物素标记抗体（冻干品） | 1支 |
HRP-Streptavidin溶液 | 100 μL |
发光试剂 1 | 6 mL |
发光试剂 2 | 6 mL |
清洗液(10x) | 100 mL |
封板膜 | 4 张 |
◆检测原理
本试剂盒使用mBDNF的N端断面特异性单克隆抗体与BDNF单克隆抗体组合而成的夹心法ELISA。通过使用Mature BDNF的N端断面识别抗体，抑制与proBDNF的交叉反应性，并使用发光底物提高了灵敏度。
◆试剂盒性能
| 标准曲线范围 | 0.116 - 50 pg/mL |
| 检测对象 | Mature BDNF |
| 检测对象样品 | 人：血清/血浆/唾液 小鼠：血清/血浆/脑匀浆 大鼠：血清/血浆 |
| 所需样品量 | 13 μL（4倍稀释时） |
| 检测时间 | 约4 h |
| 检测法 | 发光系统（需要发光检测用读取器） |
◆标准曲线示例
◆检测数据
加标回收测试
人
样品 | 添加量 | 检测值 | 回收量 | 回收率（%） |
唾液 | 0 | 0.386 | － | － |
0.5 | 0.875 | 0.489 | 97.8 | |
5 | 5.47 | 5.08 | 102 | |
30 | 30.1 | 29.7 | 99 | |
平均 | 99.6 | |||
血清 | 0 | 5.74 | － | － |
0.5 | 6.21 | 0.47 | 94 | |
5 | 10.9 | 5.16 | 103 | |
30 | 35.7 | 30 | 100 | |
平均 | 99 | |||
血浆 | 0 | 4.27 | － | － |
0.5 | 4.78 | 0.51 | 102 | |
5 | 9.53 | 5.26 | 105 | |
30 | 34.4 | 30.1 | 100 | |
平均 | 102 | |||
小鼠
样品 | 添加量 | 检测值 | 回收量 | 回收率（%） |
血清 | 0 | 0.646 | － | － |
0.5 | 1.11 | 0.464 | 92.8 | |
5 | 5.38 | 4.73 | 94.6 | |
30 | 30.7 | 30.1 | 100 | |
平均 | 95.8 | |||
血浆 | 0 | 0.116 | － | － |
0.5 | 0.614 | 0.498 | 99.6 | |
5 | 4.78 | 4.66 | 93.2 | |
30 | 32.2 | 32.1 | 107 | |
平均 | 99.9 | |||
大鼠
样品 | 添加量 | 检测值 | 回收量 | 回收率（%） |
血清 | 0 | 0.86 | － | － |
0.5 | 1.33 | 0.47 | 94 | |
5 | 6.03 | 5.17 | 103 | |
30 | 28.5 | 27.6 | 92 | |
平均 | 96.3 | |||
血浆 | 0 | 0.767 | － | － |
0.5 | 1.26 | 0.493 | 98.6 | |
5 | 5.95 | 5.18 | 104 | |
30 | 28.4 | 27.6 | 92 | |
平均 | 98.2 | |||
稀释线性测试
人
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小鼠
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大鼠
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与其他相似蛋白的交叉率
确认与proBDNF和神经营养因子家族（NGF、NT-3和NT-4）之间的交叉性。
生物种类 | 蛋白 | 交叉率(%) |
人 | proBDNF | 1.3 |
NGFβ | < 0.232 | |
NT-3 | < 0.232 | |
NT-4 | < 0.232 | |
小鼠 | proBDNF | 0.328 |
NGFβ | < 0.232 | |
NT-3 | < 0.232 | |
NT-4 | < 0.232 |
【结果】
可以确认与proBDNF和神经营养因子家族（NGF、NT-3和NT-4）几乎没有交叉。
野生型和BDNF敲除小鼠脑匀浆的检测
为确认对BDNF的特异性，使用本试剂盒检测野生型小鼠和BDNF敲除小鼠脑匀浆中的mBDNF。
【结果】
BDNF敲除小鼠的检测值非常低，可确认对BDNF的特异性高。
◆产品列表
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
Mature BDNF ELISA Kit Wako, High Sensitive | 96次 | 免疫化学用 |
相关产品
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
Mature BDNF ELISA Kit Wako | 96次 | 免疫化学用 | |
Anti BDNF, Monoclonal Antibody(2D7) | 100 μL | 免疫化学用 | |
Anti BDNF, Monoclonal Antibody(3C8) | 100 μL | 免疫化学用 | |
Anti proBDNF, Monoclonal Antibody(3C10H) | 100 μL | 免疫化学用 |
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FAQ
◆关于样品
Q1. | 如何储存样品？ |
A1. | 长期存储样品建议在-80℃以下冻存。 |
Q2. | 采集唾液样品的推荐方法？ |
A2. | 采集检测用的唾液推荐使用流涏法。流涏法是通过将唾液滴入小瓶或试管来收集样品的方法。 已确认使用棉花和灭活的聚合物材料制的棉签采集的样品，检测结果与流涏法相当。但需注意，不同的棉签材质，可能会吸附待测物质。 |
Q3. | 若唾液样品的检测效果不好，应如何解决？ |
A3. | 使用粘稠的唾液可能会无法得到预期的检测值。这时，可先将采集的唾液进行冻融，去除粘蛋白等不溶物，然后使用离心分离（例如：1500×g，15 min）后的上清液作为样品进行检测。 |
Q4. | 检测小鼠脑匀浆时推荐使用何种提取Buffer？ |
A4. | 请使用添加了Protease Inhibitor的RIPA Buffer。为了避免Buffer中表面活性剂成分的影响，请使用试剂盒随附的Buffer稀释2倍以上后使用。 |
Q5. | 请问各样品的推荐稀释倍率是多少？ |
| A5. | 稀释倍率的标准如下所示。实验前，请在标准曲线范围内选择合适的稀释倍率。 |
样品 | 稀释倍率 |
小鼠血清和血浆 | 4倍 |
小鼠脑匀浆 | 2~320倍 |
大鼠血清 | 50倍(标准) |
大鼠血浆 | 30倍(标准) |
人血清 | 10~800倍(标准) |
人血浆 | 10~80倍(标准) |
人唾液 | 2~8倍 |
◆关于本试剂盒
Q1. | 使用本产品进行检测时需要哪些器具和设备？ |
A1. | ● 纯净水（蒸馏水） ● 标准溶液/样品稀释用试管 ● 清洗液稀释用玻璃器皿（量筒、烧杯） ● 可更换吸头的移液器（可准确吸取10 µL和200-500 µL的一次性吸头） ● 多道移液器（可连续分液100 µL） ● 纸巾等吸水性材料（擦拭清洗后微孔板上残留的液体） ● 混合振荡器（Vortex型） ● 微孔板振荡器（约600～800 rpm） ● 96孔板用洗板机（建议使用）或洗瓶 ● 96孔板用读取器（发光检测用） ● 数据处理软件 |
Q2. | 试剂盒中的抗体可单独购买吗？ |
A2. | 不可以。 |
Q3. | 试剂盒可以拆分使用吗？ |
A3. | 可以。试剂盒使用了8联排可拆卸酶标板，并配有足够标准品。但拆分使用时，每次都需要绘制标准曲线，因此可检测的样品数量会减少。 单次使用 → 40个样品（80孔）*标准品占用16孔 分两次使用 → 32 个样品（64 孔） *标准品占用32孔 |
| 免责声明 |
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