mtDNA Extractor® CT Kit
提取组织 · 细胞 · 复合饲料中的线粒体DNA
本产品是可在短时间内提取哺乳动物组织以及细胞内的线粒体DNA（mtDNA）的试剂盒。此外，还可用于从复合饲料中提取mtDNA。
◆特点
l 只需少量组织样品（5 mg），即可提取适用于 PCR 反应的 mtDNA。
l 从 50 mg组织（ 250 mg 骨骼肌） 中提取的mtDNA可通过琼脂糖凝胶电泳确认。
l 所提取的mtDNA纯度高，后续可用于PCR和限制性内切酶酶切分析。
l 可从冷冻组织中提取mtDNA。
l 无需添加如苯酚、氯仿等有机溶剂。
◆原理
1. 通过离心从细胞裂解液中获得线粒体断片。
2. 为除去线粒体断片中的基因组DNA，本试剂盒采用质粒DNA纯化中的碱-SDS方法，通过使基因组DNA碱发生变性并沉淀析出后，回收mtDNA（环状DNA）。
3. 使用碘化钠令混入的蛋白质等变为可溶性物质，再通过洗涤缓冲液纯化mtDNA。
◆试剂盒组成
1. Buffer for Homogenate（匀浆缓冲液）
2. DNA Extraction Solution 1
3. DNA Extraction Solution 2(A)
4. DNA Extraction Solution 2(B)
5. DNA Extraction Solution 3
6. 碘化钠溶液
7. 洗涤液
◆实验流程
◆实验示例
从小鼠的新鲜组织以及冷冻组织中提取mtDNA
从小鼠的新鲜组织中提取的mtDNA，取其中一半用Pst l处理，通过琼脂糖凝胶电泳进行确认。
从小鼠的冷冻组织中提取的mtDNA，取其中一半用Pst l处理，通过琼脂糖凝胶电泳进行确认。
◆使用过程中的注意事项
由于使用本试剂盒提取的mtDNA量较少，因此需要通过GelRed™染色才能在凝胶上被检测出来。本试剂盒无法用于溴化乙锭染色检测。
Q&A
问题 | 原因 | 对策 |
mtDNA 条带变模糊 | 组织样品放置过久。 | 尽可能使用新鲜的组织样品。也可使用在-80℃下储存 1个月以内的冷冻组织，或在-20℃下储存1周以内 的冷冻组织。 |
DNA 扩增反应中的DNA 未得到 扩增 | 在提取过程中，DNA沉淀与上清一起被丢弃。 | DNA沉淀离心后容易从容器底部剥落，因此需小 心去除上清。 |
添加DNA Extraction Solution II，离心后，上清中 混入了DNA沉淀。 | DNA沉淀可能会抑制DNA扩增反应，因此需要再 次进行离心操作以完全去除沉淀。 | |
DNA 清洗不充分。 | 使用Washing Solution 清洗后进行乙醇沉淀， 充分清洗DNA。 | |
基因组 DNA 污染严重 | 使用了长期储存后的DNA Extraction Solution II（A）和（B）的混合溶液。 | 原则上现配现用，需要储存时，请在3周内使用 完毕。 |
分别添加DNA Extraction SolutionⅠ、DNA Extraction SolutionII、DNA Extraction Solution Ⅲ后未充分混合。 | 添加试剂后，用涡旋搅拌器充分搅拌液体。 | |
mtDNA 回收率低 | 组织未充分裂解。 | 应使用自动搅拌器，以1,000 rpm的高速尽快 进行匀浆。 |
手动匀浆。 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 291-55301 | mtDNA Extractor CT Kit DNA提取试剂盒（从哺乳动物线粒体中提取） |
25 tests | 组织型mtDNA提取用 | - |
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