抗Iba1, 重组兔源单克隆抗体（6A4）
Anti Iba1, Rabbit Monoclonal Antibody (6A4), recombinant
Iba1（Ionized calcium-binding adapter molecule 1）是分子量约为17 kDa的钙结合蛋白。由于Iba1在中枢神经系统中特异性表达1），因此被用作小胶质细胞标记物。它在静息型小胶质细胞和活化型小胶质细胞中均有表达，但有报告称在活化型小胶质细胞中其表达会有所增加2）。另外，也会在外周组织的巨噬细胞中表达，被称为AIF-1（Allograft inflammatory factor-1，同种异体移植物炎症因子1）。Iba1在细胞内与F-肌动蛋白结合，发挥着形成肌动蛋白纤维束的作用。这种肌动蛋白纤维束的形成被认为是在细胞迁移和吞噬过程中观察到的细胞膜波动结构形成所必须的3）。
抗Iba1, 重组兔源单克隆抗体(6A4)，是针对小胶质细胞标记分子Iba1的兔源单克隆抗体。可获得与小胶质细胞标记物标准抗体Iba1兔多抗（产品编号：019-19741）相同的染色图像。此外，在小鼠视网膜的免疫组织染色中也取得了良好的效果。
◆特点
● 性能与本公司的兔源多克隆抗体相同
● 低浓度（1:200-1:10,000）可染色
● *最佳浓度需探讨
● 拥有为小鼠视网膜免疫组织染色的实例
◆抗体信息
抗体种类 | 单克隆抗体 |
抗原 | Iba1合成肽（C末端序列相同） |
免疫动物 | 兔 |
缓冲液 | PBS（50%甘油），0.05%NaN3 |
浓度 | 1.0-1.2 mg/mL |
标记 | 无标记 |
交叉性 | 小鼠，大鼠 |
应用 | 免疫组织染色（冰冻切片） 1:200-10,000 |
外观 | 液体 |
◆性能数据
与本公司常规产品（兔源多克隆抗体）的比较
多克隆抗体 | 单克隆抗体 （产品编号：018-28523） | |
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| 物种：大鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释率：1:200
<数据提供> 创价大学 糖链生命系统融合研究所 中嶋老师 |
与A公司抗体（兔源单克隆抗体）比较
A公司抗体 （兔源单克隆抗体） | 单克隆抗体 （产品编号：018-28523） | |
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| 物种：小鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释率：1:1,000 |
◆应用数据
免疫组织染色（小鼠）
| 物种：小鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释率：1:1,000 |  | 物种：小鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释率：1:200 <数据提供> 山梨大学 医学部 药理学实验室 小泉老师 |
| 物种：小鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释率：1:200 备注：冰冻切片制备 → PFA 固定 <数据提供> 大阪大学 大学院医学系研究科 综合药理学 稻生老师 |
| 物种：小鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释率：1:1,000 <数据提供> 京都大学大学院 工学研究科 浜地研究室 野中老师 |
| 物种：小鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释率：1:1,000 <数据提供> 顺天堂大学 医学部 神经生物学・形态学实验室 伊藤老师 |
| 物种：小鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释率：1:1,000 <数据提供> 筑波大学 分子神经生物学 鹤田老师 上田老师 |
| 物种：小鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释率：1:1,000 <数据提供> S大学 O老师 |
| 物种：小鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释率：1:1,000 <数据提供> R研究所 Y老师 |
| 物种：小鼠(APPNL-F/NL-F) 部位：大脑 样品：固定组织切片 稀释率：1:200 备注：通过AbScale法进行透明化 <数据提供> 国立研究开发法人理化学研究所 细胞功能探索技术研究小组 滨老师 |
| 物种：小鼠(阿尔茨海默病模型) 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释率：1:500 <数据提供> 名古屋大学大学院 医学系研究科 功能组织学 小西老师 |
| 物种：小鼠(Focal Stroke模型) 部位：大脑皮层 样品：石蜡切片 稀释率：1:500 <数据提供> C大学 M老师 |
| 物种：小鼠(神经元蜡样脂褐质沉积症模型) 部位：大脑皮层 样品：石蜡切片 稀释率：1:500 <数据提供> J大学 T老师/S老师 |
| 物种：小鼠 部位：海马体 样品：冰冻切片 稀释率：1:1,000 <数据提供> A大学 F老师 |
| 物种：小鼠(APPNL-G-F) 部位：海马体 样品：冰冻切片 稀释率：1:1,000 <数据提供> 东京大学大学院 药学研究科 机能病态学教室 高虎老师 |
| 物种：小鼠 部位：脑干（三叉神经感觉主核） 样品：薄片切片 稀释率：1:500 备注：通过Scale法进行透明化 <数据提供> 东京女子医科大学 医学部 生理学系 植田老师 |
| 物种：小鼠 部位：视网膜（术后） 样品：冰冻切片 稀释率：1:500 <数据提供> 爱知医科大学 生理学系 林老师 |
| 物种：小鼠 部位：视网膜(Flat-mount) 样品：冰冻切片 稀释率：1:2,000 <数据提供> 东京大学 医学部附属医院 渡边老师 岩川老师 |
| 物种：小鼠 部位：视网膜(Flat-mount) 稀释率：1:1,000 <数据提供> 东京大学 医学部附属医院 渡边老师 岩川老师 |
正常
| 激活诱导 | 物种：小鼠 部位：视网膜(Cross-section) 样品：冰冻切片 稀释率：1:2,000 <数据提供> 东京大学 医学部附属医院 渡边老师 岩川 老师 | |
| 物种：小鼠 部位：脊髓 样品：冰冻切片 稀释率：1:2,000 <数据提供> 东京理科大学 生命生物科学科 萩原老师 泽田老师 |
| 物种：小鼠 部位：腰脊髓 样品：冰冻切片 稀释率：1:2,000 <数据提供> 九州大学 神经内科 高濑先生 |
| 物种：小鼠 部位：肺 样品：石蜡切片 稀释率：1:1,000 <数据提供> N大学 K老师 |
大鼠
| 物种：大鼠 部位：大脑皮层 样品：冰冻切片 稀释率：1:1,000 |
| 物种：大鼠 部位：大脑皮层（内侧前额叶皮层） 样品：冰冻切片 稀释率：1:1,000 <数据提供> 香川大学 医学部 形态・机能医学系 神经机能形态学 太田老师 |
免疫细胞染色
| 细胞种类：SIM-A9 稀释率：1:200 <数据提供> T大学 I老师 |
流式细胞术
使用BD Cytofix/Cytoperm™ Fixation/Permeabilization Kit (BD Biosciences, 554714) 固定和透化处理小胶质细胞系 BV-2 细胞。然后添加Buffer或Isotype control或本抗体，再添加PE标记二抗（SouthernBiotech，4030-09），最后使用流式细胞术检测荧光标记的细胞。
【结果】
使用抗Iba1抗体和流式细胞术可以检测固定和透化处理的BV-2 细胞。
◆用户使用反馈
FUJIFILM Wako收集了在2023年3-5月举办的“抗 Iba1 兔单克隆抗体样品派发活动”中研究人员对样品的使用评价。以下公布研究人员的问卷调查结果。
评估问卷 答复者：33 人（截止2023 年 7 月 21 日）
Q．对该抗体的满意度
| Q．今后愿意继续使用本产品吗？ | Q．和目前正在使用的抗Iba1抗体相比如何？ |
 |  |
用户反馈（原文翻译） 同意公布其反馈意见的所有人员名单如下
综合评价 | 所属单位 | 姓名 | 反馈意见 |
满意 | 大阪大学 大学院医学系研究科 综合药理学 | 稻生大辅老师 | 目前，由于实验原因，染色的条件为 "制备未固定冰冻切片 → PFA 固定 "（部分神经科学领域使用的抗体通过上述的Protocol可获得良好的染色效果，因此最近常用于超分辨率成像）。根据该Protocol进行染色时，使用之前常用的多克隆抗体染色的效果不佳，但6A4却能很好地染色。所以，我认为6A4是非常有用的抗体。 |
满意 | 京都大学大学院 工学研究科 浜地研究室 | 野中洋 老师 | 染色结果与常规的多克隆抗体（FUJIFILM Wako）相比毫不逊色。 |
满意 | 近畿大学 理工学部 发生生物学研究室 | 駒田致和 老师 | 染色效果很好，但是现有产品及其他公司产品的染色效果也很好，因此无法看出它们间的区别。 |
满意 | 东京女子医科大学 医学部 生理学讲座 | 植田桢史 老师 | 本次大脑切片染色时配合使用Scale法进行组织透明化，与其他用于免疫染色的抗体相比，显示出更好的组织渗透性。对比迄今为止使用的兔和山羊多克隆抗体（FUJIFILM Wako）也毫不逊色。 |
满意 | 长崎大学 药学部 基因组学与制药学 | 城谷圭朗 老师 | 非常好，小胶质细胞的形态清晰可见 |
满意 | 兵库医科大学 脑神经外科 | 武田由纪 老师 | 与其他产品相比无差别 |
满意 | 理化学研究所 细胞机能探索技术研究小组 | 滨裕老师 | 从稳定供应的角度出发，兔源单克隆纳入产品阵容是可以理解的，但是考虑到多重染色变化的灵活性，我希望能看到更丰富的小鼠单克隆产品阵容。 |
满意 | A大学 | F老师 | 使用成年小鼠大脑的冷冻切片进行荧光免疫染色时，背景低，小胶质细胞延伸出的细小突起也清晰可见，染色效果好。 |
满意 | C大学 | M老师 | 染色效果清晰。 |
满意 | J大学 | T老师和S老师 | 与传统的兔源多克隆 Iba1 抗体（可能是常见批次）相比，信号大致相同，但没有那么强烈。 |
满意 | K大学 | O老师 | 目前，我们正在使用兔源多克隆抗体(019-19741)评估大鼠的大脑皮层小胶质细胞的突起长度和分支数，已确认染色效果基本相同。考虑到各批次数据的稳定性，单克隆抗体更具优势，因此我认为这次替换十分有意义。 |
满意 | N大学 | K老师 | 由于获得了非常有趣的数据，目前正在进行更多的实验。 |
满意 | T大学 | H老师 | 染色结果与多克隆抗体一致真是太好了。 |
满意 | T大学 | I老师 | 使用小鼠小胶质细胞 SIM-A9 进行了免疫染色。 由于我们还没有进行详细的研究，所以我们不能透露关于细胞固定方法等的任何信息，但能够获得良好的阳性图像。 |
一般满意 | 爱知医科大学 生理学系 | 林寿来 老师 | 在激光手术后的小鼠眼部切片中观察到了小胶质细胞染色。 |
一般满意 | 顺天堂大学 医学部 神经生物学/形态学实验室 | 伊藤祥吾 老师 | 使用该抗体能顺利染色小胶质细胞，但我认为贵公司的兔源多克隆抗体（019-19741）能更好地检测小胶质细胞的突起。 |
一般满意 | 东京大学大学院 药学系研究科 机能病态学教室 | 高岛翔 老师 | 已确认其性能与常规的多克隆抗体相当。 |
一般满意 | 名古屋大学大学院 医学系研究科 机能组织学 | 小西博之 老师 | 能染色，但信号强度不如 FUJIFILM Wako多克隆抗体。 |
一般满意 | 山梨大学 医学部 药理学系 | 小泉修一 老师 | 能获得清晰的染色图，但感觉需要比多克隆抗体更高的浓度。免疫染色图像不逊色于之前的多克隆抗体。 |
一般满意 | H大学 | M老师 | 巨噬细胞标志物的整体染色效果并不理想，也无法判断该抗体是特异性还是非特异性，还需要进一步探讨。 |
一般满意 | K大学 | N老师 | 可以获得不逊色于之前一直使用的多克隆抗体的染色图像，我很满意。 |
一般满意 | K大学 | T老师 | 使用该抗体对小鼠腰脊髓的冰冻切片进行了免疫荧光染色。抗体结合性很强。 |
一般满意 | R研究所 | Y老师 | 它显示出与之前使用过的FUJIFILM Wako#019-19741相同的反应性，能够满足于组织染色。 |
一般满意 | S大学 | O老师 | 与之前一直使用的多克隆兔源Iba1相比，感觉多克隆更强些，但使用没有问题。 |
一般满意 | T大学 | M老师 | 目前还尚未发现与多克隆抗体的差异。 |
一般满意 | W大学 | O老师 | 阳性率与兔源多克隆抗体Iba1相同。兔源多克隆的信号更强。 |
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参考文献
1. | Imai, Y., Ibata, I., Ito, D., Ohsawa, K., & Kohsaka, S.: Biochem. Biophys. Res. Commun., 224(3), 855(1996). |
2. | Mori, I., Imai, Y., Kohsaka, S., & Kimura, Y.: Microbiol. Immunol., 44(8), 729(2000). |
3. | Sasaki, Y., Ohsawa, K., Kanazawa, H., Kohsaka, S., & Imai, Y. Biochem. Biophys. Res. Commun., 286(2), 292(2001). |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 012-28521 | Anti Iba1, Rabbit Monoclonal Antibody (6A4), recombinant 抗Iba1，重组兔源单克隆抗体（6A4） |
20 μL | 免疫化学用 | - |
| 018-28523 | Anti Iba1, Rabbit Monoclonal Antibody (6A4), recombinant 抗Iba1，重组兔源单克隆抗体（6A4） |
100 μL | 免疫化学用 | - |
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