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(R)-BiAC法（手性氨基酸LC/MS分析）
D/L-氨基酸（手性氨基酸）LC/MS 分析用衍生试剂

产品特性
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Q&A
参考文献

(R)-BiAC法（手性氨基酸LC/MS分析）

D/L-氨基酸（手性氨基酸）LC/MS 分析用衍生试剂

氨基酸是广泛存在于生物体内和自然界中的化合物。它存在着两种对映异构体，即L-氨基酸和D-氨基酸，主要以L-氨基酸的形式存在。近年研究表明，微量存在的D-氨基酸与记忆、学习能力等方面有关^1），因此D-氨基酸与L-氨基酸的分离分析变得越发重要。

（R）-BiAC是一种衍生化试剂，可用于柱前衍生化法对D/L-氨基酸（手性氨基酸）进行LC/MS分析。使用(R)-BiAC试剂时无需专用设备即可进行用时短（19 min）、分辨率高的手性氨基酸分析。

1）Hashimoto, A., Oka, T.: Prog. Neurobiol., 52, 325 (1997).

◆特点

无需专用设备，即可使用LC/MS检测手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）！

使用（R）-BiAC进行柱前衍生化，无需专用设备，使用LC/MS即可检测手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）。

约19 min即可实现20种D/L氨基酸的同时分析！

可短时间内同时分析多种手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）。

可实现手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）的高灵敏度检测！

可提高MS的电离效率，还能以atto mol水平的灵敏度检测手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）。

可提供衍生化专用试剂套装！

使用已制备的(R)-BiAC 衍生试剂套装即可更轻松地进行衍生化操作。

◆使用(R)-BiAC 衍生试剂套装的衍生化步骤

(R)-BiAC 衍生试剂套装组成

产品编号	产品名称	产品规格	数量
293-86011	(R)-BiAC用缓冲液	3 mL	1
290-86021	反应终止剂	10 mL	1

除（R)-BiAC 衍生试剂套装外所需试剂

产品编号	产品名称	产品规格
012-19851	乙腈	LC/MS用
025-19761	(R)-BiAC	氨基酸分析用
235-64051	Wakopak^®Ultra APDS TAG^® φ2.1 mm × 100 mm (D)	-

试剂的制备方法

1、R)-BiAC试剂溶液

使用1-2 mL乙腈冲洗1整瓶（5 mg）(R)-BiAC，转移到其他容器后，加入乙腈使总体积达到5 mL，混合并充分溶解^※

※ 将已制备的溶液按需分装后冷冻保存。需尽快使用（-20°C 下可存储约1周），并避免反复冻融。

图片2.png

2、(R)-BiAC用缓冲溶液—乙腈溶液

向(R)-BiAC用缓冲溶液的容器中添加3 mL的乙腈溶液

图片3.png

衍生化

◆人尿液中手性氨基酸的分析示例^※

前处理条件

1、20 µL样品/标准溶液 + 20 µL内标溶液 + 40 µL乙腈

2、搅拌

3、离心（20,000 x g，10 min）

↓

收集上清液 20 µL

↓

衍生化

13种手性氨基酸的分析示例（色谱柱：Wakopak^® Ultra APDS TAG^®）

LC/MS/MS 色谱图（标准溶液（D-氨基酸：5 μM L-氨基酸: 50 μM））

图片4.png

LC/MS/MS 色谱图（人尿液样品）

图片5.png

成分名	检测离子 (m/z)		成分名	检测离子 (m/z)		成分名	检测离子(m/z)
成分名	母离子	子离子	成分名	母离子	子离子	成分名	母离子	子离子
D-Asn	427	295.1	L-Glu	443	295.1	L-Met	445	295.1
L-Asn	428	295.1	D-allo-Thr	414	295.1	D-allo-Ile	426	295.1
D-Gln	441	295.1	L-Thr	415	295.1	L-Ile	427	295.1
L-Gln	442	295.1	D-Ala	384.1	295.1	D-Leu	426	295.1
D-Ser	400	295.1	L-Ala	385.1	295.1	L-Leu	427	295.1
L-Ser	401	295.1	D-Tyr	476	295.1	D-Phe	460.1	295.1
Gly	371	295.1	L-Tyr	477	295.1	L-Phe	461.1	295.1
D-Asp	428.2	295.1	D-Val	412	295.1	D-Trp	499	295.1
L-Asp	429.2	295.1	L-Val	413	295.1	L-Trp	500	295.1
D-Glu	442	295.1	D-Met	444	295.1

【设备】

Shimadzu Nexera X2 HPLC System / Sciex Triple QuadTM 6500

【HPLC】

色谱柱：Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1 mm × 100 mm (D)

柱温：40℃

流动相：A) 0.1% HCOOH in 10 mM HCOONH₃ aq., B) 95% CH₃CN in H₂O

梯度：

Time (min.)	B conc. (%)
0-3	14-16
3-14.3	16-33
14.3-17	33-45
17-17.1	45-90
17.1-18	90
18-18.1	90-14
18.1-20	14

【MS】

电离：ESI

模式：SRM

◆乳酸饮料中手性氨基酸的分析示例^※

前处理条件

1、20 µL样品/标准溶液 + 20 µL内标溶液 + 40 µL乙腈

2、搅拌

3、离心（20,000 x g，10 min）

↓

收集上清液 20 µL

↓

衍生化

13种手性氨基酸的分析示例（色谱柱：Wakopak^® Ultra APDS TAG^®）

LC/MS/MS 色谱图（标准溶液（D-氨基酸：5 μM L-氨基酸: 50 μM））

图片6.png

LC/MS/MS 色谱图（乳酸菌饮料样品）

图片7.png

成分名	检测离子 (m/z)		成分名	检测离子 (m/z)		成分名	检测离子(m/z)
成分名	母离子	子离子	成分名	母离子	子离子	成分名	母离子	子离子
D-Asn	427	295.1	L-Glu	443	295.1	L-Met	445	295.1
L-Asn	428	295.1	D-allo-Thr	414	295.1	D-allo-Ile	426	295.1
D-Gln	441	295.1	L-Thr	415	295.1	L-Ile	427	295.1
L-Gln	442	295.1	D-Ala	384.1	295.1	D-Leu	426	295.1
D-Ser	400	295.1	L-Ala	385.1	295.1	L-Leu	427	295.1
L-Ser	401	295.1	D-Tyr	476	295.1	D-Phe	460.1	295.1
Gly	371	295.1	L-Tyr	477	295.1	L-Phe	461.1	295.1
D-Asp	428.2	295.1	D-Val	412	295.1	D-Trp	499	295.1
L-Asp	429.2	295.1	L-Val	413	295.1	L-Trp	500	295.1
D-Glu	442	295.1	D-Met	444	295.1

【设备】

Shimadzu Nexera X2 HPLC System / Sciex Triple QuadTM 6500

【HPLC】

色谱柱：Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1 mm × 100 mm (D)

柱温：40℃

流动相：A）0.1% HCOOH in 10 mM HCOONH₃ aq.，B） 95% CH₃CN in H₂O

梯度：

Time (min.)	B conc. (%)
0-3	14-16
3-14.3	16-33
14.3-17	33-45
17-17.1	45-90
17.1-18	90
18-18.1	90-14
18.1-20	14

【MS】

电离：ESI

模式：SRM

※ 本数据为分析示例，离子源参数和其他参数可能因所用设备而异。

参考文献

1）Harada, M. and Karakawa, S. et al.: J. Chromatogr. A, 1593, 91 (2019).

2）Harada, M. and Karakawa, S. et. al.: Wako Junyaku Jiho, 87 (1), 5 (2019).

3）Harada, M. and Karakawa, S. et. al.: Symmetry, 12, 913 (2020).

产品列表

衍生化试剂

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
025-19761	(R)-BiAC	5 mg	氨基酸分析用	-
296-86001	(R)-BiAC衍生化试剂套装	1 kit	氨基酸分析用	-
012-19851	Acetonitrile 乙腈	1 L	LC/MS用	-
018-19853	Acetonitrile 乙腈	3 L	LC/MS用	-

HPLC色谱柱

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
235-64051	Wakopak(R) Ultra APDS TAG(R) φ2.1mm × 100mm (D)	1 EA	-	-

标准溶液

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
015-27891	Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN[CRM] 氨基酸混合标准溶液, AN型 [CRM]	1 mL×5A	氨基酸自动分析用	-
011-27871	Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B[CRM] 氨基酸混合标准溶液, B型 [CRM]	1 mL×5A	氨基酸自动分析用	-
018-27881	Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H[CRM] 氨基酸混合标准溶液, H型 [CRM]	1 mL×5A	氨基酸自动分析用	-
017-27851	APDSTAG（R） Wako Amino Acids Mixture Standard Solution No.1[CRM] APDS Tag® Wako用氨基酸混合标准溶液No.1[CRM]	2 mL×5A	氨基酸自动分析用	-
014-27861	APDSTAG（R） Wako Amino Acids Mixture Standard Solution No.2[CRM] APDS Tag® Wako用氨基酸混合标准溶液No.2[CRM]	2 mL×5A	氨基酸自动分析用	-
016-28161	Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN(High Range) 氨基酸混合标准溶液，AN型（高浓度）	1 mL×5A	氨基酸自动分析用	-
010-28164	Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN(High Range) 氨基酸混合标准溶液，AN型（高浓度）	5 mL	氨基酸自动分析用	-
012-28141	Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B(High Range) 氨基酸混合标准溶液，B型（高浓度）	1 mL×5A	氨基酸自动分析用	-
016-28144	Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B(High Range) 氨基酸混合标准溶液，B型（高浓度）	5 mL	氨基酸自动分析用	-
019-28151	Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H(High Range) 氨基酸混合标准溶液，H型（高浓度）	1 mL×5A	氨基酸自动分析用	-
013-28154	Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H(High Range) 氨基酸混合标准溶液，H型（高浓度）	5 mL	氨基酸自动分析用	-

内标混合液

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
293-73701	APDSTAG（R） Wako Amino Acids Internal Standard Mixture Solution APDS Tag® Wako用氨基酸内标混合溶液No.1[CRM]	1 set	氨基酸自动分析用	-

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