LumiMAT™ 热原检测试剂盒

LumiMAT™是基于MAT法（单核细胞活化反应测定法，Monocyte Activation Test）开发的热原（Pyrogen）检测试剂盒。

热原是导致动物体温升高的物质的总称，非口服药和直接接触血液的医疗器械不可被热原污染。家兔热原试验是早期广泛用于热原检测的实验方法，该方法通过向兔静脉中注射待测样品并观察其体温变化来判断是否存在热原。但家兔热原试验在再现性、精确度、成本等方面存在问题，因此鲎试剂作为替代法被广泛使用。然而，鲎试剂无法检测出非内毒素热原，因此必要时也会使用家兔热原试验。

MAT法是作为家兔热原试验的替代法而开发的In vitro热原检测实验，不仅可检测内毒素，还能检测非内毒素热原。

◆产品概要

本产品是用于检测非口服药品和医疗器械中混入或附着的热原的MAT法试剂，需与LumiMAT Pyrogen Detection Kit - Cells（产品编号：298-36991）配合使用，不仅可以检测内毒素，还可检测大部分非内毒素热原。

◆试剂盒组成

● 细胞用培养基：20 mL

● 稀释用培养基：100 mL

● 发光检测缓冲液：12 mL

● 发光底物：240 μL

◆检测原理

MAT法是利用人单核细胞被热原激活后产生炎症细胞因子等物质来检测热原的方法。

传统的MAT法

使用PBMC（外周血单核细胞）作为细胞来源，通过ELISA法检测单核细胞中释放的细胞因子，从而检测样品中的热原。

LumiMAT

LumiMAT™使用单核细胞系NOMO-1，其引入荧光素酶报告基因，通过表达荧光素酶蛋白以响应因暴露于热原而激活的 NF-kB信号。当热原与Toll-like Receptor（TLR）结合后，NF-κB信号会被激活，从而表达荧光素酶蛋白。当向其加入发光底物后，会发生发光反应，可通过检测发光强度检测热原。

LumiMAT™的特点

◆检测步骤

进行检测时，需要LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit – Cells（产品编号：298-36991）和LumiMAT™ Pyrogen Detection Kit – Reagent Set（产品编号：297-96801）一同使用。

向96孔板中添加待测样品或内毒素标准品，添加报告细胞后孵育3 h。然后添加发光底物，使用酶标仪检测发光强度。与传统的ELISA法检测相比，LumiMAT™在同一个平板中进行检测，可减少实验差异。此外，传统方法需要1.5 天，而LumiMAT™仅需5 h左右即可得到检测结果。

标准曲线范围

RLU：Relative Light Unit（相对光强度）

EU：Endotoxin Unit（内毒素单位）

使用内毒素标准品制作标准曲线，以Endotoxin Equivalents（EE)/mL计算热原含量。

标准曲线范围：0.0125～0.8 EE/mL

◆检测数据

再现性

使用3个批次的LumiMAT™，检测准确率和精确度（n=4，各批次分别检测3次）。添加6个浓度的内毒素标准品（USP-RSE），根据标准曲线计算浓度（EU/mL）。

已确认所有批次的准确率（检测值/标准值）都在±10%以内，精确度都在CV20%以下，具有高再现性。

对非内毒素热原（NEP，Non-Endotoxin Pyrogen）的反应性

向各Toll-like receptor (TLR)中添加不同浓度的非内毒素热原（NEP），根据标准曲线计算每种NEP的浓度（EE/mL）。纵轴：EE/mL，横轴：添加的NEP浓度

已确认不同浓度的NEP均可检测。

◆加标回收测试

1.使用市售药品进行加标回收测试

向各种药品中添加内毒素标准品，计算回收率。

*MVD : 最大有效稀释倍数（Maximum Valid Dilution）

**无干扰的标准: 50 < 回收率(%) < 200

在MVD范围的稀释倍率内，所有药品的回收率均在50~200%的范围内。

2.使用药品原料进行加标回收测试

适用于各种样品的检测。

LumiMAT™采用NanoLuc®技术。NanoLuc® 技术由Promega Corporation授权。授权专利：美国专利第8557970号、美国专利第8669103号以及与美国专利第8557970号、美国专利第8669103号享有同等优先权的所有专利及申请中的专利。NanoLuc® 为Promega Corporation的注册商标。