LabAssay™ HDL胆固醇
LabAssay™ HDL-Cholesterol
胆固醇(Cholesterol)以脂蛋白的微粒形式在体内循环。脂蛋白种类多样,其中HDL(High Density Lipoprotein)可将组织、外周细胞及血液中多余的胆固醇运送到肝脏,防止血液中的胆固醇增加,从而抑制脂质代谢异常及动脉硬化。HDL-胆固醇水平降低常见于冠心病、高脂血症、吸烟、肥胖、糖尿病和肝病患者,同时也是冠心病的主要风险因素之一。
本产品可检测血液(血清/血浆)中的HDL-胆固醇,使用微孔板可快速简便地检测样品中的HDL-胆固醇,且无需离心分离脂蛋白。
※LabAssay™ 系列产品仅供实验研究用,不能用于临床诊断。
◆试剂盒性能
物种 | 人、小鼠、大鼠 |
样品 | 血清、血浆 |
标准曲线范围 | 6.25-200 mg/dL |
所需样品量 | 5 μL |
检测时间 | 20 min |
检测法 | 显色法 (主波长 600 nm/副波长 700 nm) |
◆标准曲线示例
◆原理
第一反应阶段(清除非HDL胆固醇)
前处理液中的亲水基和疏水基可保护样品中的HDL免受胆固醇氧化酶(CO)和胆固醇酯酶(CHE)的影响。此外,HDL以外的脂蛋白,如乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)(非高密度脂蛋白胆固醇)中的胆固醇会在CO和CHE的作用下分解为脂肪酸和Δ4- 胆甾烯酮,同时生成过氧化氢。而生成的过氧化氢会在过氧化氢酶的作用下被分解为水。
第二反应阶段(HDL-胆固醇显色)
反应试剂发挥作用时,HDL中的胆固醇在CO和CHE的作用下生成过氧化氢。生成的过氧化氢在过氧化物酶(POD)的作用下会使N-(3-硫代丙基)-3-甲氧基-5-甲基苯胺(HMMPS)和4-氨基安替比林发生定量氧化缩合,生成一种蓝色色素。通过检测这种蓝色的吸光度,可确定样品中的HDL-胆固醇浓度。
◆数据
精确度测试(批内差异)
使用本产品分别对人、小鼠、大鼠的2种浓度血清样品进行5次重复检测,确认精确度。
n\ID | 人 | 小鼠 | 大鼠 | |||
ID1 (mg/dL) | ID2 (mg/dL) | ID1 (mg/dL) | ID2 (mg/dL) | ID1 (mg/dL) | ID2 (mg/dL) | |
1 | 82.3 | 33.3 | 72 | 21.2 | 55 | 21.4 |
2 | 82.5 | 32.2 | 73.2 | 20.7 | 53.5 | 21.5 |
3 | 82.2 | 32.9 | 72.1 | 21.2 | 54 | 21.1 |
4 | 81.9 | 33.4 | 71.4 | 22.1 | 54.3 | 22.8 |
5 | 82.2 | 32.9 | 72.8 | 21.3 | 55.8 | 22.1 |
平均值 | 82.2 | 32.9 | 72.3 | 21.3 | 54.5 | 21.8 |
SD | 0.22 | 0.47 | 0.71 | 0.5 | 0.9 | 0.68 |
CV(%) | 0.26 | 1.4 | 0.98 | 2.4 | 1.7 | 3.1 |
【结果】
人血清的CV(%)为 0.26-1.4%,小鼠血清的CV(%)为 0.98-2.4%,大鼠血清的CV(%)为 1.7-3.1%,结果良好。
再现性测试(批间差异)
使用本产品在4天内分别对3种不同浓度的人、小鼠、大鼠血清样品进行3次重复检测。
Day\ID | 人 | 小鼠 | 大鼠 | ||||||
ID1 (mg/dL) | ID2 (mg/dL) | ID3 (mg/dL) | ID1 (mg/dL) | ID2 (mg/dL) | ID3 (mg/dL) | ID1 (mg/dL) | ID2 (mg/dL) | ID3 (mg/dL) | |
1 | 79.2 | 47 | 25.2 | 77.7 | 44.6 | 26.3 | 56 | 39.7 | 19 |
2 | 77.6 | 45.4 | 23.6 | 74.2 | 42.2 | 25.2 | 58.4 | 39.6 | 18.2 |
3 | 80.5 | 48.8 | 24.8 | 79.9 | 45.2 | 26.8 | 60.5 | 41.5 | 19 |
4 | 79.2 | 46.9 | 25.1 | 80.5 | 44.4 | 26.5 | 59.1 | 40.5 | 18.8 |
平均值 | 79.1 | 47 | 24.7 | 78.1 | 44.1 | 26.2 | 58.5 | 40.3 | 18.8 |
SD | 1.2 | 1.4 | 0.74 | 2.9 | 1.3 | 0.7 | 1.9 | 0.88 | 0.38 |
CV(%) | 1.5 | 3 | 3 | 3.7 | 3 | 2.7 | 3.2 | 2.2 | 2 |
【结果】
人血清样品的CV(%)为 1.5-3.0%、小鼠血清样品的 CV(%)为 2.7-3.7%,大鼠血清样品的 CV(%)为 2.0-3.2%,所有结果均良好。
稀释线性试验
使用产品附带的标准品稀释液,按倍数稀释2种浓度的人血清/血浆(EDTA)、小鼠血清/血浆(EDTA)和大鼠血清/血浆(EDTA)后,进行检测并确认线性关系(平行检测两次)。
【结果】
检测范围内均显示出良好的线性关系。
加标回收测试
向人血清/血浆(EDTA)、小鼠血清/血浆(EDTA)和大鼠血清/血浆(EDTA)中添加3种浓度的标准品,进行加标回收测试(平行检测两次)。
人
添加量(mg/dL) | 实测值(mg/dL) | 回收量(mg/dL) | 回收率(%) | |
血清 | - | 39.5 | - | - |
11.3 | 50.3 | 10.8 | 95.6 | |
22.5 | 61.8 | 22.3 | 99.1 | |
28.2 | 67.1 | 27.6 | 97.9 | |
血浆 (EDTA) | - | 36 | - | - |
7.72 | 43.8 | 7.8 | 101 | |
15.4 | 50.4 | 14.4 | 93.5 | |
19.3 | 54.3 | 18.3 | 94.8 |
小鼠
添加量(mg/dL) | 实测值(mg/dL) | 回收量(mg/dL) | 回收率(%) | |
血清 | - | 11.7 | - | - |
11.8 | 22.5 | 10.8 | 91.5 | |
35.4 | 47 | 35.3 | 99.7 | |
59.1 | 67.4 | 55.7 | 94.2 | |
血浆 (EDTA) | - | 10.5 | - | - |
9.34 | 19.2 | 8.7 | 93.1 | |
28 | 36.6 | 26.1 | 93.2 | |
46.7 | 54.9 | 44.4 | 95.1 |
大鼠
添加量(mg/dL) | 实测值(mg/dL) | 回收量(mg/dL) | 回收率(%) | |
血清 | - | 15.6 | - | - |
15.6 | 30 | 14.4 | 92.3 | |
31.2 | 45 | 29.4 | 94.2 | |
39.1 | 51.4 | 35.8 | 91.6 | |
血浆 (EDTA) | - | 13 | - | - |
13.2 | 25.3 | 12.3 | 93.2 | |
19.9 | 32.8 | 19.8 | 99.5 | |
33.1 | 44 | 31 | 93.7 |
【结果】
均得到良好的回收率。
实际样品的检测
使用本产品检测人血清/血浆、小鼠(ICR)血清/血浆样品和大鼠(SD)血清/血浆。
人
样品No. | 检测值 (mg/dL) | 平均值 (mg/dL) | SD | CV(%) | ||
血清 | 1 | 58.2 | 57.9 | 58.1 | 0.2 | 0.37 |
2 | 44.1 | 45.2 | 44.7 | 0.8 | 1.7 | |
3 | 45.7 | 45.7 | 45.7 | 0 | 0 | |
4 | 35.3 | 34.3 | 34.8 | 0.7 | 2 | |
5 | 34.9 | 34.3 | 34.6 | 0.4 | 1.2 | |
血浆 | 1 | 104 | 105 | 105 | 0.71 | 0.68 |
2 | 44.7 | 45.5 | 45.1 | 0.57 | 1.3 | |
3 | 46.2 | 46.4 | 46.3 | 0.14 | 0.31 | |
4 | 34.5 | 35.3 | 34.9 | 0.57 | 1.6 | |
5 | 33.4 | 33.9 | 33.7 | 0.35 | 1.1 |
小鼠
样品No. | 检测值 (mg/dL) | 平均值 (mg/dL) | SD | CV(%) | ||
血清 | 1 | 74.1 | 76.2 | 75.2 | 1.5 | 2 |
2 | 71.9 | 71.7 | 71.8 | 0.14 | 0.2 | |
3 | 77.2 | 80.3 | 78.7 | 2.2 | 2.8 | |
4 | 86.5 | 87.7 | 87.1 | 0.85 | 0.97 | |
5 | 68.2 | 69.3 | 68.7 | 0.78 | 1.1 | |
血浆 | 1 | 40.6 | 40.3 | 40.5 | 0.21 | 0.52 |
2 | 25.5 | 26 | 25.8 | 0.35 | 1.4 | |
3 | 50.1 | 48.6 | 49.4 | 1.1 | 2.1 | |
4 | 27.2 | 28.9 | 28.1 | 1.2 | 4.3 | |
5 | 24.2 | 25.7 | 25 | 1.1 | 4.3 |
大鼠
样品No. | 检测值 (mg/dL) | 平均值 (mg/dL) | SD | CV(%) | ||
血清 | 1 | 22.5 | 20.5 | 21.5 | 1.4 | 6.6 |
2 | 31.8 | 30.7 | 31.3 | 0.78 | 2.5 | |
3 | 32.7 | 33.2 | 33 | 0.35 | 1.1 | |
4 | 22.4 | 22.5 | 22.5 | 0.071 | 0.31 | |
5 | 25.5 | 25.8 | 25.7 | 0.21 | 0.83 | |
血浆 | 1 | 13.2 | 13.3 | 13.3 | 0.071 | 0.53 |
2 | 13.3 | 13.1 | 13.2 | 0.14 | 1.1 | |
3 | 13.1 | 11.4 | 12.3 | 1.2 | 9.8 | |
4 | 13.6 | 13.6 | 13.6 | 0 | 0 | |
5 | 15.4 | 16.4 | 15.9 | 0.71 | 4.4 |
关于样品
Q1 使用哪种样品比较合适?
A1 请尽量使用新鲜的血清/血浆样品,避免使用反复冻融的样品,否则可能会导致脂蛋白变性。
Q2 使用哪种血浆抗凝剂比较合适?
A2 可使用肝素、柠檬酸盐或EDTA,它们在正常的使用量下几乎不会影响检测值。
Q3 如何检测超过检测范围上限的样品?
A3 对于超过检测范围上限的样品,请使用生理盐水稀释后再进行检测。将得到的值乘以稀释倍数即可得出检测值。
Q4 如何检测甘油三酯水平较高(1000mg/dL)的血清样品?
A4 对于甘油三酯水平超过1000mg/dL的血清样品,请使用生理盐水稀释后再进行检测。将得到的值乘以稀释倍数即可得出检测值。
关于试剂盒使用
Q1 使用本试剂盒检测时需要什么器具和装置?
A1 使用本产品时所需的器具和装置如下。
● 微孔板(透明,96 孔)
● 微量移液器
● 恒温水浴锅(37°C)
● 微孔板摇床(混匀仪)
● 酶标仪(600 nm/700 nm滤光片)
Q2 标准品中应添加多少纯净水?
A2 标准品中添加的纯净水量因批次不同而有所差异,具体请参考试剂盒附带的说明书中的指定量。
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
299-96501 | LabAssay™ HDL胆固醇 LabAssay™ HDL-Cholesterol |
100 tests | 细胞生物学用 | - |
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
635-50981 | LabAssay (TM) Cholesterol LabAssay™ 胆固醇 |
500 tests | - | - |
291-96701 | LabAssay™ LDL-Cholesterol LabAssay™ LDL胆固醇 |
100 tests | 细胞生物学用 | - |
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