体外转录反应RNA合成试剂盒

NIPPON Gene CUGA^® 体外转录试剂盒

CUGA^® 体外转录试剂盒是一款使用CUGA^® RNA聚合酶进行体外转录反应的RNA合成试剂盒。由于该试剂盒采用的CUGA^®3/CUGA^®7以及CUGA^®6 RNA聚合酶相较于野生型T3/T7以及野生型SP6 RNA聚合酶具有更高的转录效率，所以适用于需大量合成RNA的核糖探针制备，以及需要精准控制链长的RNA结构分析等实验。

※CUGA^®是NIPPON GENE 公司在日本的注册商标。

◆特点

● 可实现RNA的大量合成

可不依赖模板DNA的类型（如质粒DNA、PCR产物、化学合成寡核苷酸等）及链长，实现大量RNA合成，产量较现有试剂盒提升约2~5倍以上）。使用高浓度CUGA^® 聚合酶及核糖核苷酸，尤其适用于短链RNA（1,000 碱基以下）的制备。

● 可实现准确且稳定的转录反应

利用CUGA^® 聚合酶的特性，可克服使用野生型聚合酶的的现有试剂盒的缺陷，显著提升体外转录效率。此外，由于保留了野生型聚合酶对启动子序列强大的识别能力，因此可直接沿用传统的启动子序列。

● 可实现低成本制备目标RNA

使用CUGA^® 聚合酶可准确且大规模合成目标RNA，大幅改善在体外转录反应制备RNA的成本效益。

● 适用于多研究领域

使用CUGA^® 3/ CUGA^® 6/ CUGA^® 7体外转录试剂盒制备的RNA可直接应用于以下利用体外转录反应的实验体系中。此外，由于四种核糖核苷酸是独立分装，因此可通过修饰核苷酸或加帽类似物等，构建更多样化的实验体系。

■ 应用案例

· 无细胞蛋白质合成系统的导入

· 制备高灵敏度微阵列探针

· 制备多种杂交探针

· RNA结构分析

· 制备功能性RNA（适配体/核酶/反义链/siRNA/miRNA等）

· 微量mRNA扩增

· SELEX法

◆CUGA^®7 RNA聚合酶与野生型RNA聚合酶的对比

正常转录

与野生型聚合酶相比，CUGA^®7 RNA聚合酶生成的异常转录产物更少

荧光标记

在制备Cy3标记的核糖核酸探针时，比较野生型和CUGA^®7 两种聚合酶的转录产物的荧光信号强度，发现CUGA®7介导的Cy3-UTP掺入效果优于野生型。

CUGA^® 在双链RNA合成中的应用

利用可实现高精度转录的CUGA^® 聚合酶合成双链RNA。

当分别在单独试管进行聚合酶反应后再将合成产物退火时，使用CUGA^® 聚合酶可比野生型合成更多的双链RNA（泳道1）。而在同一试管进行聚合酶反应（同步合成并退火）时，其双链RNA合成量与野生型相当（泳道2）。