NUGC-4（人胃癌细胞系）
源自一位35岁日本女性胃印戒细胞癌（低分化）的人胃癌细胞系，广泛用于胃癌（尤其印戒细胞癌）的基础研究与药物筛选等。
◆细胞基本信息
JCRB编号 | JCRB0834 | 细胞名称 | NUGC-4 |
简介 | 腺癌，低分化，印戒细胞癌 | 别名 | —— |
来源物种 | 人 | 品系 | —— |
属 | Homo（人属） | 种 | Sapiens（人类） |
性别 | 女 | 年龄 | 35 |
细胞识别信息 | 可查询 | 原发癌组织 | 胃 |
病史 | 低分化，腺癌 | 转移 | 是 |
转移组织 | 淋巴结 | 遗传学特征 | —— |
细胞寿命 | 永生化 | 危机期PDL | —— |
形态 | 球状 | 特征 | 印戒细胞癌 |
分类 | 肿瘤 | 建立者 | Akiyama, S. |
注册者 | Akiyama, M. | 分销限制 | —— |
备注 | —— | 年份 | 1993 |
培养基 | RPMI1640培养基，含10%FCS | 传代方法 | 简单稀释 |
传代密度 | 2.0x105 cells/mL | 种族 | —— |
二氧化碳浓度 | 5% | 取样组织 | 胃部淋巴结 |
组织类型 | —— | ||
◆产品特性
● 低分化印戒细胞癌
● 适用于胃癌转移机制研究，药物测试、以及肿瘤微环境互作研究的场景。
● 细胞来源：35岁，女，细胞系建立于1993年
◆其他胃癌细胞系
NUGC细胞系系列
NUGC-2 (JCRB0821) | 细胞来源：56岁，女性，腺癌，分化不良 |
NUGC-4 (JCRB0834) | 细胞来源：35岁，女性，腺癌，低分化，印戒细胞癌 |
MKN细胞系系列
MKN1 (JCRB0252) | 细胞来源：72岁，男性，腺鳞癌，MC-210清除支原体细胞 |
MKN7 (JCRB1025) | 细胞来源：39岁，男性，分化良好的管状腺癌 |
MKN45 (JCRB0254) | 细胞来源：62岁，女性，低分化腺癌 |
FU97 (JCRB1074) | 细胞来源：66岁，女性，癌症细胞系，观察到淋巴结转移和胰腺转移 |
相关资料
● 培养基使用建议
培养基使用建议
请参考细胞系数据页或产品特性页细胞基本信息表格中的培养基。
【选择要点】
通常，每款经典培养基都只有一个标准配方，但厂家也会提供许多改良产品，例如不含L-谷氨酰胺、含HEPES等配方。
L-谷氨酰胺
L-谷氨酰胺是所有哺乳动物细胞培养的必需氨基酸之一，所有培养基最后都应含有L-谷氨酰胺。然而，部分市售培养基并不含该成分，因为其在水溶液中稳定性较差，不适合在液体培养基中长期储存。如果您的培养基中不含该氨基酸，需另行添加。部分培养基含有其稳定替代物，L-丙氨酰-L-谷氨酰胺（例如GlutaMAX™、glutagro™）。
HEPES
通常而言，HEPES并非MEM、DMEM，RPMI 1640和Ham's F-12等经典培养基的标准成分。HEPES有时被用于强效pH缓冲，但并非必需成分。
酚红
酚红是pH指示剂，通常包含在培养基中。
Eagle最低必需培养基（MEM）
- Earle's盐和Hank's盐：
如需在CO₂培养箱中培养，请选择Earle's盐配方。
-非必需氨基酸(NEAA)，丙酮酸钠：
NEAA和丙酮酸钠不是MEM的标准成分。
杜氏改良Eagle's培养基（D-MEM）
-低糖型与高糖型，丙酮酸钠：
标准配方为低糖型（1 g/L），高糖型（4.5 g/L）为改良版。除特别说明外，JCRB通常使用低糖型配方。丙酮酸钠是DMEM的标准成分之一。
抗生素
细胞培养中可使用抗生素，例如100 units/mL青霉素+100 ug/mL链霉素。不建议添加Fungizone（两性霉素B），它会抑制某些细胞类型的生长。
FBS（胎牛血清）和FCS（胎牛血清）
FBS和FCS是同一物质。
相关培养基产品
JCRB细胞库基本上使用标准配方的培养基。下表列举了采用标准配方的液体培养基产品。
培养基 | 概况 | FUJIFILM Wako |
MEM | Eagle最低必需培养基，EMEM，E-MEM | |
MEM含NEAA | Eagle最低必需培养基，含非必需氨基酸 | |
MEM alpha | alpha MEM，αMEM，MEM培养基的alpha改良型 | |
DMEM (低糖型) [标准DMEM] | 杜氏改良Eagle培养基，D-MEM，DME | |
DMEM (高糖改良型) | 含4.5g/L葡萄糖的DMEM培养基 | |
RPMI 1640 | ||
F-12 | Ham 's F-12, Ham 's营养混合物F-12 | |
F-12K | Ham's F-12K，F-12培养基的Kaighn改良型 | |
DME/F-12，DMEM与Ham's F-12的1:1混合物 | ||
L-15 | Leibovitz's L-15培养基 | |
MEM用100X L-谷氨酰胺溶液(200 mM) | 培养基添加剂 | |
MEM用100X 非必需氨基酸溶液(10 mM) | 培养基添加剂 |
细胞系首次培养指南
收到细胞后
细胞系到货后，请迅速将细胞从包装中转移至存储场所或进行培养。
冷冻细胞在-65℃以上会快速受损。
运输冻存管时，应使用干冰或少量液氮进行冷却。切勿使用冰（0℃）冷却冻存管，因为这样反而会升高其温度，导致细胞存活率降低。
首次培养指南
培养基和设备
○ 为避免过度稀释，请使用25 cm2 的培养瓶或6 cm的培养皿（或数据表中指定的更小的容器尺寸）
○ 根据产品详情页中的细胞基本信息准备合适的培养基。
如有疑问，请在培养前（详情可查看Q&A）咨询富士胶片和光客服或经销商。 |
应快速复苏细胞
【请逐支操作，切勿同时解冻两支或以上的安瓿瓶。】 1. 从包装中取出一支安瓿瓶。（请佩戴安全手套与防护面罩） 2. 立即将安瓿瓶放入温水中（＜ 37℃），摇晃并在2 分钟内解冻内容物。 |  |
接种至 25 cm² 培养瓶或 6 cm 培养皿
【无菌环境下操作】 3. 在离心管中准备10 mL指定培养基。 4. 用70%乙醇或阳离子消毒剂浸湿灭菌纱布，擦拭消毒安瓿瓶。 5. 用无菌纱布包裹安瓿瓶，小心掰断其颈部。 6. 将细胞悬液转移至离心管中。 7. 将混合液以1000 rpm离心5分钟，去除上清液。 8. 无需清洗，将细胞重悬于5 mL的相同培养基。 |
|
如果数据表中特别推荐了培养基的用量，请按照说明进行操作。
9. 在25 cm²培养瓶或6 cm培养皿中组织培养。
随附数据表中的细胞密度为对数生长期的标准密度，并非复苏时的实际密度。
10. 进行传代前，请确认细胞已恢复增殖。可能需要数天乃至一周的时间才能增殖。待细胞生长良好后，尽早制备冻存株。
Q&A
◆操作方法
Q. 收到细胞后，首先应该做什么？
A. 确认安瓿瓶是否破损，然后在液氮罐等容器中储存。
尽管细胞在运输中已格外注意，但运输过程中仍可能发生破损。请检查以下几点：
1. 运输容器是否破损？
2. 干冰是否维持了足够低温的环境？
3. 装有细胞的容器是否破损？
4. 收到的细胞是否与订单内容一致？
若不立即培养，请将细胞在液氮罐等容器中储存。
Q. 如何开启玻璃安瓿瓶？
A. 细胞储存于安瓿瓶中，请注意并按照以下方法开启。
注意1
本细胞库使用玻璃安瓿瓶储存细胞。因此从液氮罐中取出时可能会发生爆炸，请万分小心！！！从液氮（液相）中取出时必须穿长袖实验服，戴厚手套，着防护面罩，不要暴露手臂和脸等皮肤部位。
注意2
因使用硬质玻璃，需大力开封，易导致手指割伤，请小心。
· 开启方法(需准备物品：灭菌纱布、消毒用酒精、2 mL移液管)
1. 在离心管中准备约10 mL培养基。
2. 在37度左右的温水中融解安瓿瓶，用消毒用酒精充分擦拭安瓿瓶的颈部。
3. 用灭菌纱布包裹安瓿瓶瓶身。
4. 隔着纱布握住安瓿瓶瓶身，拇指用力按压安瓿瓶头部，将其颈部折断。
5. 缓慢打开纱布，取出安瓿瓶，使用2 mL移液器等采集细胞悬液，转移至1）中准备好的离心管中，1000-1200 rpm条件下离心3-5分钟沉淀
细胞。
6. 离心后去除上清液，在新鲜的培养基中重悬沉淀（离心1次）
7. 细胞计数和细胞活力检测后，开始培养。
Q.细胞不增殖
A.可能是由于培养基、培养环境、细胞等存在问题。
（关于细胞质量（特别是增殖能力）的投诉等，仅限发货后3个月内受理）
Ⅰ 培养基
初始培养时请务必使用细胞信息表中指定的培养基。若使用指定以外的培养基，则无法提供保证。首先使用指定的培养基，确认细胞增殖状况，如必要，之后可以尝试使用自己的培养基。
1. 培养基是否放置过久？冷藏条件下，液体培养基建议3个月内使用、粉末培养基建议12个月内使用。
2. 保存状况是否不佳？是否存在反复加热、或是保存温度不当等情况导致培养基发生变质？
3. 是否按要求添加了血清和生长因子？血清的批次差异、厂家差异会对细胞增殖产生显著影响。而血清以外的增殖因子，可能因浓度不当或操作不
当致其失活。
4. 增殖培养基的pH值是否合适？使用粉末配制培养基时，有些需要调整pH值。
5. 是否按要求添加补充剂？使用粉末培养基制备时，有时需要用户添加碳酸氢钠、HEPES 等成分。尤其对于高温高压灭菌的培养基，使用前
必须添加已单独灭菌的碳酸氢钠及 L - 谷氨酰胺。
Ⅱ 培养环境
建议一年校准一次CO2孵育箱，并定期清洁维护。
1. 温度是否合适？
2. 湿度是否合适？孵育箱内的加湿水槽中水量是否充足？
3. CO2浓度是否合适？气瓶是否已耗尽？
Ⅲ 细胞
如果复苏和培养操作不当，后续细胞培养将非常困难。
1. 细胞密度是否合适？细胞密度低会导致细胞增殖开始时间延迟。
2. 细胞活力是否偏低？就悬浮细胞而言，由于活细胞与死细胞难以分离，所以培养开始前必须进行确认。
3. 是否确认细胞的分裂速度？不同细胞分裂所需的时间不同。快的细胞约12小时，慢的细胞则需2~3 天分裂一次。一般来说，癌来源细
胞和血液细胞最快可在 24 小时内分裂，正常细胞相对较慢，通常需要 24 小时以上。
4. 是否出现了分化和老化？分化和老化会导致细胞停止增殖，请严格遵守培养条件。
5. 更换培养基的频率是否合适？更换培养基的时机因细胞密度而异，低密度的情况下请适当延长更换时间。
6. 是否在合适的时期进行传代培养？对于贴壁细胞，当其达到汇合状态后，部分细胞可能出现细胞死亡和分化等性状改变。而悬浮细胞达到最大
细胞密度后，许多细胞会出现活力急剧下降的情况。
Q. 安瓿瓶上信息的含义？
A. 细胞编号，细胞名，传代次数等信息。
安瓿瓶上的信息 | 说明 |
JCRB1217 | 细胞编号 |
MT-3 | 细胞名 |
P12☆ | 传代数⇒若细胞入库前传代次数不明，则用☆表示其在本细胞库内的传代次数。 |
4282011 | 批号 |
Q. 细胞应如何储存？
A. 请在液氮罐等容器内储存。（请勿在－80℃下长期储存）
一般认为细胞在液氮中可半永久储存。如果冻存细胞的存活率低，很可能是在冻存期间或取用其他细胞时，因某种原因导致温度上升。在－80℃超低温冰箱中，细胞可保存半年至一年左右，但存活率会随时间慢慢下降。
Q. 血清如何灭活？ （什么是血清灭活？）
A. 灭活血清中的补体成分，需在56℃条件下加热处理30分钟。
血清中的补体成分活化，可能会导致细胞受损，因此需将血清在56℃下加热30分钟使补体成分失活。
◆培养基、试剂
Q. 如何选择细胞培养用的培养基？（可以使用和细胞信息不同的培养基吗？）
A. 原则上请使用细胞信息中记载的培养基。
关于论文等中记载的培养条件，本细胞库尚未完全确认，因此无法解答。关于培养基与培养基添加剂，原则上没有指定厂家，请根据需求准备所需试剂并制备培养基。
Q. 培养基中是否需要添加抗生素？
A. 本细胞库常规培养细胞培养时，原则上不添加抗生素进行培养。
本细胞库的细胞由熟练的技术人员在洁净的环境中培养，细菌等污染混入的可能性非常低，通常不添加抗生素进行培养。这有助于避免对细胞造成非预期的影响，并防止耐药菌的出现。
◆质量管理
Q. 细胞被支原体污染了怎么办？
A. 建议重新购买可购买（获取）的细胞。
一旦确认细胞被支原体污染，基于以下原因，建议重新购买可购买（获取）的细胞。
1. 无法明确支原体污染的时间点。
2. 清除支原体污染需要大量时间。
3. 即便成功清除污染，细胞的性状也有可能发生改变。
JCRB细胞库出售的细胞，经检测均无支原体污染，可以放心使用。
◆生物安全
Q. 请告知处理细胞时需要的生物安全等级（BSL）。
A. 请在BSL-2下处理所有人源细胞。
JCRB细胞库会对人源细胞进行病毒检测，但因检测的局限性以及未知病毒存在的可能，所以请在BSL-2条件下处理细胞。此外，其他动物物种中，一些病毒生产细胞也需在BSL-2条件下处理。
◆关于发货
Q. 请详细介绍JCRB细胞库在运输细胞时采用的运输方法。
在日本运输细胞的示例程序（包装和干冰）。
冻存管放在填满干冰的泡沫箱中发货。夏季（6-9月）采用冷链运输，其他时间（10-5月）不特别指定冷链配送。
具体来说，对于一般的细胞株采用以下方法。
包装 外箱：纸箱（纸板箱） 内箱：泡沫箱 泡沫箱尺寸 外尺寸：28.5×23.5×21 cm (WDH) 内尺寸：22.5×17.5×16 cm (WDH) |
|
细胞冻存管包装
如下方照片所示，在塑料管的上下填充脱脂棉，将细胞冻存管放置在中间。
如果数量较多，则使用纸盒。
● 放入冻存管前，需要用液氮冷却已填充脱脂棉的外装塑料管。
● 如果液氮进入内部，取出时会气化并急剧膨胀，导致试管破裂。因此，冷却时务必要盖紧盖子。（或置于液氮罐中气体冷却）。
干冰
上述规格的泡沫箱中，约放入7 kg干冰。
1. 首先，用干冰板完全覆盖箱底和侧面。
2. 填充干冰至刚好能放入塑料管或盒子的空间。
3. 如果有缝隙，就将干冰敲碎后尽可能填满。
4. 顶部放干冰，像盖子一样盖住。
5. 尽可能上下左右全部填满干冰。
此外，上述是JCRB细胞库的发货示例，用户自行寄送冻存细胞时，使用试剂供应商处获得的、尺寸合适的泡沫箱即可，外箱非必需。
如果填充10 kg左右干冰，基本可以维持1天，可以根据包装进行尝试。
◆其他
Q. 购买的细胞能否转让给他人？
A. 原则上禁止转让给第三方。
在细胞出售时，购买申请人必须签署 “Request and Agreement Form (Form A)”，其中明确记载了禁止向第三方转让细胞的相关内容。这是为了保护细胞建立者的知识产权，也是为了保证本细胞库提供的细胞的品质，因此还请您理解并配合。如果您对此有疑问，可随时联系我们。
参考文献
Reference | |
Pubmed id: | Alloimmunization with cultured human stomach cancer cell lines and the establishment of human-human hybridomas producing monoclonal antibodies. Koyama K,Akiyama K,Kawahara H,Egashira A,Murakami H Jpn J Cancer Res. 1990 Oct;81(10):967-70 |
Pubmed id: | Characteristics of three human gastric cancer cell lines, NU-GC-2, NU-GC-3 and NU-GC-4. Akiyama S,Amo H,Watanabe T,Matsuyama M,Sakamoto J,Imaizumi M,Ichihashi H,Kondo T,Takagi H Jpn J Surg. 1988 Jul;18(4):438-46 |
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