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LabAssay™ NEFA
LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒

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LabAssay™ NEFA

LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒

在血液中NEFA（Non-esterified Fatty Acid：游离脂肪酸）与白蛋白结合，被转运至外周组织，成为外周组织重要的能源来源。游离脂肪酸的浓度通过脂肪组织释放、外周组织消耗以及肝脏摄取进行调节。

本产品采用了基于酰基辅酶A合成酶（ACS）、酰基辅酶A氧化酶（ACOD）和3-甲基-N-乙基-N-（β-羟乙基）-苯胺（MEHA）的蓝紫色显色酶法。不可用于体外诊断。

◆检测原理

样品中的游离脂肪酸（NEFA）在酰基辅酶A（Acyl-CoA）和腺苷- 5'-三磷酸二钠（ATP）存在下，通过酰基辅酶A合成酶（ACS）的作用，生成酰基辅酶A、AMP以及焦磷酸（PPi）。生成的酰基辅酶A在酰基辅酶A氧化酶（ACOD）的作用下被氧化，同时生成2,3-反式烯酰辅酶A（2,3-trans-Enoyl-CoA）和过氧化氢。生成的过氧化氢在过氧化物酶（POD）的作用下，与3-甲基-N-乙基-N-（β-羟乙基）-苯胺（MEHA）和4-氨基安替比林（4-Aminoantipyrine）进行定量氧化缩合，生成蓝紫色色素。通过测定这种蓝紫色的吸光度，即可计算样品中的NEFA浓度。

◆性能

●　标准曲线范围：0.4～1.97 mEq/L

●　检测时间：约 20 min

●　所需样品量：4 μL

●　测定波长：550 nm

●　检测对象：小鼠、大鼠、人、猫、狗

●　样品：血清、血浆、培养上清

◆试剂盒组成

１．显色剂A——10 mL用×4瓶

２．显色剂A溶解液——45 mL×1瓶

３．显色剂B——20 mL用×4瓶

４．显色剂B溶解液——90 mL×1瓶

５．标准溶液（油酸1 mEq/L）——7 mL×1瓶

５． ※ 油酸1 mEq/L=1 mmol

◆标准曲线示例

◆检测操作方法

微孔板法

按下表条件进行反应。

No.	标准溶液	蒸馏水或去离子水	样品量	浓度
1	80 µL	120 µL	4 μL	0.40 mEq/L
2	120 µL	80 µL	4 μL	0.60 mEq/L
3	160 µL	40 µL	4 μL	0.80 mEq/L
4	未经稀释	-	4 μL	1.00 mEq/L
5	未经稀释	-	8 μL	1.97 mEq/L^*1

*1：样品量通常是4 μL, 但在这里使用了8 μL。NEFA的浓度需要根据上表校正。

	Test	标准	空白对照	样品盲检^＊２
显色试剂 A	80 μL	80 μL	80 μL	80 μL
待测物	血清 4 μL	标准溶液 4 μL	蒸馏水或去离子水 4 µL	―
充分混合^＊3、37 ℃加热10 min。
显色试剂 B	160 μL	160 μL	160 μL	160 μL
待测物	―	―	―	血清 4 μL
充分混合^＊3、37 ℃加热10 min。
恢复至室温，在30 min内以空白作为对照，测定样品和标准溶液的吸光度。
550 nm 吸光过滤

*2：普通的样品无需样品盲检。请使用乳糜血清或溶血血清进行测试。

*3：使用板式搅拌机，在600~1000 rpm下搅拌1 min左右。

◆加标回收测试

NEFA的加标回收测试，将已知含量的标准品加标到人、小鼠、大鼠样品中，n=2。

人样品

人样品	添加量（mEq/L）	测定值（mEq/L）	回收量（mEq/L）	回收率（%）
血清样品	-	0.69
	0.4	1.14	0.45	111.80%
	0.61	1.34	0.64	105.70%
	0.78	1.54	0.85	108.50%
	1.01	1.73	1.03	102.30%
血浆（EDTA）样品	-	0.28
	0.4	0.7	0.43	105.30%
	0.61	0.9	0.62	102.50%
	0.78	1.12	0.84	106.80%
	1.01	1.34	1.06	105.40%

小鼠样品

小鼠样品	添加量（mEq/L）	测定值（mEq/L）	回收量（mEq/L）	回收率（%）
血清样品	-	0.7
	0.4	1.07	0.37	91.70%
	0.61	1.31	0.61	100.10%
	0.78	1.44	0.74	94.50%
	1.01	1.62	0.92	91.30%
血浆（EDTA）样品	-	0.62
	0.4	0.99	0.37	92.50%
	0.61	1.29	0.68	111.50%
	0.78	1.38	0.77	97.80%
	1.01	1.62	1	99.10%

大鼠样品

大鼠样品	添加量（mEq/L）	测定值（mEq/L）	回收量（mEq/L）	回收率（%）
大鼠血清样品	-	0.57
	0.4	1	0.43	106.40%
	0.61	1.21	0.65	106.20%
	0.78	1.4	0.83	106.40%
	1.01	1.57	1.01	99.70%
大鼠血浆（EDTA）样品	-	0.41
	0.4	0.86	0.45	111.50%
	0.61	1.07	0.66	108.50%
	0.78	1.27	0.86	109.50%
	1.01	1.44	1.02	101.40%

培养基样品

样品	添加量（mEq/L）	测定值（mEq/L）	回收量（mEq/L）	回收率（%）
50%培养基 +标准品	-	0.03	-	-
	0.374	0.409	0.38	101.60%
	0.683	0.71	0.68	99.60%
	0.829	0.812	0.782	94.40%
	1.013	1.059	1.03	101.70%

◆样品检测示例

人血清样品

测定值（mEq/L）

mean

CV（%）

混合人血清，男性

0.686

0.688

0.687

0.001

0.2

混合人血浆

（K2EDTA），男性

0.354

0.35

※0.352

0.003

0.8

※参考值

20%稀释CD-1（ICR）雄性小鼠正常血清

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）
1	1.119	1.117	1.118	0.001	0.1
2	0.783	0.793	0.788	0.007	0.9
3	0.7	0.731	0.715	0.022	3.1
4	0.795	0.792	0.794	0.002	0.2
5	0.825	0.833	0.829	0.005	0.6

100%CD-1(ICR)雄性小鼠正常血浆（K2EDTA）

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）
1	0.311	0.308	※0.309	0.002	0.6
2	0.319	0.321	※0.320	0.002	0.6
3	0.202	0.208	※0.205	0.004	2
4	0.173	0.185	※0.179	0.008	4.6
5	0.293	0.318	※0.305	0.017	5.6

※参考值

10％稀释雄性Sprague Dawley大鼠正常血清

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）
1	0.3	0.3	※0.300	0	0
2	0.373	0.368	※0.371	0.004	1.1
3	0.301	0.277	※0.289	0.017	5.8
4	0.365	0.364	※0.365	0	0.1
5	0.403	0.362	※0.382	0.029	7.6

※参考值

100％雄性Sprague Dawley大鼠正常血浆（K2EDTA）

样品批次	测定值（mEq/L）		Mean	SD	CV（%）
RAT432145	0.336	0.33	※0.333	0.004	1.2
RAT432146	0.358	0.354	※0.356	0.003	0.8
RAT432147	0.311	0.339	※0.325	0.02	6
RAT432148	0.222	0.214	※0.218	0.005	2.6
RAT432149	0.522	0.508	0.515	0.01	1.9

※参考值

◆样品检测示例

100%雄性比格犬正常血清

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）	年龄
1	0.654	0.657	0.656	0.0027	0.4	4
2	0.642	0.688	0.665	0.032	4.8	6
3	0.419	0.431	0.425	0.009	2	6
4	0.377	0.383	※0.38	0.0057	1.5	11
5	0.887	0.877	0.882	0.007	0.8	12
6	0.604	0.595	0.599	0.006	1.1	6
7	0.987	1.025	1.006	0.0267	2.7	10
8	0.501	0.51	0.506	0.006	1.2	4

※参考值

100%雄性比格犬正常血浆（EDTA）

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）	年龄
1	0.44	0.444	0.442	0.0033	0.7	4
2	0.419	0.435	0.427	0.011	2.6	6
3	0.311	0.306	※0.308	0.0037	1.2	10
4	0.47	0.487	0.478	0.0123	2.6	12
5	0.472	0.475	0.473	0.005	1	6
6	0.37	0.364	※0.367	0.0047	1.2	11
7	0.789	0.77	0.78	0.0133	1.7	10
8	0.439	0.384	0.411	0.0387	9.4	12

※参考值

100% 雄性短毛猫正常血清

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）	年龄
1	0.709	0.726	0.717	0.0117	1.6	3
2	0.628	0.642	0.635	0.01	1.6	3
3	1.004	1.003	1.004	0.0053	0.5	6
4	0.974	0.987	0.981	0.0093	0.9	4
5	0.624	0.649	0.636	0.017	2.7	6
6	1.175	1.212	1.193	0.0267	2.3	6
7	1.086	0.959	1.022	0.0893	8.8	1
8	0.371	0.393	※0.382	0.0157	4.1	1

※参考值

100％雄性短毛猫正常血浆（EDTA）

序号	测定值（mEq/L）		Mean（mEq/L）	SD	CV（%）	年龄
1	1.092	1.107	1.099	0.0103	0.9	0.5
2	0.177	0.172	※0.174	0.0033	2	1
3	0.243	0.24	※0.241	0.0043	1.7	3
4	0.32	0.319	※0.320	0.0067	2.2	0.5
5	0.363	0.354	※0.359	0.006	1.7	3
6	0.206	0.189	※0.197	0.012	6.2	3
7	0.232	0.199	※0.215	0.024	11.1	0.5
8	0.142	0.12	※0.131	0.016	12.3	1

※参考值

◆稀释线性度测试

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参考文献

1）	Kobayashi, Y. et al. : J. Pharmacogn. Nat. Prod., online (2015). Effects of Morus alba L. (Mulberry) Leaf Extract in Hypercholesterolemic Mice on Suppression of Cholesterol Synthesis ※小鼠肝组织提取物
2）	Gao, F. et al. : Evid. Based Complement. Alternat. Med., 2015, 801291 (2015).Effect of Keishibukuryogan on Genetic and Dietary Obesity Models ※大鼠肝组织提取物
3）	Ogawa, K. et al. : Reprod. Med. Biol., online (2018). Non-esterified fatty acid-associated ability of follicular fluid to support porcine oocyte maturation and development ※猪卵泡来源卵泡液
4）	Wang, F. et al. : J. Mol. Endocrinol., 52, 133 (2014). LGR4 acts as a link between the peripheral circadian clock and lipid metabolism in liver ※小鼠血浆
5）	Uchida, K. et al. : Exp. Anim., 58, 181 (2009). Hyperlipidemia and hyperinsulinemia in the spontaneous osteoarthritis mouse model, STR/Ort ※小鼠血清

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产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
299-94301	LabAssay™ NEFA LabAssay™ 游离脂肪酸检测试剂盒	500 tests	-	-

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