分散酶DISPASE^®

　　DISPASE^® 是切断肽链的中性及非极性氨基酸N末端的金属蛋白酶，能够把上皮细胞从组织上剥离成片状，可用于原代培养的细胞分离与分散。与胰蛋白酶和胶原酶等蛋白酶不同，DISPASE^®造成的细胞损伤更少，可温和地分散细胞，因此也被应用于ES和iPS细胞等再生医学领域。

本产品不含动物源成分。

◆产品信息

◆优点、特色

1. 来源于Paenibacillus sp. （旧名：Bacillus polymyxa）的中性金属蛋白酶，活性中心含有Zn²⁺, 并使用Ca²⁺ 稳定其活性。

2. 酶活性几乎不受血清影响，无论有无血清均可使用。通过添加EDTA或者稀释反应液即可停止酶促反应。

3. 可以很好地分解构成基底膜的IV型胶原、纤连蛋白，让上皮细胞从组织上剥离成片状。

4. 与胰蛋白酶、胶原酶等蛋白酶的作用不同，造成的细胞损伤更少，可温和地分散细胞。

5. 作用条件范围广泛，可以在不同的酶浓度、处理时间、温度以及pH条件下起作用。

6. 在一般细胞培养温度（37°C）下非常稳定，对于某些细胞类型，添加本产品可实现悬浮培养。

7. 无动物源成分，不含支原体。

◆作用条件

※ 1 PU的定义是使用酪蛋白分解法1 min内释放1 μg酪氨酸的酶活性。

◆细胞分散实验

◆应用示例

※ 分散酶DISPASE^® 的效果因细胞种类和培养状况而异。

    推荐浓度为100~2,000 PU/mL，最佳浓度需摸索。

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相关资料

关于DISPASE^®Ⅰ 和DISPASE^®Ⅱ

Q1：DISPASE^®Ⅰ 和DISPASE^®Ⅱ的区别？

A1：

l  DISPASE^®Ⅰ：结晶酶，无菌，含醋酸钙

l  DISPASE^®Ⅱ：粉末状酶，非无菌，含糊精和醋酸钙（溶解后根据需求进行过滤灭菌）。

※     I和II的纯化程度略有不同（I的纯化程度更高）。

Q2：DISPASE^®Ⅰ 和DISPASE^®Ⅱ在使用时有哪些注意事项？是否适用于不同的实验体系？

A2：可用于多种细胞类型和实验体系，目前尚未有不适用的实验体系情况反馈。需注意，因包装不同，开封后应根据存储条件决定如何使用产品。

l  DISPASE^®Ⅰ：真空密封，基本上需一次性使用完毕

l  DISPASE^®Ⅱ：粉末分装使用

关于散装（大包装）

Q1： 是否能提供大包装？

A1：DISPASE^® Ⅱ可提供100 g规格包装，详情请联系富士胶片和光。

Q2：大包装与普通规格有什么区别？

A2：没有区别。

关于定制

Q1：是否支持定制？

A1：根据订单数量可商讨追加额外测试。详情请联系富士胶片和光。

关于使用方法

Q1：推荐浓度是多少？

A1：推荐浓度如产品说明书所示：100～2,000 PU/mL。建议可先在该浓度范围内摸索合适的浓度。

Q2：将上皮细胞剥离至薄片时的推荐浓度为？

A2：酶的效果取决于细胞类型和培养条件，对此无法提供明确的推荐浓度。请参考产品说明书中的浓度100-2000 PU/mL，摸索合适的使用浓度。此外，浓度相同时，DISPASE^®Ⅰ 和DISPASE^®Ⅱ在使用上没有明显差异。

Q3：酶活性、稳定性与Ca²⁺相关，那在不含Ca²⁺的PBS（-）或 HBSS中是否还能发挥作用？

A3：如产品说明书所述，在磷酸盐缓冲溶液中使用时，可能出现白色沉淀或酶活性、稳定性会降低。因此，需尽量避免使用磷酸盐缓冲溶液，建议在含有Ca²⁺条件下使用该产品。

Q4：可以使用PBS (-)吗？

A4：可以使用，但酶活性和稳定性可能会降低。请调整酶添加量（酶浓度）并在溶解后立即使用。

Q5：使用时Ca²⁺的推荐浓度是多少？

A5：仅需几mM即可充分发挥作用。

Q6：前面提到使用含钙的缓冲液或培养基作为酶的溶解液，如果使用含胎牛血清（FBS）的培养基，浓度是否可以调整为10%？

A6：可以。

与其他公司的DISPASE对比

Q1：其他公司的DISPASE活性是否可以换算成合同酒精株式会社的DISPASE活性？

A2：无法换算，因为没有对比数据。

关于容器

Q1：可以在装有DISPASE的试剂瓶中直接溶解吗？

A1

l  DISPASE^®Ⅰ：最多可在瓶中溶解10mL（有实例）。

l  DISPASE^®Ⅱ：由于活性高，无法使其完全溶解。

关于作用

Q1：除了可分解IV 型胶原蛋白和纤连蛋白外，是否还可分解其他的基底膜蛋白？

A1：对层粘连蛋白有轻微的分解作用。

Q2：经过DISPASE^® 分散酶处理后是否会对细胞存活率或细胞基因造成影响？

A2：细胞存活率因条件不同会有较大差异。 而对基因的影响尚未得到证实。

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