LabAssay™ ALP 
LabAssay™ 碱性磷酸酶检测试剂盒
碱性磷酸酶的活性检测试剂盒，常用于检测培养的成骨细胞、实验动物血清和骨组织中的碱性磷酸酶活性。
碱性磷酸酶（ALP）广泛分布于肝脏、骨和小肠之中。组织中酶活性的变化是成骨等生理现象的重要标志。在骨代谢研究领域被用作骨形成指标之一。
本产品是以对硝基苯磷酸盐为底物的碱性磷酸酶检测试剂盒，通过使用酶标仪进行多样品检测。
◆检测原理
碱性磷酸酶存在下，碳酸盐缓冲溶液（pH 9.8）中的对硝基苯磷酸盐分解成对硝基苯酚和磷酸，产生的对硝基苯酚在碱性条件下呈黄色。通过测量405 nm处的吸光度，可以计算样品中的碱性磷酸酶活性。
◆产品性能
检测范围：>0.06 mmol/L
标准曲线范围：0.0625~0.5 mmol/L
重复性：C.V.<10%
样品：血清（小鼠、大鼠、人）
所需样品量：20 μL
检测时间：约20min
检测波长：405 nm
◆试剂盒成分
底物片（溶解时对硝基苯基磷酸二钠 6.7 mmol/L) | 10 片 |
底物溶解buffer （2.0 mmol/L 氯化镁 含有 0.1 mol/L 碳酸盐缓冲液 pH 9.8) | 50 mL × 1瓶 |
反应终止液（0.2 mol/L氢氧化钠溶液） | 50 mL × 1瓶 |
标准溶液 (0.5 mmol/L 对硝基苯酚溶液） | 5 mL × 1瓶 |
◆标准曲线示例
◆检测操作方法
根据下表中的条件进行反应。
Test | 标准 | 空白 | |
底物缓冲液 | 100 μL | 100 μL | 100 μL |
待测物 | 样品20 μL | 标准溶液20 μL | 蒸馏水 20 μL |
孔板混匀仪中震荡1 min，37°C下孵育15 min。 | |||
反应终止液 | 80 μL | 80 μL | 80 μL |
孔板混匀仪中震荡1 min，使用酶标仪测量405 nm处吸光度 | |||
◆数据
加标回收测试
ALP的加标回收测试，将已知含量的标准品加标到人、小鼠、大鼠样品中，n=2。
● 人血清样品
添加量(mmol/L) | 平均值(mmol/L) | 回收量(mmol/L) | 回收率（%） |
－ | 0.429 | － | － |
0.097 | 0.527 | 0.098 | 101 |
0.197 | 0.587 | 0.158 | 80.2 |
0.297 | 0.672 | 0.243 | 81.8 |
0.507 | 0.866 | 0.437 | 86.2 |
● 小鼠血清样品
添加量(mmol/L) | 平均值(mmol/L) | 回收量(mmol/L) | 回收率（%） |
－ | 0.284 | － | － |
0.060 | 0.343 | 0.059 | 98.3 |
0.127 | 0.399 | 0.115 | 90.6 |
0.251 | 0.507 | 0.223 | 88.8 |
0.500 | 0.753 | 0.469 | 93.8 |
● 大鼠血清样品
添加量(mmol/L) | 平均值(mmol/L) | 回收量(mmol/L) | 回收率（%） |
－ | 0.374 | － | － |
0.060 | 0.439 | 0.065 | 108.3 |
0.127 | 0.483 | 0.109 | 85.8 |
0.251 | 0.598 | 0.224 | 89.2 |
0.500 | 0.855 | 0.481 | 96.2 |
稀释线性度测试
使用随附的缓冲液制备样品，使其处于检测范围内，用缓冲液连续梯度稀释4次，并检测结果。
● 人血清样品
● 小鼠血清样品
● 大鼠血清样品
样品检测案例
● 人样品
样品 | 检测值 (mean) | SD | CV (%) |
混合血清，男性 | 0.556 | 0.003 | 0.5 |
混合血浆(EDTA)，男性 | 0.07 | 0.001 | 1.2 |
※抗凝固剂的EDTA会产生负误差，所以请不要使用。
● 小鼠样品：CD-1(ICR)、雄性、血清
样品 | 检测值 (mean) | SD | CV (%) |
No.1 | 0.31 | 0.013 | 4.2 |
No.2 | 0.453 | 0.001 | 0.2 |
No.3 | 0.495 | 0.015 | 3 |
No.4 | 0.442 | 0.013 | 2.9 |
No.5 | 0.373 | 0.002 | 0.5 |
样品 | 检测值(mean) | SD | CV (%) |
No.1 | 0.538 | 0.005 | 1 |
No.2 | 0.441 | 0.01 | 2.2 |
No.3 | 0.357 | 0 | 0 |
No.4 | 0.46 | 0.002 | 0.5 |
No.5 | 0.301 | 0.011 | 3.6 |
单位：mmol/L, n=2
※ 产品已更新，旧编号为：291-58601
参考文献
● Ito, S. et al. : J. Pharmacol. Exp. Ther., 333, 341 (2010). ※小鼠肾组织提取液
● Matsuyama, A. et al. : Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., 45, 75 (2018). ※MC3T3-E1细胞, C2C12细胞
● Chiba, T. et al. : J. Atheroscler. Thromb., 23, 1099 (2016). ※小鼠血浆
● Kohno, Y. et al. : Stem Cell Res. Ther., 8, 115 (2017). ※骨膜间充质干细胞
● Iwakura, T. et al. : J. Orthop. Res., 27, 208 (2009). ※人培养细胞提取液
● Furuya, Y. et al. : J. Biol. Chem., 286, 37023 (2011). ※小鼠血清
● Itoh, T. et al. : J. Biol. Chem., 284, 19272 (2009). ※小鼠培养细胞提取液
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 633-51021 | LabAssay™ ALP LabAssay™ 碱性磷酸酶检测试剂盒 |
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