用于人iPS细胞冻存
StemSure® hPSC 冻存液，AF
StemSure® hPSC 冻存液，AF 是无动物源成分的人 iPS 细胞用冻存液。本品含 DMSO。
◆特点
● 能以高细胞存活率冻存人 iPS 细胞
● 不含动物源成分
● 可以以缓慢冻结的方式进行冻存
● 可用于无饲养层培养的细胞
● 无需进行繁杂的试剂配制
● 无需程序降温
◆人 iPS 细胞冻存步骤
冷 冻 | 1. 在除去人 iPS 细胞培养皿中的培养液，用 D-PBS（-）清洗后，用 Accutase 等分散细胞。 |
2. 添加含有 10 µmol/L Y-27632 的人 iPS 细胞用培养基（hPSC 培养基（+ROCKi）），用移液器吹散成单细胞。 | |
3. 将吹打分散后的细胞悬浮液移至样本管中，离心（1,000 rpm，３分钟，室温）后，除去上清液。 | |
4. 添加 hPSC 培养基（+ROCKi），用移液器悬浮。 | |
5. 计算细胞数，将样本管离心（1,000 rpm，３分钟，室温）后，除去上清液。 | |
6. 利用本产品使细胞悬浮成 2×106 cells/mL，并以 500 µL/管进行分装。 | |
7. 在 -80°C 下冷冻后，在 -150°C 或者 -80°C 的条件下保存（长期保存建议保存在 -150°C）。 | |
复 苏 | 1. 添加 hPSC 培养基（+ROCKi）到冻存瓶中，复苏冷冻细胞。 |
2. 离心（室温下，1,000 rpm，３分钟）后，除去上清液，添加 hPSC 培养基（+ROCKi），使细胞悬浮。 | |
3. 计算细胞数，以 2×105 cells/6 cm dish的条件接种 |
◆人iPS细胞201B7株的冻存
确认细胞存活率和细胞增殖率
将培养中的人 iPS 细胞 201B7 株分散成单细胞后，重悬于 StemSure® hPSC 冻存液，AF 中，在 -80°C下冻存２~４天。
确认冷冻复苏后的细胞存活率和细胞增殖率。反复冷冻复苏５次后，确认细胞、细胞集落的形态和各种未分化标记（Oct3/4、Nanog、BC2LCN）的表达。
确认细胞集落的形态
确认细胞存活率和细胞增殖率
结果表明，用 StemSure® hPSC 冻存液，AF 冻存的人 iPS 细胞显示出高细胞存活率和细胞增殖率。
另外还确认了各种未分化标记的表达。
◆人iPS细胞冻存步骤
使用用 StemSure® hPSC 冻存液，AF 冷冻复苏５次后的 iPS 细胞 201B7 株，形成胚叶体，βⅢ-Tubulin,α-SMA,AFP 的表达确认其分化成了三胚叶。
（胚叶体形成，三胚叶分化诱导时的培养基组成）
Stemsure D-MEM+SSR+2mol/L L-Glutamine+10mmol/L2-Mercaptoethanol +1×Non-essential Amino Acids Solution
测试项目：外观，应用试验（iPS 细胞 201B7株），无菌试验，内毒素，支原体测试
可用于ES干细胞的冻存液，请点击：StemSure细胞冻存液
通用动物细胞冻存液，请点击：CultureSure无血清细胞冻存液
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 197-17831 | StemSure® hPSC Freezing Medium, AF StemSure® hPSC冻存液，AF |
100 mL | 细胞培养用 |
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