CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0
CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0 使用新型染料检测自噬小泡和监控活细胞自噬流，选择性标记积累的自噬小泡。染料已通过优化，不染溶酶体，在自噬前体、自噬体和自噬溶酶体里呈现出明 亮的荧光。该试剂盒提供了一种无需细胞转染，可以在活细胞中监控细胞自噬的快速定量方法。
◆特点
● 更明亮，更耐光，特异性染色自噬小泡
● 无需转染及转染效率验证
● 快速量化原生异质性细胞群中的自噬
● 不染溶酶体，减少其他染料的背景干扰
● 便于高通量筛选自噬激活剂和抑制剂
◆原理
该产品所用探针是阳离子两亲性示踪剂（CAT）染料，以类似诱导磷脂药物的方式迅速进入到细胞中。染料的功能基团能够选择性标记与自噬通路相关的小泡，而不会在溶酶体中聚集。
胞内物质被扩大的膜囊包裹，吞噬泡形成双层膜囊泡，成为自噬体。自噬体外膜随后与溶酶体融合，和内部物质被自噬性溶酶体降解。自噬的各种调节因子也被描绘于图中。 |
自噬原理图 |
◆应用
CYTO-ID® 绿色检测试剂2（A组）在PBS确定的吸光度和荧光图谱（499/548 nm）。 Hoechst33342（图B）在1X测定缓冲液来确定的吸光度和荧光图谱（350 /461 nm）。 | 的发放 |
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HeLa cells使用 CYTO-ID® Green Detection Reagent 2进行染色 (A) 完全培养基 (B) 在饥饿培养基 (EBSS)中添加40 µM Chloroquine培养4 h 。在含有Chloroquine 的EBSS培养基中培养的细胞表现非常明亮的绿色荧光信号和点状结构。 |
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运用流式细胞术分析Jurkat细胞的自噬 通过0.5 µM Rapamycin (RAP), 10 µM Chloroquine (CLQ)处理或不处理Jurkat细胞，或两者一起处理20 h。CYTO-ID® Green Detection Reagent 2染色30 min后，洗脱，用流式细胞仪分析。直方图叠加呈现结果。用RAP+CLQ处理细胞显示荧光有升高。 |
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微孔板分析HepG2细胞的自噬 HepG2经过DMSO（对照），0.5 μM Rapamycin (Rap), 10 µM Chloroquine (CLQ),或0.5 µM Rap 和10 µM CLQ同时培养20 h。细胞经过Hoechst 33342染色进行细胞数目标准化。Rap 和CLQ同时处理细胞显示自噬作用上升。 |
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相关产品资料请点击下载：活细胞荧光分析 Ver.3
自噬技术文章
Posted By Morgan Mathieu
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主要参考文献
(1) | A live-cell fluorescence microplate assay suitable for monitoring vacuolation arising from drug or toxic agent treatment: J. Coleman, et al.; J. Biomol. Screen. 15, 398 (2010), 摘要; |
(2) | Methods in mammalian autophagy research: N. Mizushima, et al.; Cell 140, 313 (2010),摘要; |
(3) | Assays to Assess Autophagy Induction and Fusion of Autophagic Vacuoles with a Degradative Compartment, Using Monodansylcadaverine (MDC) and DQ-BSA: C.L. Vazquez & M.I. Colombo; Methods Enzymol. 452, 85 (2009),摘要; |
(4) | Desmethylclomipramine induces the accumulation of autophagy markers by blocking autophagic flux: M. Rossi, et al.; J. Cell Sci. 122, 3330 (2009), 摘要; |
(5) | Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy in higher eukaryotes: D.J. Klionsky, et al.; Autophagy 4, 151 (2008), 摘要; |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| ENZ-KIT175-0200 | Cyto-ID® Autophagy detection kit 2.0 CYTO-ID®自噬检测试剂盒2.0 |
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