PUREfrex® 2.0
PUREfrex® 酶无细胞蛋白合成试剂盒
自2022年12月起，PUREfrex® 试剂盒内的Solution I的原材料已更换，详情请点击：PUREfrex® 系列试剂盒部分组成及制备方法变更通知
自2023年8月起，250 µL×5反应用规格已停产，并推出新规格产品“2 mL 反应用”。停产产品将在库存售罄后停售。
PUREfrex® 2.0 改良了 PUREfrex® 1.0（#PF001-0.25）的反应液成分，保留 PUREfrex® 特点（RNase和LPS 等的污染少）的同时提高了合成效率。适用于需要大量蛋白的实验，如蛋白的功能评估等。
本产品的改良旨在提高蛋白的合成活性，因此，根据研究内容不同，PUREfrex® 1.0 的实验结果可能会更理想。PUREfrex® 1.0 和PUREfrex® 2.0 的对比详情点击此处查看。
PUREfrex® 2.0 不含分子伴侣，因此根据合成蛋白不同，可能无法形成正确的高阶结构，也可能不溶于水。这时，只需在蛋白合成过程中添加分子伴侣即可解决。本试剂盒也提供了DnaK mix（#PF003-0.5）和GroE mix（#PF004-0.5）作为添加剂。
PUREfrex® 2.0 含有还原剂GSH，因此可在还原条件下进行蛋白合成反应。合成需要形成二硫键（SS键：SS-bond或二硫桥：disulfide bridge）的蛋白时，建议添加DsbC Set (#PF005-0.5)或PDI Set (#PF006-0.5)。
◆产品组成
关于PUREfrex® 2.0 中各Solution具体成分保密。
250 µL反应用
产品规格 | 产品成分 | 开封后的储存温度 *1 | |
Solution Ⅰ | 125 μL | 氨基酸、NTP、tRNA、酶底物等 | -20℃ |
Solution Ⅱ | 12.5 μL | 蛋白（30% 甘油溶液） | -20℃或-80℃*2 |
Solution Ⅲ | 25 μL | 核糖体（20 µM） | -80℃ *2 |
DHFR DNA *3 | 10 μL | 含大肠杆菌DHFR基因的 PCR 产物(20 ng/μL) | -20℃ |
2 mL 反应用
产品规格 | 产品成分 | 开封后的储存温度*1 | |
Solution Ⅰ | 1,000 μL | 氨基酸、NTP、tRNA、酶底物等 | -20℃ |
Solution Ⅱ | 100 μL | 蛋白（30% 甘油溶液） | -20℃或-80℃ *2 |
Solution Ⅲ | 200 μL | 核糖体（20 µM） | -80℃ *2 |
DHFR DNA *3 | 10 μL | 含大肠杆菌 DHFR 基因的 PCR产物(20 ng/μL) | -20℃ |
*1）试剂盒开封前，请在-80℃条件下储存。
*2）在-80°C条件下储存使用后的剩余反应溶液时，应在储存前使用液氮或干冰/乙醇等进行速冻。请根据需求进行分装，避免反复冻融。
*3）当用作蛋白合成的阳性对照时，请在20 µL合成反应溶液中添加1 µL DHFR DNA。
◆使用方法
使用PUREfrex®2.0 时，可在任意体积的反应液下进行蛋白合成。例如，20 μL时的制备方法如下所示。
1. 将Solution Ⅰ在室温~37℃下加热1 min左右至完全融解，随后置于冰上。
2. 将Solution Ⅱ和Solution Ⅲ置于冰上融解。
3. 将融解的SolutionⅠ，Ⅱ，Ⅲ轻轻涡旋后，离心并收集试管底部的内容物。
4. 请根据以下配比制备反应液。（DNA 添加量为每kbp 0.5-3 ng/ μL）
RNase-Free Water | 7-X μL |
Solution Ⅰ | 10 μL |
Solution Ⅱ | 1 μL |
Solution Ⅲ | 2 μL |
模板DNA 注1 | X μL |
Total | 20 μL |
5．在37°C的加热块或水浴中反应 2~6 h，合成蛋白注2。
6．合成的蛋白可用于多种用途注3。
注意事项
注1） 模板DNA请根据目标蛋白自行制备。关于制备方法，请参阅“关于模板DNA”。
注2） 如果在气相恒温槽（如培养用恒温器）中进行反应，反应液的温度上升需花费更多的时间，合成量会有所降低
注3） 通过SDS-PAGE确认合成时，请用水稀释反应液后进行电泳。详情请点击“PUREfrex反应液的SDS-PAGE”查看。
◆使用注意事项
PUREfrex® 为研究用试剂，不可用于包含人在内的动物给药、临床和诊断等其他用途。此外，请勿用于食品或家庭用途。
使用 PUREfrex® 时，请使用不含RNase的水、试剂和设备。 此外，建议佩戴手套和口罩。
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点击此处查看相关产品详情：PUREfrex®1.0
点击此处查看相关产品详情：PUREfrex® 2.1
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| GFK-PF201-0.25-EX | PUREfrex® 2.0 | 250 µL反应用 | - | - |
| GFK-PF201-10-EX | PUREfrex® 2.0 | 10 mL反应用 (5×2 mL) |
- | - |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| GFK-PF001-EX | PUREfrex®1.0 PUREfrex无细胞表达系统1.0 |
1 kit | - | - |
| GFK-PF002-EX | PUREfrex®SS 1.0 PUREfrex无细胞表达系统1.0 |
1 kit | - | - |
| GFK-PF001-0.25-5-EX | PUREfrex 1.0 | 5 x 250 µl | - | - |
| GFK-PF001-0.25-EX | PUREfrex 1.0 | 1 x 250 µl | - | - |
| GFK-PF001-10-EX | PUREfrex 1.0 | 5 x 2 ml | - | - |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| GFK-PF213-0.25-EX | PUREfrex® 2.1 PUREfrex无细胞表达系统2.1 |
1x 250 µL | - | - |
| GFK-PF213-0.25-5-EX | PUREfrex® 2.1 PUREfrex无细胞表达系统2.1 |
5 x 250 µL | - | - |
| GFK-PF213-10-EX | PUREfrex® 2.1 | 5 x 2 mL | - | - |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| GFK-PFS052-0.5-EX | Purefrex EF-P Supplement | 500 µL Equivalents | - | - |
| GFK-PFS052-10-EX | Purefrex EF-P Supplement | 5 x 2 mL Equivalents | - | - |
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