重组蛋白纯化检测用
TARGET标签系统
◆特点
● 通过树脂再生，降低运作成本
● 温和洗脱、清洗，实现高纯度
● 在动物细胞表达系（HEK293T细胞、CHO细胞等）中有效纯化蛋白
TARGER标签系统使用的是可识别肽标签（21个氨基酸残基）的单抗（P20.1），是日本开发的亲和纯化标签系统。
TARGET标签系统实践证明，即使在传统系统都难以进行高纯度蛋白纯化的动物细胞表达系中，也可有效地进行亲和纯化。
◆TARGET标签系统
A rapid screening method for cell lines producing singly-tagged recombinant proteins using the“ TARGET tag”system. Tabata S. et al., J. Proteomics, 2010 Aug 5;73(9):1777-85.
◆TARGET 标签表达载体示意图
产品选择
载体 | 表达模式 | 宿主细胞 | MCS启动子 |
pEBMulti | 非整合型稳定表达 | 灵长类（人、猴）、狗细胞等贴壁细胞 | CAG |
pCAG | 瞬时表达 | 灵长类（人、猴）、狗细胞等贴壁细胞、大/小鼠等动物细胞 | CAG |
富士胶片和光还推出除上述抗性基因载体外的其他载体。（请点击查看）
测序用引物序列、其他载体序列的相关详细信息，已附在产品随货说明书中。
另外可点击富士胶片和光主页/TARGET标签，查看序列信息、多克隆位点(MCS)信息。
TARGET标签融合蛋白的免疫沉淀
| 通过Transient 载体， 表达TARGET标签融合重组蛋白
|
培养上清（培养第7天） 每10 mL中，分别添加0.1 mL（net 0.05 mL）的抗体磁珠（①抗TARGET标签抗体琼脂糖珠、②抗DYKDDDDK标签抗体琼脂糖珠，其他公司产品），4℃条件下，进行2小时免疫沉淀。 清洗后，在回收的各珠中分别添加0.5 mL 0.2 mg/mL TARGET标签肽/TBS和0.2 mg/mL DYKDDDDK肽/TBS，4℃条件下，平稳震动0.5小时。离心后回收上清。 再分别在各珠中添加0.5 mL 0.1 M Glycine-HCl (pH 2.7)，室温下，平稳震动5分钟。离心后，回收上清并用1M Tris-HCl (pH 9.0)中和。 上图为SDS-PAGE处理后的银染结果。 与传统DYKDDDDK tag相比，背景更低 →高纯度！ | M：M.W. Marker 1.仅转染载体的培养上清 2.转染了蛋白Y-TARGET 标签表达质粒的细胞培养上清 3.转染了TARGET标签-蛋白Y 表达质粒的细胞培养上清 也可使用市售的Transient载体 |
确认非整合型载体TARGET tag C端融合重组蛋白的表达 | |
利用可编码表达人源生理活性蛋白基因的质粒转染 HEK293N 细胞后，从初期细胞数 3×105 cells/mL 开始培养，回收 0/3/7 日的培养上清。 用 20 μL/lane 的培养上清进行 SDS-PAGE 处理，通过银染和 Western blotting，检测出蛋白的表达。 |
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可确认到与市面售卖的 Tag 系统有相同的表达量和检测灵敏度。 | |
◆TARGET 标签系列
产品名称 | 子类 | 适用 实验 | 规格 | 产品编号 | 包装 | |
单抗 | ||||||
抗TARGET标签，单抗 Anti TARGET tag，Monoclonal Antibody | 小鼠 IgG1 | IP, WB | 免疫化学用 | 200 μg | ||
1 mg | ||||||
HRP标签单抗 | ||||||
抗 TARGET tag，单抗，过氧化酶结合 Anti TARGET tag, Monoclonal Antibody (P20.1) Peroxidase conjugated | 小鼠 IgG1 P20.1 | WB | 免疫化学用 | 200 μL | ||
1 mL | ||||||
产品名称 | 子类克隆号 | 规格 | 产品编号 | 包装 | |||||
抗体结合琼脂糖珠 | |||||||||
抗 TARGET 标签抗体琼脂糖珠 Anti TARGET tag Antibody Beads | 小鼠 IgG1 P20.1 | 免疫化学用 | 2 mL (Net 1 mL) | ||||||
10 mL (Net 5 mL) | |||||||||
50 mL (Net 25 mL) | |||||||||
识别 N 端、C 端的 TARGET 标签 使用载体：4% 琼脂糖 | |||||||||
产品名称 | 备注 | 规格 | 产品编号 | 包装 |
肽 | ||||
TARGET标签肽 TARGET tag Peptide | 含量（HPLC）95%以上 | 基因研究用 | 5 mg | |
25 mg | ||||
清洗液 | ||||
TARGET标签清洗液 TARGET tag Washing Solution | 已过滤消毒 | 基因研究用 | 50 mL | |
产品名称 | 可选 Marker | 产品编号 | 包装 | ||
大肠杆菌 | 动物细胞 | ||||
瞬时表达载体 | |||||
C端插入TARGET标签的pCAG-Ble载体 pCAG-Ble TARGET tag-C | 博莱霉素 | 20 μg | |||
N端插入TARGET标签的pCAG-Ble载体 pCAG-Ble TARGET tag-N | 博莱霉素 | 20 μg | |||
C端插入TARGET标签的pCAG-Bsd载体 pCAG-Bsd TARGET tag-C | 杀稻瘟素S | 20 μg | |||
N端插入TARGET标签的pCAG-Bsd载体 pCAG-Bsd TARGET tag-N | 杀稻瘟素S | 20 μg | |||
C端插入TARGET标签的pCAG-Hyg载体 pCAG-Hyg TARGET tag-C | 潮霉素B | 20 μg | |||
N端插入TARGET标签的pCAG-Hyg载体 pCAG-Hyg TARGET tag-N | 潮霉素B | 20 μg | |||
C端插入TARGET标签的pCAG-Neo载体 pCAG-Neo TARGET tag-C | 卡那霉素 | G418 | 20 μg | ||
N端插入TARGET标签的pCAG-Neo载体 pCAG-Neo TARGET tag-N | 卡那霉素 | G418 | 20 μg | ||
游离载体 | |||||
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Ble载体 pEBMulti-Ble TARGET tag-C | 博来霉素 | 20 μg | |||
N段插入TARGET标签的pEBMulti-Ble载体 pEBMulti-Ble TARGET tag-N | 博来霉素 | 20 μg | |||
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Bsd载体 pEBMulti-Bsd TARGET tag-C | 杀稻瘟素S | 20 μg | |||
N段插入TARGET标签的pEBMultI-Bsd载体 pEBMulti-Bsd TARGET tag-N | 杀稻瘟素S | 20 μg | |||
| C段插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体 pEBMulti-Hyg TARGET tag-C | 潮霉素B | 20 μg | |||
N段插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体 pEBMulti-Hyg TARGET tag-N | 潮霉素B | 20 μg | |||
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Neo载体 pEBMulti-Neo TARGET tag-C | 卡那霉素 | G418 | 20 μg | ||
N段插入TARGET标签的pEBMulti-Neo载体 pEBMulti-Neo TARGET tag-N | 卡那霉素 | G418 | 20 μg | ||
C段插入TARGET标签的pEBMulti-Puro载体 pEBMulti-Puro TARGET tag-C | 氨苄青霉素 | 嘌呤霉素 | 20 μg | ||
N段插入TARGET标签的pEBMulti-Puro载体 pEBMulti-Puro TARGET tag-N | 氨苄青霉素 | 嘌呤霉素 | 20 μg | ||
◆相关产品
内参照
下表为 Western Blot 实验中参照用单抗一览表。
产品名称 | 规格 | 产品编号 | 包装 |
抗β肌动蛋白单抗 | 免疫化学用 | 200 μg | |
1 mg | |||
5 mg | |||
抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记 Anti β-Actin，Monoclonal Antibody，Peroxidase Conjugated | 免疫化学用 | 200 μL | |
抗α-微管蛋白，单抗 Anti α-Tubulin，Monoclonal Antibody | 免疫化学用 | 10 μg | |
200 μg | |||
1 mg | |||
Anti β-Tubulin，Monoclonal Antibody | 免疫化学用 | 10 μg | |
200 μg | |||
1 mg | |||
Anti GAPDH，Monoclonal Antibody | 免疫化学用 | 200 μg | |
1 mg | |||
5 mg | |||
Anti GAPDH，Monoclonal Antibody，Peroxidase Conjugated | 免疫化学用 | 200 μL |
蛋白酶抑制剂系列
产品名称 | 规格 | 产品编号 | 包装 |
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I，无动物源成分（通用型） Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized | 通用型 | 1 mL用 | |
1 mL用×5 | |||
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III, DMSO溶液（不含EDTA）（×100） | 动物细胞 | 1 mL | |
1 mL×5 | |||
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V （无EDTA）（×100） | 2D电泳 | 1 mL | |
1 mL×5 | |||
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI，DMSO溶液，用于植物（×100） | 植物细胞 | 1 mL | |
1 mL×5 | |||
蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII，DMSO溶液，组氨酸标签蛋白（×100） | His Tag 纯化※ | 1 mL | |
1 mL×5 |
亲和标签比较表
亲和标签 | |||
氨基酸序列 | (YPGQ)5V | GVAMPGAEDDVV | HHHHHH |
残基数 | 21 | 12 | 6 |
分子量 (kDa) | 2.34 | 1.16 | 0.84 |
等电点（pI） | 5.52 | 3.49 | 7.21 |
配体 | TARGET tag | PA tag | Ni, Co, Zn, Cu |
亲和珠回收 | 40% Propyleneglycol, | 3M MgCl2, MES(pH6.0) | 0.5M Imididazole(pH7.4) |
单抗边界强度 （KD（M）） | 1.0×10-8 | 4.9×10-10 | Ni-NTA: |
单抗 Clone No. | P20.1(Mouse) | NZ-1(Rat) | Merck:HIS. H8(Mouse) |
亲和力 | ++++ | +++++ | +++ |
提纯成本 | + | + | + |
多肽洗脱 | +++ | +++ | Imidazole |
背景 （培养上清） | + | + | +++++ |
背景 （细胞裂解物） | + | + | ++++ |
亲和标签 | ||||
氨基酸序列 | DYKDDDDK | EQKLISEEDL | YPYDVPDYA | - |
残基数 | 8 | 10 | 9 | 218 |
分子量 (kDa) | 1.01 | 1.20 | 1.10 | 26 |
等电点（pI） | 3.97 | 4.00 | 3.56 | - |
配体 | DYKDDDDK tag | c-Myc tag | HA tag | GST |
亲和珠回收 | Tris-HCl, | Tris-HCl, | Tris-HCl, | Glutathione, |
单抗边界强度 （KD（M）） | 2.8×10-8 | 2.2×10-9 | 2.8×10-9 | Glutathione: |
单抗 Clone No. | M2(Mouse) | 9E10(Mouse) | 3F10(Mouse) | Wako:5A7(Mouse) |
亲和力 | ++++ | ++++ | ++++ | ++++ |
提纯成本 | ++ | ++ | ++ | + |
多肽洗脱 | +++ | ++ | ++ | Glutathione |
背景 （培养上清） | ++++ | +++ | +++ | ++++ |
背景 （细胞裂解物） | ++++ | ++++ | +++ | ++++ |
本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同，特异性也会有所变化，因此无法保证各个亲和标签的功能。
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