细胞外囊泡保存稳定剂

EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂

EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂，可保护细胞外囊泡免受冷冻损伤，以及抑制细胞外囊泡对样品管和枪头等实验耗材的吸附。FUJIFILM Wako还推出了适用于动物体内实验的版本（动物体内实验用）。

　　使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS（产品编号：299-77603，293-77601）从细胞培养上清中提取外泌体时，搭配本品效果更佳。

冷冻保护

反复冻融会使外泌体受损。但储存前在含细胞外囊泡的试管中添加EV-Save™，即可在-80°C下储存细胞外囊泡。

防吸附

在纯化或储存前，往样品中添加EV-Save™，可防止由于实验和储存过程中发生的细胞外囊泡吸附而造成的损失，提高回收率。

■ 使用前

· 本产品用于血清、血浆或杂质较多的样品时，难以获得理想的防吸附效果。

· EV-Save™（动物体内实验用）（产品编号：050-09461）无法减少因超滤导致的细胞外囊泡损耗。因此，进行超滤时，请选用EV-Save™（超滤

· 用）（产品编号：058-09261）。

· EV-Save™（超滤用）（产品编号：058-09261）含有聚合物。若聚合物会影响后续的实验结果，请勿使用本产品。

◆特点

●　保护细胞外囊泡免受冷冻伤害

      可在-80°C下储存细胞外囊泡

●　防止细胞外囊泡在培养上清中和纯化后对实验耗材的吸附

      细胞外囊泡回收率提升！

●　操作简单，只需往样品中添加本产品即可

◆使用方法

＜使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2（产品编号：290-84103）从细胞培养上清中分离细胞外囊泡）

1. EV-Save™（超滤用）或EV-Save™（动物体内实验用）以1:100的终浓度添加到到细胞培养上清中，上下颠倒混合或轻敲混合。

2. 按照MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2（V2.0试剂盒）的说明书，执行实验操作至“5. 清洗细胞外囊泡结合磁珠”。

3. EV-Save™（超滤用）或EV-Save™（动物体内实验用）以1:100的终浓度添加到V2.0试剂盒配备的Exosome Elution Buffer中，上下颠倒混合或

3. 轻敲混合。

4. 按照V2.0试剂盒的说明书，继续执行实验操作至“6. 洗脱细胞外囊泡”，进行洗脱细胞外囊泡操作。

5. 存储洗脱后的细胞外囊泡^※1，或继续进行下一实验操作。

<使用其他分离方法从细胞培养上清中分离细胞外囊泡>

1. EV-Save™（超滤用）或EV-Save™（动物体内实验用）以1:100的终浓度添加到细胞培养上清中，上下颠倒混合或轻敲混合。

2. EV-Save™（超滤用）或EV-Save™（动物体内实验用）以1:100的终浓度添加到分离得到的细胞外囊泡中，上下颠倒混合或轻敲混合。

3. 储存细胞外囊泡^※1，或继续进行下一实验操作。

＜使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2从血清、血浆中分离细胞外囊泡>

1. 按照MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2（V2.0试剂盒）的说明书，执行实验操作至“5. 清洗细胞外囊泡结合磁珠”。

2.  EV-Save™（超滤用）或EV-Save™（动物体内实验用）以1:100的终浓度添加到V2.0试剂盒配备的Exosome Elution Buffer中，上下颠倒混合或

3. 轻敲混合。

3. 按照V2.0试剂盒的说明书，继续执行实验操作至“6. 洗脱细胞外囊泡”，进行洗脱细胞外囊泡操作。

4. 存储洗脱后的细胞外囊泡^※1，或继续进行下一实验操作。

※1 添加本产品后可在-20°C下冻存。注意避免反复冻融。

◆EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（超滤用）

■ 细胞外泌体冷冻保护效果

众所周知，在反复冻融的条件下外泌体会受到损伤^1）。下面就来验证添加EV-Save™ 是否能抑制外泌体所受到的损伤。

实验条件

对PS亲和法^※2对应试剂盒纯化得到的COLO201细胞来源外泌体进行冻融。然后，使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit （Anti Mouse IgG POD)（产品编号：297-79201）进行检测（A），以及使用透射电子显微镜（TEM）进行分析（B）。

※2 利用磷脂酰丝氨酸（PS）结合分子以金属离子依赖性方式捕获细胞外囊泡后，用螯合剂洗脱的方法。通过MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2，可利用此方法纯化EV。

冻融后CD63信号减弱，但是添加 EV-Save™（超滤用）后这种减弱的情况得到抑制 （图A）。此外，电子显微镜分析结果表明冻融导致了粒子数明显减少，但是添加EV-Save™ （超滤用）可以起到抑制粒子数减少的作用（图B）。

参考文献

1）Steffi, B. et al. "Trehalose prevents aggregation of exosomes and cryodamage", Scientific Reports, 6, 36162 (2016).

■ EV-Save™（超滤用）的吸附抑制效果~样本管~

　　下面来验证一下，使用EV-Save™（超滤用） 是否能抑制提取外囊泡对试管的吸附。

实验条件

　　用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS（产品编号：293-77601）从COLO201细胞的培养上清中提取出外泌体。

　　将3 ng/µL外泌体放入试管中静置3分钟。然后用移液器转移到其他样本管，重复本步骤4次以上。

　　在含EV-Save™（超滤用） 的实验组中，将EV-Save™（超滤用） 按照1/100体积添加到样本中，然后进行移液。

　　使用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒（抗小鼠IgG POD）（产品编号：297-79201）对外泌体的CD63信号进行定量，验证移液次数与外泌体减少比率的关系。

　　将移液前的CD63信号设定为100%，相对值见图表。

【结果】

　　在普通样本管和低蛋白吸附样本管中，移液操作都会引起外泌体减少。而添加EV-Save™ 几乎能完全抑制移液引起的外泌体损耗。

■ EV-Save™ （超滤用）的吸附抑制效果~同时使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS~

　　下面，在利用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS从TIG3细胞培养上清中提取外泌体的过程中，验证添加EV-Save™ （超滤用）是否能抑制外泌体的损耗。

实验条件

　　使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS，分别从1 mL COLO201、TIG3和人iPS细胞的培养上清中提取外泌体，培养上清没有经过超滤浓缩。

　　提取外泌体时分别进行了以下两项操作，"往各个培养上清中添加/不添加EV-Save™（超滤用）"，"往MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS附带的'Exosome Elution Buffer'中添加/不添加EV-Save™（超滤用）"。

　　使用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒（抗小鼠IgG POD）（产品编号： 297-79201）对外泌体的CD63信号进行定量，并将其信号强度作为反应为外泌体量的标记。

　　假设移液前的CD63信号为100%，相对值见图表。

－/－: 培养上清没有添加EV-Save™（超滤用）/ "Exosome Elution Buffer"没有添加EV-Save™（超滤用）

－/＋: 培养上清没有添加EV-Save™（超滤用）/ "Exosome Elution Buffer"添加了EV-Save™（超滤用）

＋/＋: 培养上清添加了EV-Save™（超滤用）/ "Exosome Elution Buffer"添加了EV-Save™（超滤用）

【结果】

　　添加了EV-Save™（超滤用） 的TIG3的细胞培养上清及MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS附带的"Exosome Elution Buffer"实验组，比两者都没添加的实验组，外泌体的回收量增加了大约20%。

■ 超滤时EV-Save™（超滤用）的吸附抑制效果~人iPS细胞~

　　接下来验证人iPS细胞培养上清在进行超滤（Vivaspin 20，100K）浓缩前后，是否有发生外泌体损耗。

　　超滤后，培养上清中的外泌体会损耗大约60%，但添加EV-Save™（超滤用） 后，几乎能完全抑制超滤引起的外泌体损耗。

■ EV-Save™ 对细胞的毒性评估~人iPS细胞~

　　接着，使用人iPS细胞检验EV-Save™ （超滤用）的细胞毒性。将添加了1/100 EV-Save™ （超滤用）的达到1/5培养基量的TBS溶液加入培养基。人iPS细胞在配制好的培养基中培养3日，然后测量活细细胞数。

　　EV-Save™ （超滤用）几乎不影响人iPS细胞的增殖。

◆EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（动物体内实验用）　NEW！

■ EV-Save™（动物体内实验用）与EV-Save™ 的比较

■ 应用数据

· 外泌体的冷冻保护效果

添加EV-Save™（超滤用） 和EV-Save™（动物体内实验用）至PS亲和法纯化的COLO201细胞来源外泌体中，冻融1次或3次。然后用PS Capture™ Exosome ELISA Kit（链霉亲和素HRP）（产品编号：298-80601）检测样品管内的外泌体量。

结果显示，在不添加EV-Save™（超滤用）的情况下，冻融会使外泌体标记CD9信号下降，但添加EV-Save™（超滤用）和EV-Save™（动物体内实验用）后可抑制CD9信号下降。

· 抑制外泌体的吸附作用

添加EV-Save™（超滤用）和EV-Save™（动物体内实验用）至PS亲和法纯化的COLO201细胞来源外泌体中，在4℃下存放16 h。然后，使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit（链霉亲和素HRP）（产品编号：298-80601）检测样品管内的外泌体量。

结果显示，在不添加EV-Save™（超滤用）的情况下，外泌体量（CD9信号）下降，但添加EV-Save™（超滤用）和EV-Save™（动物体内实验用）后可抑制下降。

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EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂

参考文献