EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（TFF用）

切向流过滤法（TFF）作为一种高效的方法被用于细胞外囊泡（EV）浓缩和缓冲液置换。TFF通过将样品与滤膜平行流动来防止样品在滤膜上堆积，尽可能地减少样品损失。另外，EV等易吸附的样品由于膜吸附和过滤操作中的物理应力，回收率可能会降低。

EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（TFF用）旨在通过减轻TFF处理过程中的物理应力以及膜的吸附来提高EV回收率。使用本产品可实现高效、稳定的EV回收。

◆特点

●　抑制使用TFF进行EV纯化、浓缩和缓冲液置换过程中的EV损伤和EV对滤膜的吸附

●　操作简便，仅需向样品添加本产品和平衡缓冲液

●　本产品可防止因吸附于试管而导致的EV损失，并防止冻融损伤，过滤后(TFF)的EV溶液可以直接保存。

   （注：仅在缓冲液交换过程中添加本产品才能达到此效果）

◆推荐样品

●　纯化的EV

●　细胞培养上清

在血清、血浆和干扰物质含量高的样品中，抗吸附效果可能会降低

◆推荐TFF模块

MicroKros mPES 100 kDa (Repligen，厂家编号：C02-E100-05-N)

已确认可使用以下模块：

●　Pellicon XL UF Mod Biomax 100 kD 0.005m2 (Millipore)

●　Single-Use Discover 12” 100 kD 0.5 mm (Sartorius)

请注意，以下模块无法使用：

●　Minimate TFF Capsules with Omega Membrane - 100K (Cytiva)

●　TFF-Easy - tangential flow filtration EV concentrator (HansaBio)

◆数据

性能数据

▼提高缓冲液置换过程中纯化的 EV 的回收率

使用MassivEV™ EV Purification Column PS（产品编号：131-19491）从骨髓来源间充质干细胞（BMMSC）和脂肪组织来源间充质干细胞（ADMSC）的细胞培养上清中纯化EV。然后，使用Repligen的TFF系统，更换添加了本产品1/100量的HBS 缓冲液进行缓冲液交换。使用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒（链霉亲和素HRP）（产品编号：298-80601，检测抗体使用抗CD63或抗CD81抗体），评估缓冲液置换后的EV回收率。，EV粒子粒径分布则使用Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)进行检测。

（1）ELISA

【结果】

通过添加本产品，可以观察到基于TFF置换缓冲液中EV的回收率升高。

（2）NTA

【结果】

添加本产品后，纯化EV粒子粒径分布并未观察到明显变化。

▼提高基于TFF从细胞培养上清中纯化EV的回收率

使用TFF将细胞培养上清浓缩20倍，然后用100倍的缓冲液进行置换。将本品以1/100的量添加至细胞培养上清液和置换缓冲液中。使用CD63和CD81的ELISA试剂盒检测EV的回收率，使用Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)检测EV粒子粒径分布。

(1) ELISA

【结果】

通过添加本产品，可以观察到从细胞上清中纯化EV的回收率有所提升。

(2) NTA

【结果】

添加本产品后， EV的粒子粒径分布并未观察到明显变化。

▼纯化的EV吸附抑制和冷冻保护效果

（1）吸附抑制效果

分别将EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（产品编号：058-09261，下文写作“常规产品”）和EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂（TFF用）（下文写作“本产品”）以1/100的量添加至纯化的EV溶液中。之后转移至微管，保存48小时。使用CD63和CD81的ELISA试剂盒检测EV的含量。

（2）冷冻保护效果

使用TFF，从骨髓来源间充质干细胞（BMMSC）的培养上清中纯化EV。将本产品以1/100的量添加至纯化的EV溶液中，然后进行3次冻融（从-20℃至室温）。使用CD63和CD81的ELISA试剂盒检测冻融前后的EV含量。

【结果】

本产品具有吸附抑制效果和冷冻保护效果，是EV保存的理想选择。

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◆FAQ

Q1：这个产品测试过哪些细胞培养基上清类型？

A1：FUJIFILM Wako从以下细胞培养上清中纯化EV并通过TFF进行缓冲液交换，确认到了本产品的吸附抑制效果：

●　骨髓来源间充质干细胞（BMMSC）

●　脂肪细胞来源间充质干细胞（ADMSC）

●　HEK293

Q2：除HBS缓冲液之外，其他的缓冲液也有吸附抑制效果吗？

A2：在FUJIFILM Wako的产品中，除了HBS缓冲液以外，已确认PBS缓冲液也表现出了同样的吸附抑制效果。