EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(TFF用)
切向流过滤法(TFF)作为一种高效的方法被用于细胞外囊泡(EV)浓缩和缓冲液置换。TFF通过将样品与滤膜平行流动来防止样品在滤膜上堆积,尽可能地减少样品损失。另外,EV等而易吸附的样品由于膜吸附和过滤操作中的物理应力,回收率可能会降低。
EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(TFF用)旨在通过减轻TFF处理过程中的物理应力以及膜的吸附来提高EV回收率。使用本产品可实现高效、稳定的EV回收。
◆特点
● 抑制使用TFF进行EV纯化、浓缩和缓冲液置换过程中的EV损伤和EV对滤膜的吸附
● 操作简便,仅需向样品添加本产品和平衡缓冲液
● 本产品可防止因吸附于试管而导致的EV损失,并防止冻融损伤,过滤后(TFF)的EV溶液可以直接保存。
(注:仅在缓冲液交换过程中添加本产品才能达到此效果)
◆推荐样品
● 纯化的EV
● 细胞培养上清
在血清、血浆和干扰物质含量高的样品中,抗吸附效果可能会降低
◆推荐TFF模块
MicroKros mPES 100 kDa (Repligen,厂家编号:C02-E100-05-N)
已确认可使用以下模块:
● Pellicon XL UF Mod Biomax 100 kD 0.005m2 (Millipore)
● Single-Use Discover 12” 100 kD 0.5 mm (Sartorius)
请注意,以下模块无法使用:
● Minimate TFF Capsules with Omega Membrane - 100K (Cytiva)
● TFF-Easy - tangential flow filtration EV concentrator (HansaBio)
◆数据
性能数据
▼提高缓冲液置换过程中纯化的 EV 的回收率
使用MassivEV™ EV Purification Column PS(产品编号:131-19491)从骨髓来源间充质干细胞(BMMSC)和脂肪组织来源间充质干细胞(ADMSC)的细胞培养上清中纯化EV。然后,使用Repligen的TFF系统,更换添加了本产品1/100量的HBS 缓冲液进行缓冲液交换。使用PS Capture™ 外泌体ELISA试剂盒(链霉亲和素HRP)(产品编号:298-80601,检测抗体使用抗CD63或抗CD81抗体),评估缓冲液置换后的EV回收率。,EV粒子粒径分布则使用Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)进行检测。
(1)ELISA
【结果】
通过添加本产品,可以观察到基于TFF置换缓冲液中EV的回收率升高。
(2)NTA
Input
未添加本产品
添加本产品
【结果】
添加本产品后,纯化EV粒子粒径分布并未观察到明显变化。
▼提高基于TFF从细胞培养上清中纯化EV的回收率
使用TFF将细胞培养上清浓缩20倍,然后用100倍的缓冲液进行置换。将本品以1/100的量添加至细胞培养上清液和置换缓冲液中。使用CD63和CD81的ELISA试剂盒检测EV的回收率,使用Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)检测EV粒子粒径分布。
(1) ELISA
【结果】
通过添加本产品,可以观察到从细胞上清中纯化EV的回收率有所提升。
(2) NTA
未添加本产品
添加本产品
【结果】
添加本产品后, EV的粒子粒径分布并未观察到明显变化。
▼纯化的EV吸附抑制和冷冻保护效果
(1)吸附抑制效果
分别将EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(产品编号:058-09261,下文写作“常规产品”)和EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(TFF用)(下文写作“本产品”)以1/100的量添加至纯化的EV溶液中。之后转移至微管,保存48小时。使用CD63和CD81的ELISA试剂盒检测EV的含量。
(2)冷冻保护效果
使用TFF,从骨髓来源间充质干细胞(BMMSC)的培养上清中纯化EV。将本产品以1/100的量添加至纯化的EV溶液中,然后进行3次冻融(从-20℃至室温)。使用CD63和CD81的ELISA试剂盒检测冻融前后的EV含量。
【结果】
本产品具有吸附抑制效果和冷冻保护效果,是EV保存的理想选择。
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◆FAQ
Q1:这个产品测试过哪些细胞培养基上清类型?
A1:FUJIFILM Wako从以下细胞培养上清中纯化EV并通过TFF进行缓冲液交换,确认到了本产品的吸附抑制效果:
● 骨髓来源间充质干细胞(BMMSC)
● 脂肪细胞来源间充质干细胞(ADMSC)
● HEK293
Q2:除HBS缓冲液之外,其他的缓冲液也有吸附抑制效果吗?
A2:在FUJIFILM Wako的产品中,除了HBS缓冲液以外,已确认PBS缓冲液也表现出了同样的吸附抑制效果。
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
059-09671 | EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent for TFF EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(TFF用) |
20 mL |
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
058-09261 | EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(超滤用) |
1 mL | 基因研究用 | |
050-09461 | EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent for in vivo EV-Save™ 细胞外囊泡保存稳定剂(动物体内实验用) |
1 mL | 基因研究用 |
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