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生物制药残留DNA提取试剂盒（碘化钠法）

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生物制药残留DNA提取试剂盒（碘化钠法）

残留DNA提取试剂盒遵照中国药典记载的碘化钠法，适用于疫苗和治疗用生物制品所含宿主细胞残余DNA的提取。

残留DNA提取试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA，回收率较高。DNA的提取操作时间为60-90 min。提取的DNA可以通过qPCR进行定量。

◆特点

●　高回收率回收微量DNA（100-1,000 fg）

●　无需更换试管（全程仅使用1根试管）

●　整个提取过程仅需60-90 min

●　提供高浓度蛋白样品的前处理实验方案

●　回收后的DNA可通过qPCR、Threshold Assay(Molecular Devices)进行定量

●　采用碘化钠法

◆原理

1.　使样品中的蛋白质和脂质溶于碘化钠和月桂酰肌氨酸钠；

2.　异丙醇与糖原选择性地共沉淀DNA。

◆标准步骤

◆应用实例

DNA spiking test（加标回收实验）

DNA Extractor™ Kit可以高产量提取残留DNA，甚至少量残留DNA。

◆抗体药物适用性研究

从高蛋白溶液中提取DNA

使用不同浓度的IgG溶液检测CHO来源DNA的加标回收率。

方法

1）向不同浓度的IgG溶液(10-100 mg/mL)中添加2 pg/mL CHO来源DNA。

2）按照本产品说明书记载的实验方案提取DNA。

● 提取实验方案：Protocol#2

● 样品前处理：蛋白浓度超过2 mg/mL时实施的前处理方案（Proteinase K处理）

3）通过qPCR法计算提取的CHO来源DNA的回收率。

结果

不同蛋白浓度溶液的Cq值

Sample	Input	蛋白浓度 (mg/mL)
Sample	Input	10	20	40	60	80	100
Cq	31.596	31.566	31.351	31.726	31.502	31.282	31.658
	31.599	31.608	31.774	31.787	－	31.485	31.66
	31.338	31.861	31.5	31.85	31.56	31.369	－
Average Cq	31.511	31.678	31.542	31.788	31.531	31.379	31.659
Difference of Cq	0	-0.167	0.136	-0.246	0.257	0.152	-0.28
Power	1	0.891	1.099	0.843	1.195	1.111	0.824
Recovery Rate (%)	100	89.1	109.9	84.3	119.5	111.1	82.4

不同蛋白浓度溶液的CHO来源DNA回收率

不同蛋白浓度溶液的CHO来源DNA回收率拷贝.jpg

结果显示，即使蛋白浓度高达100 mg/mL，也能高回收率提取CHO来源DNA。

从抗体药物模拟溶液中提取 DNA

检测抗体药物常用的Buffer及添加剂制备的IgG溶液中的 CHO来源DNA的加标回收率。

方法

1）向抗体药物中常用的Buffer组成（表1.①-⑥）及添加剂溶液中添加20 mg/mL的IgG蛋白，制备不同的抗体药物模拟溶液。向不同溶液中添加

1） 20 pg/mL CHO来源DNA。

2）根据本产品说明书记载的实验方案提取DNA。

● 提取实验方案：Protocol#2

● 样品前处理：蛋白浓度超过2 mg/mL时实施的前处理方案（Proteinase K处理）

3）通过qPCR法计算提取的CHO来源DNA的回收率。

表1 Buffer组成

No.	Buffer组成
①	10 mM PB pH 6.0, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA
②	10 mM PB pH 7.4, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA
③	50 mM NaOAc pH 5.2, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA
④	10 mM PB pH 6.0, 2 mM EDTA
⑤	10 mM PB pH 7.4, 2 mM EDTA
⑥	50 mM NaOAc pH 5.2, 2 mM EDTA

表2 添加剂溶液

Buffer: 10 mM PB pH 6.0, 0.15 M NaCl, 2 mM EDTA

No.	添加剂（浓度）
①	Sucrose (10 w/v%)
②	Trehalose Dihydrate (10 w/v%)
③	D(-)-Mannitol (10 w/v%)
④	D(-)-Sorbitol (10 w/v%)
⑤	D(+)-Maltose Monohydrate (10 w/v%)
⑥	L(+)-Arginine Hydrochloride (1 w/v%)
⑦	L‐Histidine (1 w/v%)
⑧	Glycine (1 w/v%)
⑨	Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monooleate (Tween80) (0.5 v/v%)
⑩	Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monolaurate (Tween20) (0.5 v/v%)

结果

不同Buffer的Cq值

Sample	Input	Buffer
Sample	Input	1	2	3	4	5	6
Cq	31.473	31.693	31.544	31.218	31.058	31.595	31.181
	31.364	31.196	30.973	31.568	31.085	31.343	31.112
	31.045	31.53	31.787	31.315	30.942	31.452	31.558
Average Cq	31.294	31.473	31.435	31.367	31.028	31.463	31.284
Difference of Cq	0	-0.179	-0.141	-0.073	0.266	-0.169	0.01
Power	1	0.883	0.907	0.951	1.203	0.89	1.007
Recovery Rate (%)	100	88.3	90.7	95.1	120.3	89	100.7

不同Buffer的CHO来源DNA回收率

不同Buffer的CHO来源DNA回收率.png

不同添加剂溶液的Cq值

Sample	Input	添加剂溶液
Sample	Input	①	②	③	④	⑤	⑥	⑦	⑧	⑨	⑩
Cq	31.473	31.826	31.327	30.907	31.143	31.071	31.525	－	31.525	31.013	31.086
	31.364	31.194	30.991	31.759	31.103	31.279	31.068	31.442	31.203	31.34	30.87
	31.045	30.703	－	31.009	－	30.978	31.225	31.479	30.757	31.02	31.02
Average Cq	31.294	31.241	31.159	31.225	31.123	31.109	31.273	31.461	31.162	31.124	30.992
Difference of Cq	0	0.053	0.135	0.069	0.171	0.185	0.021	-0.167	0.132	0.17	0.302
Power	1	1.037	1.098	1.049	1.126	1.137	1.015	0.891	1.096	1.125	1.233
Recovery Rate (%)	100	103.7	109.8	104.9	112.6	113.7	101.5	89.1	109.6	112.5	123.3

不同添加物溶液的CHO来源DNA回收率

结果显示，即使含有不同Buffer组成和添加剂的IgG溶液也能高回收率提取CHO来源DNA。

◆试剂盒构成

产品编号	内容物	内容量
299-81111	碘化钠溶液, CP	26 mL
296-81121	月桂酰肌氨酸钠, CP	1.2 mL
293-81131	洗净液A, CP	42 mL
290-81141	洗净液B, CP	40 mL×2
297-81151	糖原溶液, CP	0.1 mL

备注：每种成分不单独出售

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点击链接查看DNA Extractor Kit——2020中国药典版碘化钠法操作步骤图文版

相关资料

残留DNA检测试剂盒套装

[1]	Ikeda, Y., Iwakiri, S., & Yoshimori, T. (2009). Development and characterization of a novel host cell DNA assay using ultra-sensitive fluorescent nucleic acid stain "PicoGreen". Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 49(4), 997-1002
[2]	Cai, H., Gu, X., Scanlan, M. S., & Lively, C. R. (2011). Development of a quantitative PCR assay for residual mouse DNA and comparison of four sample purification methods for DNA isolation. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 55(1), 71-77.
[3]	牛冬云, 连炜, 何静, 邬智刚, & 柯潇. (2013). 康柏西普制品中 CHO 细胞 DNA 残留量的检测. 中国生物制品学杂志, 26(7), 1023.
[4]	周朝东, 黄哲, & 尉然. (2016). 荧光定量pcr法测定重组人干扰素α2b原液中宿主dna的残留%determination of residual host cell dna in recombinant human interferonα2 b substances by quantitative pcr. 中国生化药物杂志, 036(004), 193-195.
[5]	周朝东, 苏喆, & 黄哲甦. (2017). 荧光定量pcr法测定重组人/门冬胰岛素原料中宿主dna的残留量%determination of residual host cell dna in recombinant human/aspart insulin substances by quantitative pcr. 药物分析杂志, 037(003), 477-481.
[6]	任玉莹, 刘建凯, 尹珊珊, 徐颖之, 邓海清, & 殷建齐等. (2017). Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗宿主细胞dna残留量检测方法研究. 国际生物制品学杂志(40), 124.

产品列表

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
292-81101	残留DNA提取试剂盒（碘化钠法） DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method (Sodium Iodide Method)	50 tests	-	-

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级	备注
290-85301	QCdetect(TM) Residual DNA Detection Kit for E. coli QCdetect™ 残留DNA检测试剂盒，大肠杆菌用	100 tests	-	-
294-85201	QCdetect(TM) Residual DNA Detection Kit for CHO cells QCdetect™ 残留DNA检测试剂盒，CHO细胞用	100 tests	-	-