Phos-tag™ Biotin
无特异性磷酸化抗体时的理想选择！
Phos-tag™ Biotin 是与生物素结合的 Phos-tag™，可用于免疫印迹法检测磷酸化蛋白。Phos-tag™ Biotin BTL-104 和 BTL-105 可灵敏检测 PVDF 膜上的磷酸化蛋白。
◆原理
◆优点、特色
● 无辐射。
● 无需 PVDF 膜的封闭处理。
● Phos-tag™ 的特异性结合与氨基酸种类、序列无关。
● 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作。
● Phos-tag™ BTL 母液可稳定保存至少６个月。
● 实验流程与使用 HRP 标记抗体相类似。
※BTL-104、BTL-105、BTL-111 三者连接链（Linker）长度不一，但使用上基本相同。BTL-111 灵敏度更高。
◆案例、应用
【使用例：在 PVDF 膜上检测磷酸化蛋白】
转印在 PVDF 膜上的磷酸化蛋白可精确检测到 ng 级水平，没有检测到相应的去磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白的信号斑点。
免疫印迹检测磷酸化蛋白——Phos-tag ™ 生物素。
摘自 Eiji Kinoshita ,et al., Mol.Cel.Proteomics (2006) 5: 749
【使用例：Phos-tag™ 生物素在检测蛋白激酶活性的微阵列（生物芯片）中的运用】
蛋白激酶是很多疾病诊断和药物筛选的靶标。近来有科研人员研发了一种检测胞内蛋白激酶活性的高灵敏度多肽微阵列。用微阵列点样机点样 2 nL 体积的底物多肽溶液，使多肽固定在戊二醛预修饰的高氨基末端载玻片。
当多肽经细胞裂解液磷酸化后，用荧光标记的抗 phosphotyrosine（磷酸化酪氨酸）抗体检测酪氨酸激酶，或者用 Phos-tag™ 生物素，接着用荧光标记的亲和素检测丝氨酸或者苏氨酸激酶。之后用自动微阵列扫描仪检测荧光信号。多肽微阵列系统包括简单的多肽固定，只需少量样品，具有高密度阵列。重要的是，检测细胞裂解液蛋白激酶活性的灵敏度高。
因此多肽微阵列系统可用于高通量筛选细胞内激酶活性，可用于药物筛选和疾病诊断。
Phos-tag™ 系列
磷酸化蛋白新方法！
Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot 检测（Phos-tag™ Biotin）、蛋白纯化 （Phos-tag™Agarose）及质谱分析 MALDI-TOF/MS （Phos-tag™ Mass Analytical Kit）。
◆Phos-tag™ 的基本结构
◆特点
与 -2 价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子
在 pH 5-8 的生理环境下生成稳定的复合物
◆原理
◆相关应用
◆相关产品
产品名称 | 用 途 |
Phos-tag™ Acrylamide | 分离：SDS - PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白 |
SuperSep Phos-tag™ | 分离：预制胶中含有50 μM Phos-tag™ Acrylamide |
Phos-tag™ Biotin | 检测：代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体 |
Phos-tag™ Agarose | 纯化：通用柱层析，纯化磷酸化蛋白 |
Phos-tag™ Mass Analytical Kit | 分析：用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的检测灵敏度 |
phos-tag™由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。
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Q： BTL-104 和 BTL-111 的区别？
A： BTL-104 的溶解度更高，BTL-111 的灵敏度更高。
Q： 检测灵敏度达到什么水平？
A： 可达到 ng 级别。需要使用化学发光试剂，比如 ImmunoStar LD（Wako）。
Q： 使用该产品还需要别的试剂或则耗材吗？
A： 硝酸锌（Zn(NO3)2）溶液和亲和素标记的 HRP（(GE Healthcare Bio-Sciences: RPN1231)。制备 Phos-tag™ 生物素与亲和素标记的 HRP
偶联物时需要使用离心过滤装置（NMWL = 30,000, Nanosep™ 30K, Pall Life Sciences）。
Q： Phos-tag™生物素使用的次数？
A： 主要决定于使用次数和使用量，以下实验次数仅作参考：
BTL-104：130~1300次；
BTL-111 1 mM 溶液：10~100次。
Q： 可测定磷酸化蛋白？
A： 根据条带的浓度，可进行半定量分析。
Q： 能够确定结合磷酸化基团的数目？
A： 不能。
Q： 能否剥除（strip）Phos-tag™生物素？
A： 可以。与含有 62.5 mM Tris-HCl（pH6.8），２%（w/v）SDS 和 0.1M ２-巯基乙醇溶液 混合后，震荡15分钟。用 1×TBS-T 洗涤３次，
每次 10 分钟。
Q： 推荐使用哪种膜？
A： 建议使用 PVDF 膜。
Q： 使用 Phos-tag™ 生物素是否需要封闭？
A： 不需要。封闭会降低检测灵敏度。
【参考文献】
| 1. | "Phosphate-binding tag: A new tool to visualize phosphorylated proteins", E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike, Mol. Cell. Proteomics, 2006, 5, 749-757. |
| 2. | "Detection and Quantification of On-Chip Phosphorylated Peptides by Surface Plasmon Resonance Imaging Techniques Using a Phosphate Capture Molecule", K. Inamori, M. Kyo, Y. Nishiya, Y. Inoue, T. Sonoda, E. Kinoshita, T. Koike, and Y. Katayama, Anal. Chem., 2006, 77, 3979-3985. |
| 3. | "Phos-tagを用いたりん酸化タンパク質の検出法 ①ビオチン化Phos-tagを用いたケミルミ検出", 木下英司, 木下恵美子, 小池透, 実験医学, 2006, 24, 2523-2529. |
| 4. | "Identification on Membrane and Characterization of Phosphoproteins Using an Alkoxide-Bridged Dinuclear Metal Complex as a Phosphate-Binding Tag Molecule", T. Nakanishi, E. Ando, M. Furuta, E. Kinoshita, E. Kikuta-Kinoshita, T. Koike, S. Tsunasawa, and O. Nishimura, J. Biomol. Tech., 2007, 18, 278-286. |
| 5. | Wang, H. , Qi, C. , He, W. , Wang, M. , Jiang, W. , & Yin, H. , et al. (2018). A sensitive photoelectrochemical immunoassay of n(6)-methyladenosine based on dual-signal amplification strategy: ru doped in sio2 nanosphere and carboxylated g-c3n4. Biosensors & Bioelectronics, 99, 281.【用于m6A检测】 |
| 6. | Li B , Yin H , Zhou Y , et al. Photoelectrochemical detection of miRNA-319a in rice leaf responding to phytohormones treatment based on CuO-CuWO 4, and rolling circle amplification[J]. Sensors and Actuators B: Chemical, 2017:S0925400517316295. |
| 7. | Emiko, K. K., Eiji, K., & Tohru, K. (2016). Phosphopeptide detection with biotin-labeled phos-tag. Methods in Molecular Biology, 1355, 17. |
| 8. | Induction of autophagy-dependent apoptosis in cancer cells through activation of ER stress: an uncovered anti-cancer mechanism by anti-alcoholism drug disulfiram.Am J Cancer Res. 2019 Jun 1;9(6):1266-1281. eCollection 2019. |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 301-93531 | Phos-tag™ Biotin BTL-104 Phos-tag 生物素 |
10 mg | - | - |
| 308-97201 | Phos-tag™ Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution Phos-tag 生物素1mM水溶液 |
0.1 mL | - | - |
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