RNA Quantification Kit for Purified EV
纯化外泌体RNA定量试剂盒
外泌体等细胞外囊泡（EV：Extracellular Vesicle）含有各种类型RNA，如mRNA和miRNA，这些RNA在生物体内发挥着重要作用，因此目前许多研究利用RNA作为疾病的生物标志物。通过新一代测序（NGS）和基因芯片技术可以全面分析外泌体内的RNA，但在分析前需要先检测RNA的含量。FUJIFILM Wako推出的RNA定量试剂盒可检测纯化EV中的微量RNA。
本产品用于定量检测从细胞培养上清液、血清或血浆中纯化的外泌体等细胞外囊泡（EV：Extracellular Vesicle）的总RNA。试剂盒使用RNA结合荧光染料，可高灵敏定量检测溶液中的微量RNA。在EV研究中，新一代测序（NGS）或基因芯片分析前处理步骤中需要定量检测RNA时，推荐使用本产品。
◆特点
● 适用于少量（1-20 μL）RNA样品
● 高灵敏度，定量范围：0.01-10 ng/μL
● 检测时间短，反应时间：5分钟
◆样本类型
纯化EV溶液
EV分离与纯化推荐使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (产品编号： 290-84103)
RNA提取与纯化推荐使用microRNA Extractor® Kit for Purified-EV (产品编号：294-84601)。
◆试剂盒组成
1,000 tests | |
RNA标准品 | 100 μL |
荧光试剂 | 100 μL |
稀释液（20×） | 2.5 mL |
◆操作流程
1. 试剂制备
1×稀释液：将无核酸酶的蒸馏水按1∶20的比例添加至稀释液（20×），并充分混合。
荧光溶液：将1×稀释液按1∶2000的比例添加至荧光试剂，并充分混合（用铝箔等物品避光）。
RNA标准溶液： 按下表所示梯度稀释RNA标准品，制备各种浓度的RNA溶液。
RNA标准浓度 (ng/μL) | RNA标准溶液的体积 | 1×稀释液体积 |
100 | RNA标准原液：100 μL | - |
10 | 100 ng/μL溶液：10 μL | 90 μL |
5 | 10 ng/μL溶液：50 μL | 50 μL |
2.5 | 5 ng/μL溶液：50 μL | 50 μL |
1.25 | 2.5 ng/μL溶液：50 μL | 50 μL |
0.625 | 1.25 ng/μL溶液：50 μL | 50 μL |
0.3125 | 0.625 ng/μL溶液：50 μL | 50 μL |
0.15625 | 0.3125 ng/μL溶液：50 μL | 50 μL |
上述稀释比例仅供参考，请根据样品调整RNA标准溶液的浓度。
例：在定量检测COLO201细胞来源EV中提取的RNA时，推荐根据下表进行梯度稀释。
RNA标准品浓度 (ng/μL) | RNA标准溶液的体积 | 1×稀释液体积 |
100 | RNA标准品原液：100 μL | - |
1 | 100 ng/μL溶液：2 μL | 198 μL |
0.5 | 10 ng/μL溶液：50 μL | 50 μL |
0.25 | 5 ng/μL溶液：50 μL | 50 μL |
0.125 | 2.5 ng/μL溶液：50 μL | 50 μL |
0.0625 | 1.25 ng/μL溶液：50 μL | 50 μL |
0.03125 | 0.625 ng/μL溶液：50 μL | 50 μL |
0.015625 | 0.3125 ng/μL溶液：50 μL | 50 μL |
2.RNA定量检测
2-1. 向96孔板的各孔内分注200 μL荧光试剂溶液。
2-2. 向标准品孔中分注10 μL经稀释制备的各浓度的RNA标准溶液。
空白对照中各分注10 μL 1×稀释液。
2-3. 向样本检测孔中各分注1-20 μL预处理RNA样本。
2-4. 使用微孔板振荡器或移液枪将各孔混合液混匀
2-5. 避光，室温孵育5分钟
2-6. 使用酶标仪检测荧光（激发光波长492 nm，荧光波长540 nm）
<孔板布局示例：定量检测COLO201细胞来源EV中提取的RNA>
◆应用数据
▼ 定量检测纯化EV中的RNA
使用 MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 (产品编号： 290-84103)，从脐带来源间充质干细胞的细胞培养上清液中分离EV，并使用microRNA Extractor® Kit for Purified-EV (产品编号：294-84601) 提取总RNA。然后取5 μL提取的RNA溶液，使用本产品定量检测RNA量。
（1）标准曲线
（2）RNA检测值
实测值 (RFU ⊿Blank) | RNA量 (ng) |
4,239 | 0.977 |
【结果】
使用本产品可以定量检测EV中的RNA。
FAQ
◆关于试剂盒
Q：使用本产品检测时需要什么耗材和设备？
A：● 无核酸酶水
● 96孔板
● 微量移液枪
● 微量移液枪头
● 微孔板振荡器（推荐使用）
● 96孔板酶标仪（荧光检测用）
Q：用1×稀释液制备的荧光溶液的使用期限是多久？
A：制备后的荧光溶液可在室温（25°C），避光条件下2-3小时内使用。超过时间后的试剂稳定性未确认。
◆关于应用
Q：除了可定量检测纯化EV的RNA以外，还能定量检测其他来源的RNA吗？
A：FUJIFILM Wako无相关记录，理论上也可定量检测其他RNA。
◆问题排除
Q：使用本产品检测的RNA浓度与260 nm吸光法检测的RNA浓度存在差异。
A：吸光度（260nm）检测时，会混入RNA以外的核酸（dsDNA，ssDNA等），这些核酸会影响检测值。
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 297-97901 | RNA Quantification Kit for Purified EV 纯化EV用RNA定量试剂盒 |
1000 tests | 基因研究用 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 294-84101 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2 |
2 tests | 基因研究用 | |
| 290-84103 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2 |
10 tests | 基因研究用 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 293-96401 | MagCapture™ EV Isolation Kit PS for HTS HTS用MagCapture™ EV提取试剂盒PS |
96 tests | 基因研究用 |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 备注 |
| 294-84601 | microRNA Extractor(R) Kit for Purified EV 纯化细胞外囊泡（EV）用miRNA提取试剂盒 |
20 tests | 基因研究用 |
| 免责声明 |
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