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CYTO-ID® 自噬检测试剂盒
CYTO-ID® Autophagy detection kit

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  CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 使用新型染料检测自噬小泡和监控活细胞自噬流,选择性标记积累的自噬小泡。染料已通过优化,不染溶酶体,在自噬前体、自噬体和自噬溶酶体里呈现出明亮的荧光。该试剂盒提供了一种无需细胞转染,可以在活细胞中监控细胞自噬的快速定量方法。

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CYTO-ID® Autophagy Detection Kit

◆特点


● 无需转染,定量监测活细胞中的自噬情况

● 免去 LC3-GFP 转染所需的时间和精力以及转染效率的验证

● 含有特殊基团的专利染料选择性地染色自噬小泡

● 试剂盒中包含已知活性的自噬抑制剂与激活剂

● 快速量化原生异质性细胞群中的自噬

● 选择性地全方位染色,可检测和区分自噬流(autophagic flux)和自噬溶酶体的积累

● 不染溶酶体,减少其他染料的背景干扰

 便于高通量筛选自噬激活剂和抑制剂


◆原理


  该产品所用探针是阳离子两亲性示踪剂(CAT)染料,以类似诱导磷脂药物的方式迅速进入到细胞中。染料的功能基团能够选择性标记与自噬通路相关的小泡,而不会在溶酶体中聚集。


胞内物质被扩大的膜囊包裹,吞噬泡形成双层膜囊泡,成为自噬体。自噬体外膜随后与溶酶体融合,和内部物质被自噬性溶酶体降解。自噬的各种调节因子也被描绘于图中。

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自噬原理图



◆应用


省时省力,无需转染即可自快速全面的标记自噬小泡


为了演示 CYTO-ID® Green detection reagent 的优势,先用 RFP-LC3 表达载体转染 HeLa 细胞,10 μM 的 Tamoxifen 处理过夜,然后用 CYTO-ID® 绿色检测试剂染色。LC3 转染法需要过夜,而 CYTO-ID® 绿色检测试剂的方法在15-30分钟内标记细胞达100%。图A:绿信号显示自噬小泡的 CYTO-ID® 绿染;图B:成功转染细胞的 RFP-LC3 表达(红色);图C:自噬体的特异性标记 LC3,与 CYTO-ID® 绿色染料标记的小泡共定位的复合图像。

的发放

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无转染的自噬检测


Hela细胞进行饥饿与恢复,然后使用 CYTO-ID® Green detection reagent 标记。染料可以明确检测和量化自噬及与自噬诱导相关的自噬小泡前体。图1A:稳定表达 GFP-LC3 的CHO细胞,结果显示对照组与饥饿的细胞群的相对较差的基线分离,自噬难以量化。图1B:CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 特异性标记 LC3 蛋白依赖的自噬小泡,免去转染操作。



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自噬积累和自噬流的可视化


可用荧光显微镜观察CYTO-ID® 自噬绿色染料检测的自噬液泡积累和自噬流。Hela细胞用以下试剂进行模拟诱导,0.2% DMSO(A)和100 μM  Clonidine hydrochloride(B)进行诱导,5 μM Loperamide hydrochloride 和 1 μM PP242 hydrate(D)在37°C诱导12小时。处理后,细胞在37℃下用CYTO-ID® Green Detection reagent 孵育10分钟,再用分析缓冲液清洗。细胞核被 Hoechst 33342 染料复染为蓝色。



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避免非特异性溶酶体染色的背景干扰


相比其他 MDC 染色溶酶体检测,CYTO-ID® 绿色染料无溶酶体染色背景,CYTO-ID® Autophagy kit 无需紫外活细胞分析,在显微镜共标记应用中,与 Hoechst 染料兼容。



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使用流式细胞仪通过 CYTO-ID® Autophagy Detection 

Kit 分析自噬


对照组(红线峰值)无诱导,10 uM Tamoxifen(ALX-550-095)处理 Jurkat 细胞(白血病T细胞)(蓝线峰值)。处理18小时后,细胞结合 CYTO-ID® 绿色检测试剂,然后不经过流式细胞仪清洗,进行分析。结果通过直方图呈现。对照组细胞被染色,但荧光亮度低。实验组中,CYTO-ID® 绿色荧光信号增加约2倍,表明 Tamoxifen 处理能引起 Jurkat 细胞中自噬的增加。




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使用 mTOR 激酶抑制剂 Rapamycin 处理 HepG2 细胞孵育过夜,结果显示 CYTO-ID® 染色信号升高。


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CYTO-ID® 绿色染料大多与 RFP-LC3蛋白共定位。0.1 μM Rapamycin(典型自噬诱导剂)处理过夜,转染 Hela 细胞表达RFP-LC3。

A: CYTO-ID® Green 染色; B: RFP-LC3; C: 合成图像。



CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0



◆相关产品


产品编号

产品名称

规格

备注

应用

ENZ-51002-25

GFP-Certified® Apoptosis/Necrosis detection kit

细胞凋亡/坏死检测试剂盒

25 assays

多重检测,区分正常、早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞,与GFP和其他绿色荧光探针兼容。

FC,荧光显微镜,荧光检测

ENZ-51002-100

100 assays

ENZ-51021-K200

Nuclear-ID® Green

hromatin condensation detection kit

细胞核绿色染色体皱缩检测试剂盒

 

1 Kit

高渗透性的绿色荧光染色增强了细胞凋亡诱导染色质固缩。 

FC,荧光显微镜,荧光检测

ENZ-52406

NUCLEAR-ID® Red DNA stain

DNA染色试剂盒(红色荧光)

200 µL

细胞可渗透的DNA染色应用广泛。

≥93%(HPLC),FC,荧光检测

ENZ-CHM103-0200

Nuclear-ID® Blue 

DNA stain   (GFP-Certified® )

Nuclear ID® 蓝色DNA染色(GFP细胞系)

200 µL

细胞可渗透的DNA染色应用广泛。

≥93%(HPLC),FC,荧光检测

ENZ-51015-KP002

Lyso-ID® Red

cytotoxicity kit   (GFP-Certified® )

溶酶体细胞毒理检测试剂盒(红色荧光)

(绿色细胞系)

1 Kit

快速,定量和HTS-兼容的检测活细胞毒性试剂。

荧光显微镜,荧光检测

ENZ-51035-0025

PROTEOSTAT® Aggresome   etection kit

蛋白内稳态聚集体 检测 试剂盒

25 tests

Robust、定量的聚集小体用于神经退行性疾病,肝病和毒理学研究

FC,荧光显微镜,荧光检测

ENZ-51035-K100

100 tests

 


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
ENZ-51031-K200 Cyto-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID®自噬检测试剂盒 200 tests - -
ENZ-51031-0050 Cyto-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID®自噬检测试剂盒 50 tests - -

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