细胞死亡 M65 EpiDeath® ELISA 试剂盒
M65 EpiDeath® ELISA
◆原理
M65 EpiDeath® ELISA 检测新一代生物标记物角蛋白18。检测细胞培养上清，血清和血浆样品中可溶性的角蛋白18。 K18 的含量反应了所有上皮细胞的死亡情况，不管是由于凋亡还是坏死引起的死亡都可以检测到。
◆优点・特色
● 只特异性定量检测上皮细胞整体的死亡情况
● 检测更稳定，特异性更高。
● 夹心法 ELISA 检测，可拆卸的96孔板。试剂即开即用
● 肝脏疾病：检测肝脏疾病患者肝细胞总的死亡情况。可用肝脏疾病检测。
● 肿瘤：监测上皮细胞肿瘤经化疗后肿瘤细胞的死亡情况。
● 毒理学：临床评估不同药物对肝脏细胞的毒性。
细胞凋亡或者坏死引起细胞死亡。细胞死亡的模式取决于刺激的类型 (比如：细胞毒素和化疗后的肿瘤，或者肝脏损伤)和组织类型（比如：肿瘤）。M30 Apoptosense ELISA 和 M65 EpiDeath ELISA 配套使用不仅定量检测细胞死亡的数量，而且确定细胞死亡的模式。（凋亡或者坏死）（样品包括血清，血浆和细胞培养上清）
肿瘤中使用的细胞毒素会尽量克服细胞凋亡过程中的紊乱状态，刺激细胞发生凋亡。不同的肿瘤细胞和细胞毒素也会引起细胞坏死。细胞内 ATP 产生缺失通常会引起细胞凋亡，但有时候也会导致细胞坏死（Leist et al., 1997）。
肝脏损伤可能会引起肝细胞的死亡– 凋亡和坏死均可导致。有报道称细胞死亡模式的确定可用于不同肝脏疾病的临床诊断，预判和评估治疗效果（Volkmann et al., 2006）。角蛋白18（K18）是由很多种上皮细胞高表达的细胞内蛋白。大多数 K18 分子在细胞内是非可溶性的，但也报道有可溶性K18池（Chou et al., 1993）。细胞死亡期间，细胞内 K18 会释放到细胞外。检测细胞外可溶性的 K18 可反映上皮细胞的死亡情况 “过程和原因”（由细胞凋亡和细胞坏死引起）（Kramer et al., 2004）。K18 在细胞凋亡期间被 caspase 催化发生水解， caspase-cleaved 片段释放到细胞外。因此细胞外的 caspase-cleaved K18（ccK18）浓度反映了细胞凋亡的数量。而且 M30：M65 比代表了总细胞死亡中细胞凋亡的比例（Kramer et al., 2004）。
M65 EpiDeath® ELISA 使用两种 IgG 型的 K18 小鼠单抗，评估人血清或则血浆中上皮细胞死亡情况。M30 Apoptosense® ELISA 特异性检测在 caspase-cleavage d K18 在 Asp396 形成的新表位（K18Asp396-NE 或者 M30 neo-epitope），反映上皮细胞的凋亡情况（Hägg et al. 2002; Bivén et al. 2003）。两种检测试剂盒的单位根据统一标准校对过，可以计算 caspase-cleaved 和总 K18 (“M30：M65 比例”)。培养细胞诱导细胞凋亡导致 caspase-cleaved K18 释放，M30：M65 比值较高, 然而如果细胞发生死亡，只有 K18 的水平是升高的，所以 M30：M65 比值较低M65 EpiDeath® ELISA 和 M65® ELISA 的区别，请参考相关资料。
M65 EpiDeath® ELISA 是 M65® ELISA 的升级版，用于患者血清/血浆或细胞培养样品中总 CK18 的测定。
特异性 | 人 |
样品类型 | 人血清或血浆、人细胞系的培养上清液或裂解液 |
灵敏度 | 25 U/L |
范围 | 0–5,000 U/L |
检测目标物 | 可溶性 CK18 |
特点 | 可进行定量检测；试剂盒包含两个阳性对照；预铺 ELISA 板，即用试剂，操作方便；可用于自动化 |
稀释线性 | 用 M65 EpiDeath Standard A 稀释，平均值是 95%（范围 88-101%）；用血清释，平均值是 93%（范围82-101%） |
M65 EpiDeath® ELISA 与 M65® ELISA 使用相同的单抗。为了与 M30 Apoptosense® ELISA 匹配, 使用单抗 M5 作为捕获抗体（在 M65® ELISA 使用单抗 M6）。
●M65 EpiDeath® ELISA 可以更好的区分健康人群和病患（患有导致循环角蛋白18（K18）增加的疾病）。这是由于该试剂盒中的抗体有更好的结合特异性，在健康人群中检测到的值更低
●M65 EpiDeath® ELISA 和 M65® ELISA 检测含有 K18 的病患样品，检测值差不多（见图中提供的资料，相关性系数 r² = 0,84）。这些检测的主要区别是用 M65® ELISA检测，检测值在200 – 300 U/L范围内的样品用 M65 EpiDeath® ELISA 检测，检测值<100 U/L 。
●由于 M65 EpiDeath® 和M65® ELISA检测同一样品，检测值不一样，所以如果是特定的实验/项目，只能使用其中一种试剂盒。
●M65 EpiDeath® 的检测范围是 0~5000 U/L， M65® ELISA的检测范围是 125~2000 U/L。
M65 EpiDeath® ELISA和 M30 Apoptosense® ELISA 使用相同的捕获抗体，使用 M30 Apoptosense® 和 M65 EpiDeath® ELISA 检测 “M30：M65 比”（见 Kramer et al., 2004）希望反应细胞死亡形式。有些案例中，用 M30 Apoptosense® ELISA检测，样品的值高于用 M65 EpiDeath® ELISA 检测, 可能反应了表位如何在复合体中递呈。
注意：“M30：M65 比” 只有在 K18 含量提升的样品（比如，用 M65 EpiDeath® ELISA 检测，值>300 U/L ）有意义。(见 Linder et al., Expert Reviews in Molecular Diagnostics 10, 353, 2010).
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