细胞死亡M65® ELISA试剂盒
M65® ELISA
◆原理
M65® ELISA 检测来自死亡细胞释放的可溶性角蛋白18（K18），可以整体评估细胞的死亡情况，判断是由于细胞凋亡还是细胞坏死引起的细胞死亡。M65® ELISA 最初是为了和 M30 Apoptosense® ELISA 配套使用而设计研发的，后者特异性检测细胞凋亡。两者配套使用，可定量检测总的细胞死亡、细胞凋亡和细胞坏死。 由于 M30 Apoptosense® ELISA 和M65® ELISA 都是用同一标准进行校对的，所以可以评估细胞死亡中细胞凋亡占的比例。 M65® ELISA 可用于检测人血清，并且带有 CE 标记（可用于体外诊断）。 |
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◆优点・特色
● 只特异性定量检测上皮细胞整体的死亡情况
● 与 M30 Apoptosense® ELISA 配套使用，定量检测细胞凋亡、细胞坏死和细胞死亡。
● 检测更稳定，特异性更高。
● 夹心法 ELISA 检测，可拆卸的96孔板。试剂即开即用
● 肝脏疾病：检测肝脏疾病患者肝细胞总的死亡情况。可用肝脏疾病检测。
● 肿瘤：监测上皮细胞肿瘤经化疗后肿瘤细胞的死亡情况。
● 毒理学：临床评估不同药物对肝脏细胞的毒性。
◆案例・应用
体内细胞凋亡或者坏死引起肿瘤细胞死亡。细胞死亡的模式取决于细胞毒素刺激的类型和肿瘤的类型。细胞内 ATP 产生缺失通常会引起细胞凋亡，但有时候也会导致细胞坏死 (Leist et al., 1997)。细胞坏死期间，未经 caspase 水解的细胞内蛋白将会释放到细胞外。
角蛋白18（K18）是由很多种上皮细胞高表达的细胞内蛋白。大多数 K18 分子在细胞内是非可溶性的，但也报道有可溶性 K18 池(Chou et al., 1993)。细胞死亡期间，细胞内 K18 会释放到细胞外。检测细胞外可溶性的K18可反映上皮细胞的死亡情况 “过程和原因” (由于细胞凋亡和细胞坏死导致) (Kramer et al., 2004).
K18 在细胞凋亡期间被 caspase 催化发生水解， caspase-cleaved 片段释放到细胞外。因此细胞外的 caspase-cleaved K18（ccK18）浓度反映了细胞凋亡的数量。而且M30:M65 比代表了总细胞死亡中细胞凋亡的比例(不同 “M30:M65 比”) (Kramer et al., 2004).
M65 EpiDeath® ELISA 使用两种IgG型的K18小鼠单抗，评估人血清或则血浆中上皮细胞死亡情况。M30 Apoptosense® ELISA 特异性检测在caspase-cleavage d K18 在Asp396形成的新表位 (K18Asp396-NE 或者M30 neo-epitope) ，反映上皮细胞的凋亡情况(Hägg et al. 2002; Bivén et al. 2003)。两种检测试剂盒的单位根据同一标准校对，可以计算caspase-cleaved 和总K18 (“M30:M65 比例”)。培养细胞诱导细胞凋亡导致caspase-cleaved K18释放，M30:M65 比值较高, 然而如果细胞发生死亡，只有K18的水平是升高的，所以M30:M65 比值较低。
体内或体外实验中，定量检测总的细胞死亡（凋亡和坏死）。与M30 Apoptosense® ELISA kit 联用可以检测上皮细胞凋亡在整个细胞死亡中所占的比例。
◆产品信息
M65® ELISA kit （CE-Mark） 体内，体外实验中，定量检测总的细胞死亡（凋亡和坏死） 。
特异性 | 人 |
样品类型 | 含有从死亡细胞中释放的CK18的血清或者血浆（EDTA，citrate，heparin plasma） |
灵敏度 | 11 U/L, Standard A(0 U/L)+2 S.D. |
范围 | 125-2,000 U/L |
检测目标物 | 完整的CK18和可溶性caspase酶解的CK18（ccCK18/CK18F/CK18Asp396-NE/M30） |
特点 | 可进行定量检测；预铺ELISA 板（可拆卸）、即用试剂，操作方便；可用于自动化 |
稀释线性 | 用M65 Standard A 稀释，平均值是126%（范围116-139%）；用血清稀释，平均 值 是120%（范围101-133%） |
M65 EpiDeath® ELISA 和 M65® ELISA的区别，请参考相关资料。
M65 EpiDeath® ELISA与 M65® ELISA使用相同的单抗。为了与 M30 Apoptosense® ELISA匹配，使用单抗 M5 作为捕获抗体（在M65® ELISA使用单抗M6）。
● M65 EpiDeath® ELISA 可以更好的区分健康人群和病患（患有导致循环角蛋白18（K18）增加的疾病）。这是由于该试剂盒中的抗体有更好的结合特异性，在健康人群中检测到的值更低。
● M65 EpiDeath® ELISA 和 M65® ELISA 检测含有 K18 的病患样品，检测值差不多（见图中提供的资料，相关性系数 r²= 0,84）. 这些检测的主要区别是用 M65® ELISA 检测，检测值在 200–300 U/L 范围内的样品用 M65 EpiDeath® ELISA 检测，检测值<100 U/L 。
● 由于 M65 EpiDeath® 和 M65® ELISA 检测同一样品，检测值不一样，所以如果是特定的实验/项目，只能使用其中一种试剂盒。
● M65 EpiDeath® 的检测范围是 0~5000U/L， M65® ELISA的检测范围是 125~2000U/L。
M65 EpiDeath® ELISA 和 M30 Apoptosense® ELISA 使用相同的捕获抗体，使用 M30 Apoptosense® 和 M65 EpiDeath® ELISA 检测 “M30:M65 比” (见Kramer et al., 2004) 希望反应细胞死亡形式。有些案例中，用 M30 Apoptosense® ELISA 检测，样品的值高于用 M65 EpiDeath® ELISA 检测, 可能反应了表位如何在复合体中递呈。
注意： “M30:M65 比” 只有在 K18 含量提升的样品（比如，用 M65 EpiDeath® ELISA 检测值>300 U/L ）有意义。(见 Linder et al., Expert Reviews in Molecular Diagnostics 10, 353, 2010).
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