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ISOPLANT II
DNA快速提取试剂(植物/酵母/细菌)

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DNA 快速提取试剂(植物/酵母/细菌)



  ISOPLANT II 是可以迅速地从植物・酵母・细菌提取 DNA 的试剂盒。与旧产品 ISOPLANT 一样,利用 Solution II 的主要成分氯化苄,对细胞壁进行破坏,在表面活性剂的作用下,使其溶解。植物组织的多糖及多酚比植物组织多,提取时常混入 DNA 中。这些物质抑制限制性内切酶反应及 PCR,难以对 DNA 进行定量测定。改良后的新产品 ISOPLANT II,可有效去除多糖及多酚等抑制物质。不仅可以从草本植物提取,还可以从难度较大的木本植物提取,提取到的 DNA 可用于 PCR 及限制性内切酶反应。



◆特点


  • 迅速地从植物・酵母・细菌提取基因组 DNA

  • 无需使用臼等工具捣碎材料,便于处理多个样品

  • 经改良,可有效去除抑制物质(多糖及多酚)



◆产品列表


保存方法

  

冷蔵保存(2~10°C)

  若长时间不使用 RNase A ,请冷冻保存(-20°C)。除了 RNase A ,其他产品可以室温保存。


ISOPLANT II (20回分、100回分

产品

容量(20次)

容量(100次)

备注

Wash Buffer

20 mL × 1

100 mL × 1


Solution I

6 mL × 1

30 mL × 1

可能析出白色沉淀,但不影响品质。请进行37°C左右的水浴,待结晶完全溶解后即可放心使用。

Solution II

3 mL × 1

15 mL × 1

主要成分是氯化苄。氯化苄为危险品,请小心使用。

Solution III-A

2 mL × 1

10 mL × 1

Solution III-A为白色悬浊液,蒸发后只剩下白色固相,请使用灭菌蒸馏水溶解。

Solution III-B

2.5 mL × 1

12 mL × 1


TE(pH8.0)

2 mL × 1

10 mL × 1

10 mM Tris-HCl(pH8.0), 1 mM   EDTA

RNase A

(1 mg/mL)

20 µL × 1

100 µL × 1

若长时间不使用RNase A ,请冷冻保存(-20°C)。



◆使用实例


操作流程


植物

酵母、细菌

1-.jpg

2-.jpg



实验数据


1. 使用从植物叶子提取的DNA进行RAPD分析

2. 使用从植物叶子提取的DNA进行制限性内切酶反应

3. 从细菌、酶提取得DNA进行制限性内切酶反应

4. ISOPLANT II与旧产品(ISOPLANT)的纯度比



Data 1:使用从植物叶子提取的 DNA 进行 RAPD 分析


  分别使用各样品 0.1 g 冻结粉碎的叶子的1/100提取到的 DNA ,进行 RAPD 分析。


RAPD-PC

PCR Mixture


PCR条件

Template DNA

1 µL

95°C

3 min.

1 cycle

10×Gene Taq Universal Buffer

5 µL

40°C

5 min.

dNTP Mixture (2.5 mM each)

4 µL

72°C

1 min.

Arbitrary Primer(AP-A-2 primer) (10 µM)

1 µL


Gene Taq (5 units/µL)

0.25 µL

95°C

15 sec.

25 cycles

H2O

38.75 µL

40°C

2 min.

Total Volume

50 µL

72°C

1 min.



72°C

5 min.



结果


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lane 1. 西瓜

lane 2. 黄瓜

lane 3. 南瓜

lane 4. 玉米

lane 5. 水稻

lane 6. 葱

lane 7. 豆子

lane 8. 烟草

lane 9. 菠菜

lane 10. 银杏

lane 11. 苹果

lane 12. 牡蛎

lane 13. 桃

lane 14. 柚子

lane 15. 梅干

lane 16. 梨

M : Marker 4 (φX174/Hae III)

 

   Arbitrary Primer: AP-A-2(TGGATTGGTC)

 Taq DNA polymerase: Gene Taq

 3% Agarose 21



Data 2:使用从植物叶子提取的 DNA 进行制限性内切酶反应


  分别使用各样品 0.1 g 冻结粉碎的叶子的1/20提取到的 DNA,进行制限性内切酶反应(5~20 units)。


4.jpg

lane 1. 烟草

lane 2. 菠菜

lane 3. 胡萝卜

lane 4. 梨

lane 5. 水稻

lane 6. 茶

lane 7. 柚子

lane 8. 苹果

M : Marker 2 (λ/Hind III・EcoR I)

a : intact DNA

b : Hind III digest + RNase A

       0.8% Agarose S 

  •注意事项 提取DNA时进行 NaBH4 处理,获得上述数据。



Data 3:从细菌、酵母提取的 DNA 进行制限性内切酶反应


  分别取 1/20 从 1.5 mL 培养液体提取到的 DNA,进行制限性内切酶反应(5~20 units)。


5.jpg

lane 1. 粘质沙雷氏菌 Serratia marcescens

lane 2. 牛莫拉氏杆菌 Moraxella bovis

lane 3. 流感嗜血杆菌C  Haemophilus influenzae c

lane 4. 普通变形杆菌 Proteus vulgaris

lane 5. 裂殖酵母 Shizosaccharomyces pombe

lane 6. 毕赤酵母 Pichia pastoris

lane 7. 酿酒酵母 Sacaomyces cerevisiae

M : Marker 2 (λ/Hind IIIEcoR I)
a : intact DNA
b : Hind III digest + RNase A
 

       0.8% Agarose S 



Data 4:ISOPLANT II 与旧产品(ISOPLANT)的纯度比较


  使用相同的样本量,分别用 ISOPLANT II 及旧产品(ISOPLANT)从菠菜及苹果叶子提取 DNA,检测吸光度(200~300 nm)


菠菜

苹果

6-.jpg

7-.jpg

  

  使用 ISOPLANT II 提取 DNA,在 260 nm 有峰值。表明 DNA 不含多糖及多酚等夹杂物,纯度较高。



◆备注


  本产品为实验研究用试剂,不可用于医疗或其他用途。

  不了解试剂基本知识的人士请不要使用。



参考文献


[ 1 ] Xing S. and Aharon G.: Analytical Biochemistry, 174, 650-657 (1988)

[ 2 ] C. S. Kim, C. H. Lee, J. S. Shin, Y. S. Chung and N. I. Hyung: Nucleic Acids Res., 25 (5) 1085-1086 (1997)


产品列表
产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 备注
316-04153 ISOPLANT II 20次 - -
310-04151 ISOPLANT II 100次 - -

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