ISOPLANT II
DNA 快速提取试剂（植物/酵母/细菌）
ISOPLANT II 是可以迅速地从植物・酵母・细菌提取 DNA 的试剂盒。与旧产品 ISOPLANT 一样，利用 Solution II 的主要成分氯化苄，对细胞壁进行破坏，在表面活性剂的作用下，使其溶解。植物组织的多糖及多酚比植物组织多，提取时常混入 DNA 中。这些物质抑制限制性内切酶反应及 PCR，难以对 DNA 进行定量测定。改良后的新产品 ISOPLANT II，可有效去除多糖及多酚等抑制物质。不仅可以从草本植物提取，还可以从难度较大的木本植物提取，提取到的 DNA 可用于 PCR 及限制性内切酶反应。
◆特点
• 迅速地从植物・酵母・细菌提取基因组 DNA
• 无需使用臼等工具捣碎材料，便于处理多个样品
• 经改良，可有效去除抑制物质（多糖及多酚）
◆产品列表
保存方法
冷蔵保存（2～10°C）
若长时间不使用 RNase A ，请冷冻保存（-20°C）。除了 RNase A ，其他产品可以室温保存。
ISOPLANT II （20回分、100回分） | |||
产品 | 容量（20次） | 容量（100次） | 备注 |
Wash Buffer | 20 mL × 1 | 100 mL × 1 | |
Solution I | 6 mL × 1 | 30 mL × 1 | 可能析出白色沉淀，但不影响品质。请进行37°C左右的水浴，待结晶完全溶解后即可放心使用。 |
Solution II | 3 mL × 1 | 15 mL × 1 | 主要成分是氯化苄。氯化苄为危险品，请小心使用。 |
Solution III-A | 2 mL × 1 | 10 mL × 1 | Solution III-A为白色悬浊液，蒸发后只剩下白色固相，请使用灭菌蒸馏水溶解。 |
Solution III-B | 2.5 mL × 1 | 12 mL × 1 | |
TE（pH8.0） | 2 mL × 1 | 10 mL × 1 | 10 mM Tris-HCl（pH8.0）, 1 mM EDTA |
RNase A （1 mg/mL） | 20 µL × 1 | 100 µL × 1 | 若长时间不使用RNase A ，请冷冻保存（-20°C）。 |
◆使用实例
操作流程
植物 | 酵母、细菌 |
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实验数据
1. 使用从植物叶子提取的DNA进行RAPD分析
2. 使用从植物叶子提取的DNA进行制限性内切酶反应
4. ISOPLANT II与旧产品（ISOPLANT）的纯度比较
Data 1：使用从植物叶子提取的 DNA 进行 RAPD 分析
分别使用各样品 0.1 g 冻结粉碎的叶子的1/100提取到的 DNA ，进行 RAPD 分析。
RAPD-PC | |||||
PCR Mixture | PCR条件 | ||||
Template DNA | 1 µL | 95°C | 3 min. | 1 cycle | |
10×Gene Taq Universal Buffer | 5 µL | 40°C | 5 min. | ||
dNTP Mixture (2.5 mM each) | 4 µL | 72°C | 1 min. | ||
Arbitrary Primer(AP-A-2 primer) (10 µM) | 1 µL | ||||
Gene Taq (5 units/µL) | 0.25 µL | 95°C | 15 sec. | 25 cycles | |
H2O | 38.75 µL | 40°C | 2 min. | ||
Total Volume | 50 µL | 72°C | 1 min. | ||
72°C | 5 min. | ||||
结果
| lane 1. 西瓜 lane 2. 黄瓜 lane 3. 南瓜 lane 4. 玉米 lane 5. 水稻 lane 6. 葱 lane 7. 豆子 lane 8. 烟草 | lane 9. 菠菜 lane 10. 银杏 lane 11. 苹果 lane 12. 牡蛎 lane 13. 桃 lane 14. 柚子 lane 15. 梅干 lane 16. 梨 |
M : Marker 4 (φX174/Hae III) | ||
Arbitrary Primer: AP-A-2(TGGATTGGTC)
Taq DNA polymerase: Gene Taq
3% Agarose 21
Data 2：使用从植物叶子提取的 DNA 进行制限性内切酶反应
分别使用各样品 0.1 g 冻结粉碎的叶子的1/20提取到的 DNA，进行制限性内切酶反应（5～20 units）。
| lane 1. 烟草 lane 2. 菠菜 lane 3. 胡萝卜 lane 4. 梨 lane 5. 水稻 lane 6. 茶 lane 7. 柚子 lane 8. 苹果 |
M : Marker 2 (λ/Hind III・EcoR I) a : intact DNA b : Hind III digest + RNase A |
0.8% Agarose S
•注意事项 提取DNA时进行 NaBH4 处理，获得上述数据。
Data 3：从细菌、酵母提取的 DNA 进行制限性内切酶反应
分别取 1/20 从 1.5 mL 培养液体提取到的 DNA，进行制限性内切酶反应（5～20 units）。
| lane 1. 粘质沙雷氏菌 Serratia marcescens lane 2. 牛莫拉氏杆菌 Moraxella bovis lane 3. 流感嗜血杆菌C Haemophilus influenzae c lane 4. 普通变形杆菌 Proteus vulgaris lane 5. 裂殖酵母 Shizosaccharomyces pombe lane 6. 毕赤酵母 Pichia pastoris lane 7. 酿酒酵母 Sacaomyces cerevisiae |
M : Marker 2 (λ/Hind III・EcoR I) |
0.8% Agarose S
Data 4：ISOPLANT II 与旧产品（ISOPLANT）的纯度比较
使用相同的样本量，分别用 ISOPLANT II 及旧产品（ISOPLANT）从菠菜及苹果叶子提取 DNA，检测吸光度（200～300 nm）
菠菜 | 苹果 |
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使用 ISOPLANT II 提取 DNA，在 260 nm 有峰值。表明 DNA 不含多糖及多酚等夹杂物，纯度较高。
◆备注
本产品为实验研究用试剂，不可用于医疗或其他用途。
不了解试剂基本知识的人士请不要使用。
参考文献
[ 1 ] Xing S. and Aharon G.: Analytical Biochemistry, 174, 650-657 (1988)
[ 2 ] C. S. Kim, C. H. Lee, J. S. Shin, Y. S. Chung and N. I. Hyung: Nucleic Acids Res., 25 (5) 1085-1086 (1997)
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